肉羊胚胎移植成活的影響因素實例分析

(1.省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國家重點實驗室/新疆農(nóng)墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子 832000；2.克拉瑪依肉羊研究所，新疆克拉瑪依 834000；3.新疆華牛天俊生物技術有限公司，新疆昌吉 831100)

doi:10.6048/j.issn.1001-4330.2017.11.022

肉羊胚胎移植成活的影響因素實例分析

郭延華1，劉長彬1，萬鵬程1，倪建宏1，王立民1，周 平1，楊永林1，方志忠2，顧宏偉2，付炳哲3，盧全勝3

(1.省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國家重點實驗室/新疆農(nóng)墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子 832000；2.克拉瑪依肉羊研究所，新疆克拉瑪依 834000；3.新疆華牛天俊生物技術有限公司，新疆昌吉 831100)

目的胚胎移植技術是獲得優(yōu)秀種質(zhì)資源的一種重要應用技術，研究影響胚胎存活和妊娠的因素。方法回顧性調(diào)查分析影響胚胎移植后成活的胚胎和受體因素。結(jié)果三種胚胎運輸方式的妊娠率極顯著低于就近移植的妊娠率(P<0.01)；胚胎卵裂期與囊胚期移植妊娠率差異不顯著(P>0.05)，但以 2 細胞移植的妊娠率最低；鮮胚與凍胚的妊娠率差異不顯著(P>0.05)，2 枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率，胚胎妊娠率隨著胚胎質(zhì)量而下降；囊胚與受體同期性差-24 h,妊娠率差異不顯著(P>0.05)；放牧與舍飼的受體羊在胚胎妊娠率方面沒有顯著差異性(P>0.05)。結(jié)論胚胎和受體因素對胚胎發(fā)生成功妊娠具有重要的影響。

綿羊；胚胎；受體；影響因素

0 引 言

【研究意義】目前我國綿羊的地方品種42個，而新疆綿羊的地方品種有13個，居全國之首，但為了提高肉用性能、實現(xiàn)高效集約化以及風味的同質(zhì)化，需要引進薩?？恕⑻召愄?、特克賽爾、杜泊等幾個知名肉羊品種進行雜交改良，良種的引進尤其是胚胎移植技術在種源上起到了關鍵作用?！厩叭搜芯窟M展】F. Baria等[1]研究發(fā)現(xiàn)，胚胎發(fā)育速度、5～6日胚齡、胚胎質(zhì)量和類型對移植妊娠率都具有影響，而且供體品種間胚胎移植妊娠也顯示出差異性。此外權富生等[2]研究發(fā)現(xiàn)運輸方式、受體使用次數(shù)對移植妊娠也具有較大的差異性。而付靜濤等[3]研究受體黃體數(shù)量和胚胎移植數(shù)量對妊娠率都具有顯著的影響。胚胎移植已經(jīng)實現(xiàn)商業(yè)化應用，但在實際生產(chǎn)過程中，各個地區(qū)的受限因素并不相同，也就造成胚胎移植成功率不盡相同。目前有關于受限因素各地區(qū)也不盡相同?！颈狙芯壳腥朦c】試驗以影響胚胎移植的胚胎和受體因素為切入點，通過生物統(tǒng)計學配對樣本和非配對樣本獨立性T檢驗、方差分析，對移植妊娠數(shù)據(jù)進行回顧性調(diào)查分析，以追溯引起妊娠差異的假定因素，評價對胚胎移植妊娠的影響顯著性。【擬解決的關鍵問題】充分發(fā)揮胚胎和受體的潛力，提高肉羊胚胎移植成功率，為實踐進行科學指導，為肉羊品種改良奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試驗羊

供體母羊由澳大利引進的黑頭薩福克和白頭薩?？?、杜泊和道賽特，年齡2～6歲成年母羊，健康，無繁殖疾病。

1.1.2 受體羊

受體羊為2～6歲的小尾寒羊、巴蒙羊、哈薩克羊，新疆軍墾型美利奴羊，均為經(jīng)產(chǎn)母羊，胚胎移植時間均在9～12月進行。試驗基地為克拉瑪依肉羊研究所，昌吉華牛天俊生物技術有限公司，圖木舒克江南牧業(yè)有限公司和新疆農(nóng)墾科學院試驗種羊場。

1.1.3 受體羊的營養(yǎng)

描述方式參照文獻[4]如下，高營養(yǎng)日糧組總量為3.5 kg，日糧結(jié)構(gòu)為青貯1.5 kg、苜蓿草0.5 kg，玉米0.3 kg，玉米秸稈1.2 kg，微量元素為新疆石河子六旺飼料公司生產(chǎn)舔食磚任由羊自行舔食；普通營養(yǎng)日糧組總量為2.5 kg，日糧結(jié)構(gòu)為青貯1.5 kg、苜蓿草0.5 kg、精料和微量元素為大北農(nóng)羊用全價哺乳料0.5 kg；放牧組在超排程序期間進入舍飼，移植后1周繼續(xù)放牧，舍飼營養(yǎng)日糧組總量為2.3 kg，日糧結(jié)構(gòu)為青貯1.5 kg，麥草秸0.5 kg，精料0.3 kg，微量元素等從放牧植被中攝取。

1.1.4 激素藥品與儀器

超排藥物 FSH由加拿大(每支400 mg/20 mL,批號F10244-10140)生產(chǎn)，孕酮海綿栓為寧波激素制品有限公司生產(chǎn)(42 mg/支)，PMSG由寧波激素制品有限公司生產(chǎn)(1000 IU/支，生產(chǎn)批號150312-150315)，胚胎保存液(ICP bio New Zealand)，沖胚液為含0.3% BSA的 PBS(GBICO)液。胚胎程序冷凍儀 CL5500(Cryologic)，體式顯微鏡(SMZ8000)，水浴鍋。

1.2 方 法

1.2.1 同期發(fā)情處理與沖胚

供體羊的同期發(fā)情處理：供體羊埋植孕酮海綿栓，供體在執(zhí)行超排程序的第6針撤栓。撤栓的同時肌肉注射PMSG 500 IU，觀察并記錄發(fā)情情況，在第15 d下午(pm)輸精(artifical inseminiation，AI)，第16 d從輸卵管收集2細胞，第17 d從輸卵管收集4～8細胞胚胎，第21 d從子宮角收集囊胚。圖1

圖1 體內(nèi)胚回收程序
Fig.1 Protocol to embryonic transfer In Vivo embryos

受體羊的同期發(fā)情處理與移植：受體羊埋植孕酮栓11～13 d，比供體羊撤栓早12 h，撤栓的同時肌肉注射PMSG 500 IU，觀察并記錄發(fā)情情況，或者選擇自然周期的受體羊肌肉注射0.1 mg PG，將24～48 h發(fā)情的母羊通過試情公羊挑選出來作為受體。采用常規(guī)手術法移植到受體羊的輸卵管中，腹腔鏡法移植到受體子宮角。

1.2.2 胚胎來源

胚胎分為鮮胚、自制凍胚和進口凍胚。

1.2.3 受胎率統(tǒng)計

胚胎移植完畢后，在妊娠的第45～60 d B超檢查妊娠結(jié)果，懷孕母羊的統(tǒng)計以產(chǎn)羔和流產(chǎn)記錄為準。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行差異顯著性分析。P<0.01 為差異極顯著；0.010.05 為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚胎運輸方式對受體妊娠率的影響

研究表明，三種胚胎運輸方式上，供體運輸、鮮胚運輸和受體運輸?shù)呐咛ト焉锫什町惒伙@著(P>0.05)，但與不運輸?shù)姆绞皆谂咛ト焉锫史矫娌町悩O顯著(P<0.01)，鮮胚運輸?shù)臉藴什畋绕溆嗳M的標準差都大。表1

表1 不同胚胎運輸方式下受體妊娠率變化
Table 1 Effect of embryo transition on pregnancy rate in surrogacy

胚胎運輸方式Targetoftransition供體數(shù)No.Donor胚胎數(shù)No.Embryo受體數(shù)No.Transfers妊娠數(shù)Pregnancies妊娠率(%)Pregnancyrate供體運輸Donortransition1038381026.04±3.57Aa鮮胚運輸Freshembryotransition538381334.21±16.49Aa受體運輸Surrogacytransition52116531.65±2.35Aa不運輸Control11100925358.78±6.69B

注：上標不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，上標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

Note: Values in the same column with different capital superscripts differ significantly (P< 0.01 ),the same letters in the same vertical column means no significant difference between the methods (P>0.05)

2.2 不同發(fā)育時期的胚胎對移植后妊娠率影響

胚胎不同發(fā)育時期的分類為供體人工輸精后的36、48和60 h。2～8細胞期胚胎通過輸卵管回收，囊胚通過子宮角回收。研究表明，胚胎發(fā)育早期2細胞以上至-8細胞沖胚與囊胚沖胚移植，在胚胎妊娠率差方面差異不顯著(P>0.05)，但其中以2細胞進行移植后的妊娠率最低，而4～8細胞移植妊娠率最高。表2

表2 不同發(fā)育時期胚胎下妊娠率變化
Table 2 Effect of embryo development stage on pregnancy rate in surrogacy

胚胎發(fā)育階段Embryodevelopmentstage胚胎數(shù)No.Embryo移植數(shù)No.Transfers妊娠數(shù)Pregnancies妊娠率(%)Pregnancyrate2細胞 Twocells127922732.81±16.15a2-4細胞 Twotofourcells36130413943.18±11.30a4-8細胞 Fourtoeightcells30301649.54±4.80a囊胚 blastocyst2101667843.39±16.29a

注：上標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

Note: the same letters in the same vertical column means no significant difference between the methods (P>0.05)

2.3 胚胎類型，數(shù)量和質(zhì)量等級對受胎率影響

研究表明，根據(jù)胚胎質(zhì)量進行分類(BA、MA和MB)移植受體時，鮮胚組囊胚、A級和B級桑葚胚在妊娠率方面逐漸降低，但差異不顯著(P>0.05)，而C級桑葚胚與前三組差異極顯著(P<0.01)，凍胚組妊娠率方面差異不顯著(P>0.05)。從胚胎質(zhì)量相同，移植數(shù)量差異方面比較，移植2枚胚胎時，桑葚胚移植受體后妊娠率顯示逐漸降低，A級和B級胚妊娠率差異不顯著(P>0.05)，C級胚妊娠率差異極顯著(P<0.01)，但2枚胚胎的妊娠率比移植1枚胚胎的妊娠率高，但差異不顯著(P>0.05)。從胚胎質(zhì)量相同，胚胎數(shù)量相同，胚胎不同類型方面進行比較，凍胚組比鮮胚移植妊娠率有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。表3

2.4 同步性對受體妊娠率的影響

在供體與受體胚胎移植生理同期化時，由于優(yōu)質(zhì)囊胚胚胎數(shù)量超出受體數(shù)量，因此選擇部分受體提前24 h進行胚胎。研究表明，提前移植的受體在胚胎妊娠率方面與同期化受體胚胎妊娠率差異不顯著(P>0.05)。表4

2.5 不同飼養(yǎng)方式對受體妊娠率的影響

在繁殖季節(jié)，放牧組受體在胚胎移植前，進行自然放牧，待胚胎移植手術傷口恢復完后仍然進行放牧，至妊娠后期進行全舍飼；圈舍飼養(yǎng)(配合飼料)組的日糧組成為青貯，苜蓿草粉和大北農(nóng)母羊哺乳預混料。圈舍飼養(yǎng)(自制飼料)組的日齡組成為青貯，苜蓿草粉，玉米秸稈，玉米和六旺添食磚。受體在不同的飼養(yǎng)條件下移植胚胎，在胚胎妊娠率方面差異不顯著(P>0.05)。表5

表3 不同胚胎類型，數(shù)量和質(zhì)量等級下受胎率變化
Table 3 Effect of the type, number and quality of embryo transferred on pregnancy rate in surrogacy

胚胎類型Typeofembryo胚胎數(shù)量No.embryo胚胎質(zhì)量Qualityofembryo移植數(shù)No.transfers妊娠數(shù)Pregnancies妊娠率(%)Pregnancyrate鮮胚Fresh12BA362158.33±3.92AaMA823643.90±3.45AacMB502040.00±5.65AacMC21418.33±2.35BcBA5483.33±23.57aMA251455.77±8.16AacMB23634.31±1.39AbcMC23825.84±1.18Bc自制凍胚OPS1BA10550.00±14.14aMA351542.56%±1.27a凍胚Freeze1BA17735352.94%±14.44a

注：上標不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，上標不同小寫字母表示差異顯著(0.010.05)

Note: Values in the same column with different capital superscripts differ significantly (P< 0.01 ), Values in the same column with different lowercase superscripts differ significantly (0.010.05)

表4 同步性下受體妊娠率變化
Table 4 The relationship between surrogacy pregnancy rate and recipient synchronization

同期化程度Synchronization移植數(shù)No.transfers妊娠數(shù)Pregnancies妊娠率(%)Pregnancyrate-24h201053.57±5.04a01185748.31±12.44a

注：上標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

Note: the same letters in the same vertical column means no significant difference between the methods (P>0.05)

表5 不同飼養(yǎng)方式下受體妊娠率變化
Table 5 The relationship between on Pregnancy rate in different ration requirement of surrogacy

飼料結(jié)構(gòu)Treatgroup移植數(shù)No.transfers妊娠數(shù)Pregnancies妊娠率(%)Pregnancyrate放牧Graze904245.65±6.15a配合飼料組2.5kgModerateration1788949.74±11.14a自制飼料組3.5kgHigherration33415542.48±0.52a

注：上標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

Note: the same letters in the same vertical column means no significant difference between the methods (P>0.05)

3 討 論

胚胎能否發(fā)生妊娠，在人類輔助生殖中已經(jīng)有很多評估方法[5-7]，但在動物胚胎移植中，仍然從胚胎和受體兩類因素考慮，即胚胎的發(fā)育速度、胚齡、質(zhì)量、類型、數(shù)量、運輸方式和受體的品種、年齡、同期化程度、黃體數(shù)、使用次數(shù)和營養(yǎng)水平等等。

3.1 胚胎運輸方式對受體妊娠率的影響

供體與受體進行異地飼養(yǎng)的情況偶有發(fā)生，比較了供體運輸、胚胎運輸、受體運輸與就地移植鮮胚的妊娠效果，結(jié)果表明，供體運輸、鮮胚運輸和受體運輸之間的移植妊娠率沒有顯著差異性，但都比不運輸就地移植的方式低。通過資料回顧性調(diào)查發(fā)現(xiàn)，供體運輸是發(fā)生在超排輸精程序執(zhí)行完畢后3 d進行的運輸，受體的運輸是發(fā)生在受體撤栓完畢后進行的，結(jié)果說明該種運輸方式對供體和受體是有影響的，相比于權富生等[2]的研究，受體應當在囊胚移植期進行運輸而減少對受體的應激刺激。綿羊的發(fā)情周期(17 d)相對于山羊(21 d)短4 d，在綿羊發(fā)情排卵LH高峰后的22～24 h，即發(fā)情開始后的3～3.5 d是形成功能黃體的重要時期，因此無論供體還是受體運輸刺激均會容易引起黃體的退化和胚胎質(zhì)量的下降[8-9]，應當采用子宮角法6.5～7 d回收胚胎。進行胚胎運輸相比于供體和受體運輸來說，減少了對供體和受體的應激刺激，試驗妊娠結(jié)果也能說明這一點，但鮮胚運輸?shù)臉藴什畋绕溆嗳M的標準差都大，說明胚胎保存條件至關重要，不僅受到溫度的限制，而且也受到胚胎沖出后移植時間的影響[10]。通過回顧性調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)，胚胎保存在便攜式培養(yǎng)箱中的四孔板中具有一定的局限性，而權富生等[7]使用麥管保存運輸更值得借鑒，或利用中間受體[11]攜帶胚胎，在到達移植地區(qū)再行取出進行胚胎移植而不影響胚胎存活與后期妊娠。

3.2 不同發(fā)育時期的胚胎對移植后妊娠率影響

在繁殖季節(jié)，有些胚胎工程技術人員通常會跨地區(qū)進行多個地點的胚胎移植任務，而移植時間就成了制約因素，因此根據(jù)胚胎發(fā)育的時間[12]，選擇不同發(fā)育階段的胚胎進行鮮胚移植以保證妊娠效果就顯得十分必要。試驗結(jié)果表明，胚胎在2細胞組、2～4細胞組、4～8細胞組、囊胚期組的胚胎妊娠率差異不顯著，該研究結(jié)果與張果平等[13]的研究結(jié)果基本一致，但其中以2細胞進行移植妊娠率最低，而4～8細胞移植妊娠率最高，這在張立等[10]在多地區(qū)的移植結(jié)果基本相似。通過對移植資料和產(chǎn)羔記錄的回顧性調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)2細胞期胚胎剛從原核期完成分裂，且仍具有部分尚未分裂的胚胎，推測這是由于未給予原核期胚胎充分的受精和發(fā)育時間，大大降低了胚胎妊娠率。另外在受體移植時，綿羊卵巢排卵形成紅體很脆弱，容易出血，手術過程稍微不慎就會破壞紅體，繼而影響移植后的胚胎發(fā)育，因此認為應當避免2細胞期胚胎的移植，應當選擇4～8細胞期胚胎進行移植更加合理有效。

3.3 胚胎類型，數(shù)量和質(zhì)量等級對移植后妊娠率的影響

目前在胚胎移植妊娠率方面普遍形成的共識為鮮胚高于或等于凍胚，移植數(shù)多的高于移植數(shù)量少的，質(zhì)量高的優(yōu)于質(zhì)量差的。研究表明鮮胚組高于自制凍胚和進口凍胚組，這與S. Papadopoulos[13]的研究結(jié)果相一致。在該試驗中除了自制凍胚組移植數(shù)量較少，無法充分說明之外，進口凍胚妊娠標準差顯示高于鮮胚組，這表明囊胚冷凍前后發(fā)生較大的差異，因此自制凍胚除了注意胚胎冷凍方法之外，還應考慮囊胚質(zhì)量評價。這不僅需要參考以往的胚胎質(zhì)量評價方法[14]，還應當借鑒新的囊胚質(zhì)量評價[15]方法，依據(jù)不同形態(tài)期囊胚以確定移植胚胎與受體的生理同期性和時間同期性，達到最佳的移植效果。

在胚胎移植數(shù)量方面，試驗表明2枚胚胎的移植妊娠率高于1枚胚胎的移植妊娠率，但這種移植妊娠率并沒有表現(xiàn)出倍數(shù)關系，這在Brown[16]等的研究中也有相關報道。但不論是1枚還是2枚桑葚C級(MC)胚均達不到30%以上的妊娠率，而1枚或2枚MB胚胎也只能達到30%～40 % 妊娠率，這就需要改變移植方案以滿足移植要求。

在胚胎移植質(zhì)量方面，研究表明，移植胚胎隨著質(zhì)量下降，妊娠率也有逐級下降的趨勢，這說明高等級質(zhì)量的胚胎比低質(zhì)量等級的胚胎更具有優(yōu)勢調(diào)節(jié)并適應子宮內(nèi)環(huán)境，這與F. Baria等報道[1,17]相一致，但對胚齡從日齡上的劃分我們會發(fā)現(xiàn)同一供體會有不同發(fā)育階段的胚胎，這種胚胎發(fā)育階段的非整齊性除了受到卵子受精自身質(zhì)量的影響[18]之外，還與發(fā)情排卵的時間差有關聯(lián)，即2～5 mm的卵泡生長從12～24 h至48 h到達排卵階段大約在48～60 h，會出現(xiàn)6～12 h的卵泡排卵時間差[8]，因此為了提高胚胎的質(zhì)量以促進胚胎妊娠不僅需要考慮供體肉羊的內(nèi)外和外在影響因素[19]，也要兼顧飼養(yǎng)管理[20]以更好的發(fā)揮肉羊遺傳資源效應。

3.4 胚胎同步性對受體妊娠率的影響

在胚胎移植中，胚胎數(shù)量超出受體數(shù)量時除了進行雙胚移植外，也會選擇同期化程度間隔較小的受體進行移植，尤其是對于高質(zhì)量等級的胚胎。Carey Satterfield等[21]研究綿羊供體與受體發(fā)情時間不同步對受胎率的影響，結(jié)果表明，同步發(fā)情的受胎率極顯著高于3、12 d的結(jié)果，因此子宮內(nèi)環(huán)境接收同步胚齡的時間是相對的。研究表明囊胚比同期受體提前24 h并不影響胚胎的受胎率，而陳童等[22]的研究表明±24 h與 0 h是有顯著差異性的，而Sun Shangxin等[23]指出，供體與受體發(fā)情時間差不應超過 ±12 h，而超過48 h將幾乎無法受孕，因此相差±24 h受胎率是否受到影響及程度問題，除了在研究中樣本數(shù)少有失客觀之外，還應考慮胚齡與質(zhì)量問題，但多數(shù)學者[18,23]認為供體與受體發(fā)情時間差不宜超過 ±12 h，最大不超過 ±24 h，避免受胎率明顯下降。

3.5 不同飼養(yǎng)方式對受體妊娠率的影響

多數(shù)學者認為，飼養(yǎng)管理好、膘肥體壯的受體更符合移植要求，且受胎率和產(chǎn)羔(犢)率都明顯高于飼養(yǎng)條件差的受體，但在牧區(qū)尤其是在綿羊品種居首的新疆地區(qū)，放牧綿羊的飼喂仍然與草原植被息息相關，且膘情表現(xiàn)出明顯的植被生長季節(jié)性。試驗比較了放牧組受體與不同圈舍飼喂條件組胚胎移植的妊娠率，結(jié)果表明，放牧組與其余組無顯著差異，表明放牧條件下的受體能夠滿足胚胎移植條件，不受影響，這與何振富等[24]的研究結(jié)果相一致。受體營養(yǎng)不良會對移植的胚胎產(chǎn)生不利影響[25]，但也僅限于胚胎植入前，而對植入期(preimplantation)的胚胎不會造成流產(chǎn)[26]，只會影響新生動物的生殖機能與新生健康問題，此外在粗飼料、青綠飼料、青貯飼料、礦物質(zhì)飼料、維生素飼料和添加劑等6類飼料差異中，粗蛋白也只能對供體胚胎產(chǎn)生不利影響[27]，而對受體移植胚胎并不能產(chǎn)生影響，VE缺乏和礦物元素磷的缺乏與過量都不利于胚胎的妊娠與新生動物的生存質(zhì)量，因此在繁殖季節(jié)，放牧條件下的受體能夠獲得充分的營養(yǎng)，能夠滿足胚胎移植要求，與舍飼飼養(yǎng)受體進行胚胎移植，在妊娠率方面沒有差異性。

4 結(jié) 論

三種胚胎運輸方式即供體運輸、受體運輸在早期胚胎卵裂階段進行胚胎移植不利于胚胎后期植入妊娠，但為保證能夠進行胚胎移植，遠途運輸胚胎的保存條件將至關重要。早期卵裂胚胎與囊胚移植妊娠率無顯著差異，但不推薦使用胚胎期2細胞進行移植，尤其是同時多地區(qū)進行胚胎移植。鮮胚與凍胚移植妊娠率無顯著差異，但為避免妊娠率差異較大，應當注意胚胎冷凍程序和胚胎質(zhì)量；胚胎移植2枚的妊娠率高于1枚的妊娠率，胚胎妊娠率隨著胚胎質(zhì)量下降而有降低的趨勢，尤其應當注意C級胚胎的移植數(shù)量策略。受體與囊胚期胚胎移植數(shù)量不對等時，可考慮同期性差 -24 h的受體進行移植。繁殖季節(jié)放牧的受體羊能滿足胚胎移植要求，不影響妊娠。

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CaseStudyontheFactorsInfluencingtheSurvivalofMuttonSheepEmbryoTransfer

GUO Yan-hua1, LIU Chang-bin1, WAN Peng-cheng1, NI Jian-hong1, WANG Li-min1, ZHOU Ping1,YANG Yong-lin1, FANG Zhi-zhong2, GU Hong-wei2, FU Bing-zhe3, LU Quan-sheng3

(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,XinjiangAcademyofAgriculturalandReclamationSciences/StateKeyLaboratoryofSheepGeneticImprovementandHealthyProduction,ShiheziXinjiang832000China; 2.TheSheepResearchInstituteofKaramay,KaramayXinjiang834000,China;3.XinjiangHuaniuTianjunLivestockBreedingEngineeringCo.Ltd.,ChangjiXinjiang831100,China)

ObjectiveMultiple ovulation and embryo transfer (MOET) technology is an important technique for obtaining excellent germplasm resources, but many factors affect embryo survival and pregnancy, and a large amount of data is needed to support it. The purpose of this study is to investigate the influence of embryonic and receptor factors on survival after embryo transfer.MethodA retrospective survey about embryonic and recipient factors on the survival rate of transferred embryo was done in our application in mutton sheep.ResultThese results showed that the remote transition of donor, recipient and fresh embryo were adverse to gestation than on site transition (P<0.01). There was no significant difference on pregnancy between embryonic cleavage and blastocyst stage(P>0.05), but the rate of pregnancy with two cell transplantation on the embryonic cleavage stage was the lowest. And it was the same to embryo survival and recipient pregnancy rates after transfer of the fresh and vitrified in vitro produced ovine blastocysts (P>0.05). The pregnancy rate of 2 embryos was higher than that of 1 embryo. The rate of embryo pregnancy decreased with the quality of embryo. The recipient pregnancy rate was not be affected by the blastocysts earlier than the synchronizing recipient on 24 hours after embryonic transfer (P>0.05). There was no significant difference in the receptor pregnancy rate between the grazing and feeding sheep embryos (P>0.05).ConclusionThese results confirm that both embryonic and recipient factors play an important role in the success after embryo transfer in sheep.

sheep; embryo; recipient; factors

Supported by: The Academician fund of Xinjiang Production and Construction Corps "Optimization of high efficiency MOET production and receptor processing in sheep" (2013BB023); Programs of tackling key scientific problems and achievements transformation of XPCC "Breeding of new varieties and innovation of germplasm resources (superfine wool sheep)" (2016AC027) ; National Natural Scientific Foundation of China "Study on the transcriptome analysis and cytoplasmic maturation of lamb mature oocytes in vitro" (31160460)

Wan Peng-cheng (1977-) male, native place: Kasha, Xinjiang. Researcher, research field: ovine embryo engineering g.(E-mail) pengcheng.wan@gmail.com

Liu Chang-bin(1977-),male, native place: Yucheng, Henan. Associate Researcher, research field: Bovine and ovine embryo engineering.(E-mail)406271412@qq.com

S826.8

A

1001-4330(2017)11-2138-08

2017-07-24

兵團院士基金“綿羊高效MOET生產(chǎn)及受體處理程序優(yōu)化研究”(2013BB023)；兵團科技攻關與成果轉(zhuǎn)化計劃項目“新品種選育與種質(zhì)資源創(chuàng)新(超細毛羊)”(2016AC027)；國家自然科學基金“基于羔羊體外成熟卵母細胞轉(zhuǎn)錄組分析及核質(zhì)成熟相關機制研究”(31160460)

郭延華(1983-)，男，新疆喀什人，助理研究員，碩士，研究方向為動物遺傳育種與繁殖，(E-mail)guoyanhuatlr@sohu.com

萬鵬程(1977-)，男，新疆喀什人，研究員，研究方向為羊胚胎工程，(E-mail)pengcheng.wan@gmail.com

劉長彬(1977-)，男，河南虞城人，副研究員，研究方向為牛羊胚胎工程，(E-mail)406271412@qq.com