兩種產(chǎn)前血清學(xué)篩查系統(tǒng)的可比性研究

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 1.檢驗科；2.產(chǎn)前診斷中心，安徽 蕪湖 241001)

·臨床醫(yī)學(xué)·

兩種產(chǎn)前血清學(xué)篩查系統(tǒng)的可比性研究

許 芳1，張 敏1，王玉萍1，付 夏1，朱 翔1，凌 利2，武其文1

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 1.檢驗科；2.產(chǎn)前診斷中心，安徽 蕪湖 241001)

目的：探討兩種檢測系統(tǒng)對血清學(xué)產(chǎn)前篩查標志物甲胎蛋白(AFP)、游離β-人絨毛膜促性腺激素(free-β-HCG)檢測結(jié)果的可比性和唐氏綜合征篩查檢出率，評價兩種系統(tǒng)篩查結(jié)果是否具有一致性。方法選取60例中孕期婦女血清標本，分成2份，分別利用廣州豐華TALENT Ⅱ型篩查系統(tǒng)和PE公司Auto DELFIA1235篩查系統(tǒng)進行血清標記物AFP和free-β-HCG的檢測，利用系統(tǒng)自帶的篩查軟件分別計算評估胎兒患唐氏綜合征的風(fēng)險值，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果兩種篩查系統(tǒng)測定AFP、free-β-HCG的結(jié)果經(jīng)配對t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，兩系統(tǒng)檢查結(jié)果的相關(guān)系數(shù)(r)均>0.985(P<0.001),偏倚在允許范圍。兩種系統(tǒng)唐氏綜合征篩查陽性結(jié)果按臨界風(fēng)險、高風(fēng)險分豐華系統(tǒng)為9例和5例，PE系統(tǒng)為13例和5例，經(jīng)秩和檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩種篩查系統(tǒng)對唐氏綜合征的檢出率，豐華為2例，PE為3例，經(jīng)McNemar χ2檢驗差異無統(tǒng)計意義(P>0.05)。結(jié)論兩種篩查系統(tǒng)盡管檢測方法原理不盡相同，但篩查結(jié)果基本一致，本科室使用的國產(chǎn)血清學(xué)篩查系統(tǒng)能滿足臨床需要。

產(chǎn)前篩查；時間分辨免疫熒光法；唐氏綜合征；甲胎蛋白；游離β-人絨毛膜促性腺激素;可比性實驗

唐氏綜合征又稱21-三體綜合征，患兒臨床特征主要表現(xiàn)為智力低下、眼距增寬、多發(fā)器官畸形和功能障礙，且目前該病缺乏有效的治療方法，產(chǎn)前篩查是降低發(fā)病率的重要手段[1]。中孕期血清學(xué)產(chǎn)前篩查主要通過檢測母體血清標記物AFP、β-HCG、uE3等對胎兒唐氏綜合征風(fēng)險進行評估。當前，臨床實驗室以PE公司產(chǎn)前篩查系統(tǒng)市場占有率較高。近年來以廣州豐華為代表的國產(chǎn)血清學(xué)篩查系統(tǒng)因其價格相對低廉，在一些實驗室迅速開展。本文針對目前廣泛使用的兩種代表性篩查系統(tǒng)(PE公司的AutoDELFIA1235系統(tǒng)和豐華TALENT II型系統(tǒng))進行對比研究，參照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(CLSI)制定的EP9-A2文件，用中孕期孕婦血清標本對產(chǎn)前篩查指標的測定值進行相關(guān)分析和偏倚評估，并對唐氏綜合征的篩查結(jié)果作比較研究，探討兩種系統(tǒng)間檢測結(jié)果是否具有一致性及其臨床應(yīng)用價值。

1 資料和方法

1.1 研究對象 篩查對象為2016年1～12月在弋磯山醫(yī)院產(chǎn)前診斷門診行產(chǎn)前檢查的孕婦60例，年齡20～40歲，孕周14～20周。前來就診的孕婦均由婦產(chǎn)科醫(yī)師當面講解產(chǎn)前篩查的意義，說明篩查的價值與局限性，自愿接受篩查，并簽署知情同意書。取出篩查對象在-20℃中凍存的血清樣本，每例分裝成2份。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 廣州豐華生物有限公司TALENT Ⅱ型時間分辨免疫熒光分析儀、芬蘭Perkin Elmer Wallac公司的Auto DELFIA1235時間分辨免疫熒光分析儀，檢測前血清保存于-20℃冰箱中，于1周內(nèi)完成檢測。試劑分別為各自配套的試劑。質(zhì)控品均為BIO-RAD公司的低值、中值、高值3個不同濃度質(zhì)控血清，批號為39171、39172、39173；篩查評估軟件分別為豐華系統(tǒng)自帶的PRsoft 2.0、PE系統(tǒng)自帶的2T-RISK。

1.2.2 檢測方法 將標本及質(zhì)控品在兩種篩查系統(tǒng)的常規(guī)工作狀態(tài)下檢測，每份標本都用參考系統(tǒng)(X)和對比系統(tǒng)(Y)各自進行雙孔測定,用分析評估軟件計算唐氏綜合征的風(fēng)險值，實驗過程嚴格按照說明書進行操作。篩查指標為血清學(xué)二聯(lián)法檢測AFP 和free-β-HCG的濃度。

1.2.3 標本離群值檢查 嚴格按照EP9-A2文件要求進行方法內(nèi)及方法間離群值檢查。若各標本2次測定結(jié)果的差值的絕對值小于4倍差值絕對值的均值，則認為方法內(nèi)及方法間無離群值。

1.2.4 線性回歸分析 參照CLSI EP9-A2評價方案，計算每個樣本兩種系統(tǒng)雙孔測定結(jié)果的均值，以PE系統(tǒng)檢測值為X軸，豐華系統(tǒng)檢測值為Y軸，進行線性分析，計算線性回歸方程Y=bX+a。參考篩查系統(tǒng)(X)的范圍是否合理,可用相關(guān)系數(shù)(r)做估算,如r≥0.975,則認為X的分布范圍適用,可用直線回歸計算b、a。

1.3 判斷標準 兩種系統(tǒng)分別依據(jù)測定的AFP和free-β-HCG的濃度利用各自評估軟件計算相應(yīng)指標的中位數(shù)倍數(shù)(MOM值)，并結(jié)合孕婦的出生日期、末次月經(jīng)、體質(zhì)量等數(shù)據(jù)評估唐氏綜合征的發(fā)病風(fēng)險。結(jié)果報告唐氏高風(fēng)險切割值為≤1/270，臨界風(fēng)險值為1/270～1/1000。

2 結(jié)果

2.2 兩種篩查系統(tǒng)測定AFP、free-β-HCG結(jié)果 經(jīng)配對t檢驗，兩種篩查系統(tǒng)結(jié)果間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。以PE檢測系統(tǒng)測定值(X)為參照，對豐華檢測系統(tǒng)結(jié)果(Y)進行回歸統(tǒng)計得到的回歸方程分別是Y1=1.039X1+0.997(AFP)(r1=0.989,P<0.01),Y2=0.967X2-0.564(free-β-HCG)(r2=0.994,P<0.01),均符合EP9-A2文件要求(r≥0.975或r2≥0.95)，提示豐華、PE兩系統(tǒng)測定AFP、free-β-HCG的濃度達到足夠的寬度，分布范圍適用，見表1，圖1、2顯示兩系統(tǒng)檢測結(jié)果線性良好。

表1 兩種篩查系統(tǒng)測定AFP、free-β-HCG結(jié)果比較

項目AFP/(U/mL)free?β?HCG/(ng/mL)豐華38．44±19．6125．78±20．44PE36．05±18．6727．24±20．53t6．0904．897P0．0000．000

2.3 偏倚評估 由表2可見AFP、free-β-HCG的Bc符合美國臨床實驗室改進法案修正案(CLIA′88)室間質(zhì)評允許誤差的1/2的標準(可接受偏倚大于Bc的95%可信區(qū)間上限或可接受偏倚介于Bc的95%可信區(qū)間內(nèi)),表明實驗結(jié)果尚在臨床可接受范圍內(nèi)。

圖1 兩種系統(tǒng)AFP值線性分析

圖2 兩種系統(tǒng)free-β-HCG值線性分析

表2 兩種系統(tǒng)檢測AFP、free-β-HCG Bc及Bc的95%可信區(qū)間

項目均值可接受偏倚(±10%)BcBc的95%可信區(qū)間下限上限AFP9．00．91．03-0．622．6828．02．81．11-0．472．6966．06．61．25-0．622．66free?β?HCG545．4-0．74-1．570．0916116．1-1．09-1．74-0．4420020-1．22-1．83-0．61

2.4 兩種檢測系統(tǒng)唐氏綜合征高風(fēng)險陽性率、檢出率比較 經(jīng)相關(guān)統(tǒng)計分析，兩種檢測系統(tǒng)唐氏綜合征高風(fēng)險陽性率、檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表3、4。

表3 兩種篩查系統(tǒng)唐氏綜合征篩查陽性結(jié)果比較

風(fēng)險等級豐華PE低風(fēng)險4642臨界風(fēng)險913高風(fēng)險55

注：經(jīng)秩和檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表4 兩種篩查系統(tǒng)唐氏綜合征檢出率比較

豐華PE+-合計+202-15758合計35760

注：P=1.000，唐氏綜合征檢出率運用的檢測方法：羊水穿刺。

3 討論

目前臨床不同實驗室之間產(chǎn)前篩查檢測結(jié)果多有差異，多項基于不同儀器產(chǎn)前篩查結(jié)果可比性研究[3-4]顯示，不同型號儀器檢測AFP、HCG的結(jié)果存在差異。本研究結(jié)果顯示豐華系統(tǒng)檢測AFP結(jié)果高于PE系統(tǒng)(P<0.001)，free-β-HCG的結(jié)果低于PE系統(tǒng)(P<0.001)。鑒于各設(shè)備在測定AFP、free-β-HCG結(jié)果的準確度、精密度有所差異，本實驗對PE系統(tǒng)和豐華系統(tǒng)檢測中孕期產(chǎn)婦AFP、free-β-HCG進行方法學(xué)比對和偏倚分析，以評估其臨床可接受性[5]。

方法學(xué)比對試驗是實現(xiàn)檢測結(jié)果準確度溯源和患者標本檢驗結(jié)果可比性的重要途徑。偏倚是指系統(tǒng)誤差，EP9-A2是分析評估系統(tǒng)偏倚的重要參考文件，主要用于不同儀器、試劑、方法檢測同一標本時結(jié)果的偏倚評估和對比分析，目前在臨床檢驗室各檢驗項目結(jié)果比對方面應(yīng)用廣泛[6-7]。然而AFP、free-β-HCG在中孕期孕婦個體內(nèi)和個體間的生物學(xué)變異較大,目前尚無相關(guān)文獻專門報道過其醫(yī)學(xué)決定水平，但有關(guān)文獻指出比較兩種方法的允許誤差并非只能單獨應(yīng)用醫(yī)學(xué)允許誤差的標準來評估精密度是否可接受[8]，也可選用廠家說明書注明的參考值范圍及其檢測上限作為閾值進行分析比較[9]。

本研究參照EP9-A2文件采用廠家質(zhì)控說明書的均值作為臨界點進行比較,對兩種檢測系統(tǒng)測定AFP、free-β-HCG結(jié)果進行比對和偏倚評估。研究結(jié)果表明可采用廠家質(zhì)控說明書的均值處的預(yù)期偏倚來判斷豐華、PE系統(tǒng)檢測AFP、free-β-HCG結(jié)果是否具有可比性(r>0.985,P<0.001)；AFP、free-β-HCG的Bc符合規(guī)定標準，實驗結(jié)果在臨床接受范圍內(nèi)，即兩方法結(jié)果的偏倚均能被臨床認可，不會導(dǎo)致臨床醫(yī)生在依據(jù)檢驗結(jié)果進行疾病診斷和治療時產(chǎn)生嚴重后果[10]。兩種系統(tǒng)分別對60例標本進行檢測，檢出唐氏高風(fēng)險數(shù)分別為豐華2例、PE 3例，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。值得注意的是，本研究PE系統(tǒng)中1例唐氏臨界風(fēng)險者經(jīng)羊水穿刺確診為21-三體綜合征，這就要求我們在產(chǎn)前篩查中要納入臨界風(fēng)險值，并且當出現(xiàn)臨界風(fēng)險時，要引起重視，以免漏診。

綜上，兩種篩查系統(tǒng)雖然檢測方法不盡相同，但篩查結(jié)果符合臨床要求，此外兩種篩查系統(tǒng)間仍存在系統(tǒng)誤差，需加強檢驗前、檢驗中、檢驗后的質(zhì)量控制。

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Comparativeanalysisofthetwoprenatalserologicalscreeningsystems

XUFang，ZHANGMin，WANGYuping,FUXia,ZHUXiang,LINGLi,WUQiwen

Clinical Laboratory, The First Affiliated Hospital of Wannan Medical College, Wuhu 241001,China

Objective：To evaluate the comparability, consistency and positive detection rate of test results of human serum α-fetoprotein(AFP) and free-β- Human chorionic gonadotropin(HCG) by two detection systems in screening Down′s syndrome.Methods:The serum samples collected from 60 women in middle pregnancy were randomly divided into two groups. Samples in one group were detected with TALENT II system manufactured by Guangzhou Fenghua Biotechnology Co. Ltd(Fenghua system),and those in another with AutoDELFIA1235 system supplied by Finland Perkin Elmer Wallac(PE system). Both the AFP and free-β-HCG levels were measured and calculated with the software equipped with the system itself to estimate the risk values of Down′s syndrome,and the results were statistically analyzed.Results:Paired t-test indicated difference between the two systems concerning the measured serum AFP and free-β-HCG levels(P<0.001).The correlation coefficient(r)was>0.985,yet the bias was within allowable scope.The critical and high risks for Down′s syndrome were 9 and 5 cases,13 and 5 cases respectively by Fenghua system and the PE system,with no significant difference by rank-sum test(P>0.05).Fenghuan system and PE system revealed Down′s syndrome in 2 and 3 cases,respectively,yet the difference was not significant by McNemar′s test (P>0.05).Conclusion: The two kinds of screening system are different in principles,yet the two systems can lead to similar results,suggesting that the domestic instrument used in our laboratory may meet the clinical needs in prenatal screening.

prenatal screening; time-resolved fluoroimmunoassay;Down′s syndrome;AFP;free-β-HCG;comparative study

1002-0217(2017)06-0570-04

弋磯山醫(yī)院人才引進項目(YR200904);弋磯山醫(yī)院三新項目(Z1608)

2017-04-23

許 芳(1991-)，女，2015級碩士研究生，(電話)18895362636，(電子信箱)18895362636@163.com；

武其文，男，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)yjslab@163.com，通信作者。

R 714

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2017.06.018