蜂膠膠囊增強免疫功能的研究

于榮賢　王祖忠　劉兵　余玉芳　張勇

[摘要]目的：探討蜂膠膠囊對小鼠免疫功能的影響。方法：分別以175、350、700mg/kgBW劑量的蜂膠給小鼠連續(xù)灌胃30d后，對增強免疫能力的功能評價指標進行檢測。結果：蜂膠膠囊能夠明顯提高小鼠細胞免疫功能、體液免疫功能以及小鼠單核一巨噬細胞功能。結論：蜂膠膠囊具有增強免疫力的功能。

[關鍵詞]蜂膠；保健食品；免疫功能

蜂膠，工蜂采集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有粘性的固體膠狀物。近年來，對蜂膠的有效成分和生物學功能的研究取得了很大的進展，人們已從蜂膠中分離鑒定出數(shù)百種活性成分，主要功效成分為黃酮類化合物。根據(jù)中國藥典2015版第一部的介紹，蜂膠主要用于體虛早衰，高脂血癥，外治皮膚皸裂，燒燙傷等。蜂膠作為一種多功能物質，已被開發(fā)成多種保健食品。其中代表性的蜂膠膠囊的開發(fā)為蜂膠在功能保健食品中的應用奠定了基礎，目前國內外對蜂膠膠囊的增強免疫力功能學的研究還不是很多。

本文對蜂膠膠囊進行研究，探討其增強免疫力的功能性。依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版），將蜂膠膠囊設低、中、高3個劑量組，分別相當于人實際用量的5、10和20倍，連續(xù)30天經(jīng)口給予小鼠蜂膠膠囊，研究蜂膠膠囊對小鼠體重、免疫能力的作用，其中免疫力能力包括其對綿羊紅細胞誘導的遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）、免疫器官功能的作用、血清溶血素水平、單核一巨噬細胞吞噬廓清、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能等的影響，并根據(jù)試驗結果分析蜂膠膠囊對機體免疫功能的影響，為蜂膠制品在功能保健食品中的應用推廣提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與試劑

蜂膠膠囊（由深圳市榮格保健品有限公司提供）。

SPF健康成年昆明種雄性小鼠160只，體重為18-22g，廣東省醫(yī)學試驗動物中心提供，合格證號為0053395。

綿羊紅細胞（SRBC）、生理鹽水、二硝基氟苯（DNFC）、Gimsa染液、硝基氯化四氮唑（TNT）、吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）、氧化型輔酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL緩沖液（PH8.2）、0.1%的Na2C03溶液、1%的NP40、印度墨汁、雞紅細胞、甲醇等。

1.2儀器與設備

動物臺秤、電子分析天平、離心機、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、紫外可見分光光度計（UV-2450）、酶標儀等。無菌手術器械、細胞計數(shù)器、玻璃平皿、載玻片、潔凈工作臺、200目篩網(wǎng)、微量注射器、血色素吸管等。

1.3動物試驗分組與劑量設定

選用昆明種雄性小鼠，隨機分為免疫Ⅲ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四組，每組40只。其中免疫Ⅰ組進行遲發(fā)型變態(tài)反應試驗（DTH）；免疫Ⅱ組進行臟/體比值測定，血清溶血素測定；免疫Ⅲ組進行碳廓清試驗；免疫Ⅳ組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。

根據(jù)蜂膠膠囊的人體攝入量（2000mg/人/天，相當于33.3mg/kg.bw），設高、中、低3個劑量組，分別為666、333、166.5mg/kg.bw，即20、10、5倍人體攝入量，一個玉米胚芽油對照組（樣品難溶于水），每組10只小鼠。將蜂膠膠囊根據(jù)不同劑量用玉米胚芽油配成相應濃度，經(jīng)口灌胃，灌胃體積為0.4mL/20g.bw，對照組用等體積玉米胚芽油灌胃，每天一次，連續(xù)飼養(yǎng)30d。

1.4動物試驗指標測定

依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）中的“增強免疫力功能檢驗方法”，分別對試驗小鼠進行二硝基氟苯誘導的遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）試驗（耳腫脹法），臟/體比值測定、血清溶血素測定試驗（血凝法），碳廓清試驗以及小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗（半體內法），并收集相關試驗指標數(shù)據(jù)。

1.5數(shù)據(jù)處理方法

應用SPSS統(tǒng)計軟件對上述數(shù)據(jù)進行方差分析統(tǒng)計處理。

2結果與分析

2.1蜂膠對小鼠臟器/體重比的影響

在表1中可以看出，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蜂膠膠囊30天，小鼠的胸腺/體重以及脾臟/體重比值與陰性對照組相比，均無顯著性差異（P>0.05）。

2.2蜂膠對小鼠細胞免疫功能的影響

從表2可以看出，樣品的各劑量組小鼠的左右耳片重量差值大于對照組，其中的高、中劑量組與對照組相比，有極顯著差異，P<0.01。

2.3蜂膠對小鼠體液免疫功能的影響

從3表中可以看出樣品各劑量小鼠的溶血素抗體積數(shù)均高于對照組，其中高、中劑量組與對照組相比差異極顯著，P<0.01。

2.4蜂膠對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響

從表4可以看出，樣品的各個劑量組小鼠的吞噬指數(shù)均高于對照組，但相比對照組差異均無顯著性（P>0.05），表明該樣品對小鼠的單核一巨噬細胞碳廓清功能沒有明顯的促進作用。

從表5中能夠看到，樣品各個劑量組小鼠的腹腔巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均高于對照組，其中高、中劑量組的吞噬率以及吞噬指數(shù)與對照組的差異具有顯著性（P<0.01或P<0.05），表明該樣品具有促進小鼠的腹腔巨噬細胞的吞噬功能的作用。

3結論

從上述結果可以看出，與對照組相比，蜂膠對小鼠胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、單核一巨噬細胞碳廓清功能均無明顯影響（P>0.05）。高劑量（666mg/kg.bw）與中劑量（333mg/kg.bw）的蜂膠均能明顯提高小鼠細胞免疫功能（遲發(fā)型變態(tài)反應）、體液免疫功能（血清溶血素水平）以及小鼠單核一巨噬細胞功能（腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力）。根據(jù)保健食品增強免疫力功能評價標準，本試驗所用的蜂膠膠囊具有增強免疫力的功能。

本試驗所用劑量水平與張英姿以及韓彥彬分別進行的黃蜂膠和黑蜂膠合用對小鼠免疫功能影響的研究所用基本一致，試驗結果接近，可以說明本試驗的可靠性。而本試驗所驗證的增強免疫力功能是蜂膠保健食品眾多功能熱點之一，本試驗所使用的的榮格牌蜂膠膠囊也僅是目前熱門研究成果之一，未來，高效、高品質和高安全性的蜂膠產(chǎn)品將不斷涌現(xiàn)。