Hg對(duì)錦州灣表層沉積物異養(yǎng)細(xì)菌代謝酶活性的影響研究

徐慶彤, 劉瑞志, 郭小雅, 李 捷, 雷 坤, 劉慶慶, 郝晨林

?

Hg對(duì)錦州灣表層沉積物異養(yǎng)細(xì)菌代謝酶活性的影響研究

徐慶彤1, 2, 劉瑞志2, 郭小雅3, 李 捷1, 雷 坤2, 劉慶慶2, 郝晨林2

(1. 青島理工大學(xué) 環(huán)境與市政工程學(xué)院, 山東 青島 266033; 2. 中國環(huán)境科學(xué)研究院 環(huán)境基準(zhǔn)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100012; 3. 山東省膠東調(diào)水局, 山東 青島 266033)

為了解重金屬Hg對(duì)錦州灣海域表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌的主要代謝酶的影響, 采用Hakanson潛在生態(tài)危害指數(shù)法對(duì)錦州灣表層沉積物中重金屬Hg開展?jié)撛谏鷳B(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià), 利用平板擴(kuò)散法測(cè)定了9個(gè)站位沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌四種水解酶活性。結(jié)果顯示: 錦州灣海域表層沉積物中重金屬污染嚴(yán)重, Hg的含量和潛在生態(tài)危害河口最為嚴(yán)重, 向外逐步遞減, 表明本海域表層沉積物中的Hg主要由陸源輸入; 表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性與抗性異養(yǎng)菌比例均表現(xiàn)為西南部河口區(qū)高于東北部外海海域, 與重金屬Hg的含量分布及Hakanson潛在生態(tài)危害指數(shù)基本相似, 這表明長期高濃度的重金屬污染, 改變了錦州灣海域表層沉積物中的異養(yǎng)菌的生理代謝過程, 在生理或遺傳物質(zhì)上對(duì)重金屬產(chǎn)生了一定的抗性; 磷酸酶、蛋白酶、脂肪酶與沉積物中Hg的含量具有顯著正相關(guān)性, 說明其對(duì)重金屬Hg較為敏感, 在一定程度上可作為反映錦州灣海域沉積物中重金屬Hg污染狀況的生物學(xué)指標(biāo)。

重金屬; 潛在生態(tài)危害; 異養(yǎng)細(xì)菌; 水解酶; 平板擴(kuò)散法; 抗性

微生物是生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)物最重要的分解者和初始利用者, 在整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)和遷移轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用[1-3]。在海洋環(huán)境中, 微生物生產(chǎn)的水解酶類具有非常重要的作用, 它能夠?qū)⒑Ｋ械拇蠓肿拥母呔畚锖皖w粒態(tài)的有機(jī)物分解為可溶性有機(jī)物, 便于過細(xì)胞膜進(jìn)入生物體內(nèi), 為生物所利用[4]。高濃度重金屬等脅迫下, 會(huì)改變微生物菌群的結(jié)構(gòu)和代謝過程, 影響環(huán)境中微生物的生物多樣性結(jié)構(gòu)和菌群代謝功能[5]; 同時(shí)微生物代謝酶類的變化也能夠反映環(huán)境受重金屬污染的水平。近年來, 重金屬污染對(duì)近岸海域微生物多樣性和代謝功能的影響已日益受到關(guān)注[4, 6]。

錦州灣位于渤海西北, 遼東灣北, 葫蘆島市東, 錦州市西南, 是一個(gè)三面環(huán)陸, 一面臨海的半封閉海灣[7]。隨著工農(nóng)業(yè)的發(fā)展、人口的增長, 排入錦州灣內(nèi)的污水不僅有周邊市縣的生活污水, 還有葫蘆島鋅廠等眾多企業(yè)排放的工業(yè)廢水通過連山河、五里河和茨山河等由錦州灣西南部匯合后匯入錦州灣, 這些污水中含有大量的重金屬、有機(jī)物、磷酸鹽、石油等, 嚴(yán)重影響了周邊海域的水環(huán)境質(zhì)量狀況[8]。此外, 近幾年錦州灣海域的圍填海造成了灣內(nèi)納潮量的減少、水動(dòng)力減弱, 降低了海灣的自凈能力, 加劇了水環(huán)境的污染[9]。為了研究重金屬對(duì)錦州灣海域表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌分布及代謝酶類的影響, 本實(shí)驗(yàn)將錦州灣海域表層沉積物中分離、純化、鑒定得到的116株(17屬)菌株在一定濃度的重金屬Hg脅迫下, 通過平板擴(kuò)散法測(cè)定了淀粉酶、蛋白酶、磷酸酶和脂肪酶四種水解酶的活性, 揭示重金屬污染脅迫下微生物代謝功能的調(diào)整規(guī)律, 從微生物代謝功能變化角度解析重金屬污染效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域

本研究于2012年8月在連山河、五里河和茨山河匯合口的入?？谕獾暮Ｓ蚍派錉畈键c(diǎn), 抓斗式采泥器采集沉積物樣品, 將表層(0~5cm)沉積物, 一部分裝入滅菌管中, 另取一部分裝入聚乙烯密封袋中, 驅(qū)盡空氣密閉, 均置于–20℃條件下保存, 采樣點(diǎn)位分布見圖1。

圖1 錦州灣海域表層沉積物采樣站位分布圖

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 表層沉積物重金屬測(cè)定方法

將沉積物樣品于真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥, 去除雜質(zhì), 研磨, 過100目篩, 充分混勻, 儲(chǔ)存?zhèn)溆肹10]。稱取0.500 g樣品于小燒杯中, 加入30 mL 王水, 蓋上表面皿, 放在電熱板上加熱2 h, 保持王水處于微沸狀態(tài), 冷卻, 定容至100 mL, 以0.7% KBH4為還原劑, 利用液相色譜-原子熒光光度計(jì)聯(lián)用儀對(duì)其測(cè)定[11]。

1.2.2 Hakanson潛在生態(tài)危害指數(shù)法

本文用Hakanson潛在生態(tài)危害指數(shù)法對(duì)錦州灣海域表層沉積物中的重金屬Hg進(jìn)行評(píng)價(jià)[12], 其計(jì)算方法如下:

式中,i為重金屬i的污染系數(shù);i為表層沉積物中重金屬的實(shí)測(cè)含量;i為重金屬i的評(píng)價(jià)參比值, 本文選取國內(nèi)學(xué)者測(cè)定的錦州灣沉積物重金屬背景值0.25 mg/kg做參比[7];i為單個(gè)重金屬i的潛在生態(tài)危害指數(shù);i為重金屬i的毒性相應(yīng)系數(shù), 反映了重金屬在水相、沉積相和生物相之間的相應(yīng)關(guān)系, 本試驗(yàn)評(píng)價(jià)的重金屬Hg的毒性相應(yīng)系數(shù)為40[13]。

表1 單一重金屬潛在生態(tài)危害指數(shù)對(duì)應(yīng)的危害程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3 平板擴(kuò)散法測(cè)定水解酶活性

1.2.3.1 菌懸液的制備

將從沉積物樣品中經(jīng)分離、純化、鑒定[15-16]共得到的116株(17個(gè)屬)異養(yǎng)細(xì)菌, 分別接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中, 于28℃、200 r/min搖床中培養(yǎng)24 h獲得種子培養(yǎng)液; 吸取2 mL種子培養(yǎng)液接種到60 mL新的液體培養(yǎng)基中, 同樣條件下培養(yǎng)24 h得到所需菌懸液。

1.2.3.2 試驗(yàn)培養(yǎng)基的制備[15]

在牛肉膏蛋白胨基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加不同的底物制成試驗(yàn)培養(yǎng)基。淀粉酶: 可溶性淀粉(10g/L); 磷酸酶: 1%的磷酸酚酞溶液(每100 mL培養(yǎng)基添加0.1mL); 蛋白酶: 等體積的脫脂牛奶(105℃, 10 min滅菌); 脂肪酶: 三丁酸甘油酯(每100 mL培養(yǎng)基添加1 mL)。

準(zhǔn)確稱取HgCl2(分析純)5.430 0g, 用無菌去離子水定容后, 再用0.22 μm的膜過濾, 配成濃度為200 mmol/L的重金屬標(biāo)準(zhǔn)溶液, 作為儲(chǔ)備液。將滅菌(121℃, 30 min)后的上述四種水解試驗(yàn)培養(yǎng)基冷卻至40~50℃, 加入一定量的重金屬儲(chǔ)備液, 搖勻, 使其最終濃度為1 mmol/L。

用打孔器將濾紙片制成6 mm的小圓片, 滅菌后, 蘸取適量的上述菌懸液貼到各水解試驗(yàn)培養(yǎng)基表面, 設(shè)置三個(gè)平行樣, 恒溫培養(yǎng)箱35℃倒置培養(yǎng)2 d后, 測(cè)量產(chǎn)生的透明圈直徑, 取平均值[17]。

2 結(jié)果與討論

2.1 錦州灣表層沉積物中重金屬Hg的含量及其潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)分布

錦州灣海域表層沉積物重金屬Hg在J9站位含量最低為0.179 mg/kg, 屬于第一類沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(≤0.20 mg/kg), J7和J8站位屬于第三類沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(≤1.00 mg/kg), 其余6個(gè)站位均屬于劣三類(>1.00 mg/kg), J1站位重金屬Hg的含量最高, 其值為13.034 mg/kg, 平均含量為4.337 mg/kg, 超出第三類沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn), 標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.89。錦州灣海域表層沉積物中重金屬Hg的含量分布有一定的差異(圖2)。重金屬Hg的含量空間分布趨勢(shì)由錦州灣西南部河流入?？谙驏|北部外海海域逐漸降低, 這表明, 錦州灣海域表層沉積物中重金屬Hg主要由陸源輸入[18]。

圖2 錦州灣海域表層沉積物中重金屬Hg的含量 (mg/kg)

將錦州灣研究海域表層沉積物中的重金屬Hg含量平均值與國內(nèi)其他典型海灣進(jìn)行比較(表2), 研究發(fā)現(xiàn), 本海域重金屬Hg的含量明顯高于其他海灣, 表明錦州灣研究海域表層沉積物中的重金屬平均含量在國內(nèi)海灣中處于相對(duì)較高的水平, 錦州灣表層沉積物中的重金屬污染相對(duì)嚴(yán)重。

重金屬Hg的潛在生態(tài)危害指數(shù)評(píng)價(jià)結(jié)果如表3所示, 研究區(qū)域i在27.72~2085.39之間, 最小值在J9站位, 最大值在J1站位。重金屬Hg在整個(gè)研究海域的潛在生態(tài)危害分布具有明顯的差異, 在西南部近岸海域潛在生態(tài)危害極強(qiáng), 東北部海域危害較弱, 東部與外海相連的區(qū)域危害最弱。

表2 錦州灣表層沉積物中重金屬Hg平均含量與國內(nèi)其他海灣比較

表3 錦州灣海域表層沉積物中重金屬Hg的潛在生態(tài)危害指數(shù)評(píng)價(jià)結(jié)果

綜上所述, 錦州灣海域表層沉積物中, 重金屬Hg具含量較高, 且Hg的毒性水平也很高, 具有極強(qiáng)的潛在生態(tài)危害風(fēng)險(xiǎn)。在J1站位, Hg的含量最多, 超過了第三類沉積物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),i值最大, 危害程度為極強(qiáng)。這主要是由于該站位于錦州灣西南部五里河、連山河和茨山河三條河流入?？谔? 附近有一個(gè)葫蘆島鋅廠以及北港工業(yè)區(qū)的許多企業(yè), 其排放的工業(yè)廢水含有大量的重金屬, 此外, 該處入海口較窄長, 灣內(nèi)的潮流運(yùn)動(dòng)較弱, 重金屬較多的沉降在入?？趦?nèi)[13]。

2.2 重金屬Hg脅迫下異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性大小分布

本文研究了重金屬Hg脅迫下錦州灣海域表層沉積物中的異養(yǎng)菌水解酶活性, 包括淀粉酶、磷酸酶、蛋白酶和脂肪酶, 見表4和圖3。

表4 錦州灣海域表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌水解酶產(chǎn)生的透明圈直徑

淀粉酶可直接參與海洋C循環(huán), 在海洋有機(jī)物污染防治中具有重要作用[24], 研究海域各站位表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌淀粉酶水解產(chǎn)生的透明圈直徑由西南部河口向東部外海海域先增大后減小; 磷酸酶能夠裂解有機(jī)磷化合物, 在農(nóng)藥污染以及富營養(yǎng)化防治中具有重要作用[25], 透明圈直徑差別較小, 西南部河口區(qū)略高于東北部外海海域; 蛋白酶是一種優(yōu)良的酶制劑, 在海洋有機(jī)物污染以及船舶防污領(lǐng)域具有重要的作用[26], 透明圈直徑差別較小, 西南部河口區(qū)高于東北部外海海域; 脂肪酶是一類具有多種催化能力的酶, 在海洋石油污染方面具有重要作用[27], 透明圈直徑具有明顯差異, 西南部河口區(qū)明顯高于東北部外海海域。

海洋微生物能夠利用代謝酶類將溶解態(tài)和顆粒態(tài)有機(jī)物降解成小于600 Da的小分子物質(zhì), 這對(duì)海洋環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展非常關(guān)鍵[28-29]。因此, 了解重金屬脅迫下微生物水解酶活性的強(qiáng)弱對(duì)環(huán)境中大分子有機(jī)物的分解以及海洋生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán)均具有重要意義?？傮w上, 重金屬Hg脅迫下, 錦州灣海域表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性表現(xiàn)為西南部河口區(qū)高于東北部外海海域, 與重金屬Hg的含量分布趨勢(shì)基本相似。錦州灣海域西南部河口區(qū)重金屬Hg的含量低, 在本實(shí)驗(yàn)中高濃度重金屬Hg脅迫下, 重金屬離子與異養(yǎng)細(xì)菌酶分子必需基團(tuán)巰基進(jìn)行不可逆結(jié)合, 從而抑制了水解酶的活性[30]; 西南部河口區(qū)重金屬Hg含量高, 長期高濃度重金屬暴露下, 有些微生物通過改變生理代謝等過程對(duì)重金屬產(chǎn)生不同程度的抗逆性能, 與其抗性有關(guān)的水解酶會(huì)表現(xiàn)出一定的活性并得到積累[31], 因此本研究中, 高濃度重金屬Hg脅迫下, 西南部河口區(qū)異養(yǎng)菌水解酶表現(xiàn)出較高的活性。

2.3 重金屬Hg脅迫下抗性異養(yǎng)菌比例分布

錦州灣海域表層沉積物中抗性異養(yǎng)菌所占比例如圖4所示。水解酶作用下, 重金屬含量最高的J1站位, 有50%左右的異養(yǎng)菌對(duì)重金屬Hg產(chǎn)生抗性, 而在重金屬含量低的J7站位, 抗性異養(yǎng)菌的數(shù)量所占的比例僅為20%左右, 西南部河口區(qū)各站位抗性異養(yǎng)菌所占的比例明顯高于東北部外海海域各站位, 與重金屬Hg的含量分布趨勢(shì)相似。產(chǎn)生本結(jié)果的原因?yàn)? 本研究中異養(yǎng)細(xì)菌在高濃度重金屬Hg試驗(yàn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)間為2d, Hg對(duì)異養(yǎng)細(xì)菌產(chǎn)生短期的“觸殺”效應(yīng)[32], 而錦州灣海域表層沉積物中的重金屬污染是長期積累的, 部分微生物通過自身生理代謝功能的應(yīng)性改變, 進(jìn)而適應(yīng)不利外部條件, 對(duì)重金屬產(chǎn)生不同程度的抗逆性能, 從而能夠在本研究高濃度重金屬環(huán)境下存活下來。

圖3 錦州灣海域表層沉積物中抗性微生物4種水解酶透明圈直徑大小(cm)

圖4 錦州灣海域表層沉積物抗性異養(yǎng)細(xì)菌比例分布

有關(guān)研究表明, 微生物群落通常用于揭示重金屬長期污染的結(jié)果, 微生物對(duì)重金屬的抗性與環(huán)境中重金屬的含量有直接關(guān)系[33, 34]。長期重金屬污染環(huán)境中, 微生物自身會(huì)發(fā)展一系列的抗性機(jī)制以減小外界環(huán)境對(duì)機(jī)體的傷害[35], 研究分離菌株與重金屬抗性的關(guān)系對(duì)環(huán)境污染狀況的治理具有重要的意義。

2.4 異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性與沉積物中Hg含量之間的相關(guān)關(guān)系

用SPSS19對(duì)重金屬Hg脅迫下異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性與表層沉積物中Hg含量之間的相關(guān)性進(jìn)行分析, 結(jié)果如表5所示。

表5 異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性與重金屬Hg含量之間的相關(guān)關(guān)系

注: “**”表示=0.01時(shí)顯著相關(guān)

重金屬脅迫下, 磷酸酶、蛋白酶、脂肪酶活性與表層沉積物中Hg含量之間具有極顯著正相關(guān)性, 相關(guān)系數(shù)分別為0.878、0.814、0.871(<0.01), 而淀粉酶與重金屬Hg含量之間不存在相關(guān)性。這表明磷酸酶、蛋白酶、脂肪酶對(duì)重金屬Hg較為敏感, 在一定程度上可作為反映錦州灣海域重金屬Hg污染狀況的生物學(xué)指標(biāo)。

3 結(jié)論

(1) 錦州灣海域表層沉積物中重金屬Hg的含量以及潛在生態(tài)危害具有明顯的空間分布特征, 呈現(xiàn)從河口向外海方向遞減的趨勢(shì), 最高值出現(xiàn)在錦州灣西南部五里河、連山河和茨山河入?？谔? 最低值出現(xiàn)在錦州灣東部與外海相連接處。與國內(nèi)其他海灣相比, Hg的平均含量處于相對(duì)較高水平, 潛在生態(tài)危害極強(qiáng)。

(2) 錦州灣海域表層沉積物中異養(yǎng)細(xì)菌水解酶活性表現(xiàn)為西南部河口區(qū)高于東北部外海海域, 與重金屬Hg的含量分布及Hakanson潛在生態(tài)危害指數(shù)趨勢(shì)基本相似。西南部河口區(qū)重金屬污染嚴(yán)重, 長期高濃度的重金屬污染, 改變了錦州灣海域表層沉積物中的異養(yǎng)菌的生理代謝過程, 一些對(duì)重金屬敏感的菌株會(huì)逐漸產(chǎn)生適應(yīng)性, 水解酶活性的增加是異養(yǎng)細(xì)菌在逆境下的適應(yīng)表現(xiàn)之一。磷酸酶、蛋白酶、脂肪酶與沉積物中Hg含量之間存在極顯著正相關(guān)性, 對(duì)沉積物中的重金屬更為敏感, 可作為反映重金屬污染狀況的靈敏性指標(biāo), 進(jìn)而反映錦州灣海域表層沉積物的環(huán)境質(zhì)量。

(3) 錦州灣海域表層沉積物中抗性異養(yǎng)菌的數(shù)量西南部河口區(qū)明顯高于東北部外海海域, 這種趨勢(shì)表明錦州灣海域異養(yǎng)細(xì)菌的重金屬抗性與沉積物中重金屬的長期積累有一定的關(guān)系。東北部海域重金屬含量低, 異養(yǎng)細(xì)菌對(duì)重金屬的抗性低, 本研究中高濃度重金屬含量對(duì)該海域的異養(yǎng)細(xì)菌產(chǎn)生了短期的“觸殺”效應(yīng), 而西南部河口區(qū)沉積物中的重金屬污染是長期積累的, 在該區(qū)域存活的異養(yǎng)細(xì)菌在生理或遺傳物質(zhì)上必定對(duì)重金屬產(chǎn)生一定的抗性。

[1] Kosolapov D B, Kuschk P, Vainshtein M B, et al. Microbial processes of heavy metal removal from carbon-deficient effluents in constructed wetlands[J]. Engineering in Life Sciences, 2004, 4: 403-411.

[2] Alqarawi A A, Abdallahb E F, Hashem A. Alleviation of salt-induced adverse impact via mycorrhizal fungi in Ephedra aphylla Forssk[J].Journal of Plant Interactions, 2014, 9 (1): 802-810.

[3] Jay S S. Microbes: The chief ecological engineers in reinstating equilibrium in degraded ecosystems[J]. Agr Ecosyst Environ, 2015, 203: 80-82.

[4] Bong C W, Malfatti F, Azam F, et al. The effect of zinc exposure on the bacteria abundance and proteolytic activity in seawater[C]// Hamamura N, Suzuki S, Mendo S, et al. Interdisciplinary Studies on Environmental Chemistry Biological Responses to Contaminants. Terrapub, 2010: 57-63.

[5] Silver S, Phung L T. A bacterial view of the periodic table: genes and proteins for toxic inorganic ions[J]. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 2005, 32, 587-605.

[6] Wu H, Ding Z H, Liu Y, et al. Methylmercury and sulfate-reducing bacteria in mangrove sediments from Jiulong River Estuary, China[J]. Journal of Environmental Sciences, 2011, 23(1): 14-21.

[7] 張玉鳳, 王立軍, 霍傳林, 等. 錦州灣表層沉積物重金屬污染狀況評(píng)價(jià)[J]. 海洋環(huán)境科學(xué), 2008, 27(2): 178-181.Zhang Yufeng, Wang Lijun, Huo Chuanlin, et al. Assessment on heavy metals pollution in surface sediments in Jinzhou Bay[J]. Marine Environmental Science, 2008, 27(2): 178-181.

[8] Chapman P M. Sediment quality assessment: status and outlook[J]. Aquatic Ecological Health, 1995, (4): 183-194.

[9] 王偉偉, 殷學(xué)博, 吳英超, 等. 海岸帶開發(fā)活動(dòng)對(duì)錦州灣環(huán)境影響分析[J]. 海洋科學(xué), 2010, 34(9): 94-96.Wang Weiwei, Yin Xuebo, Wu Yingchao, et al. The envi-ronmental impact analysis of coastal exploitations in Jinzhou Bay[J]. Marine Sciences, 2010, 34(9): 94-96.

[10] 趙明明, 王傳遠(yuǎn), 孫志高, 等. 黃河尾閭及近岸沉積物中重金屬的含量分布及生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J]. 海洋科學(xué), 2016, 40(1): 68-75. Zhao Mingming, Wang Chuanyuan, SunZhigao, et al. Concentration, distribution, and ecological risk assessment of heavy metals in sediments from the tail reaches of the Yellow River Estuary[J]. Marine Sciences, 2016, 40(1): 68-75.

[11] 王庚, 彭婧, 史紅星. 電感耦合等離子體質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定沉積物中12種重金屬元素[J]. 環(huán)境化學(xué), 2011, 30(11): 1944-1948. Wang Geng, Peng Jing, Shi Hongxing, et al. Simultaneous determination of twelve heavy metals in sediment by ICP-MS[J]. Environmental Chemistry, 2011, 30(11): 1944-1948.

[12] 繆雄誼, 葉思源, 郝玉培, 等. 黃河三角洲表層土壤重金屬環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)[J]. 海洋科學(xué), 2016, 40(2): 65-76. Miao Xiongyi, Ye Siyuan, Hao Yupei, et al. Assessment of heavy metal contamination in the surface soil of the Yellow River Delta, China[J]. Marine Sciences, 2016, 40(2): 65-76.

[13] 李藝紅, 王宏, 劉瑞志, 等. 錦州灣表層沉積物重金屬潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J]. 沈陽理工大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 32(5): 17-22. Li Yihong, Wang Hong, Liu Ruizhi, et al. Potential ecological risk evaluation of heavy metals in the surface sediments of Jinzhou Bay[J]. Journal of Shenyang Ligong University, 2013, 32(5): 17-22.

[14] 李愛華, 岳思君, 馬海濱. 真菌孢子三種計(jì)數(shù)方法相關(guān)性的探討[J]. 微生物學(xué)雜志, 2006, 26(2): 107-110. Li Aihua, Yue Sijun, Ma Haibin. Correlativity of three counting methods of fungal spore[J]. Journal of Microbiology, 2006, 26(2): 107-110.

[15] 朱旭芬. 現(xiàn)代微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M]. 杭州: 浙江大學(xué)出版社, 2011. Zhu Xufen. Modern experimental technique of microbiology[M]. Hangzhou: Zhejiang University Press, 2011.

[16] 張麗紅, 劉艷芳, 胡青平. 中國南海一株固氮類芽孢桿菌的篩選和分離鑒定[J]. 海洋科學(xué), 2015, 39(3): 100-105. Zhang Lihong, Liu Yanfang, Hu Qingping. Isolation and identification of a Paenibacillus sp. Producing nitrogenase activity from South China Sea[J]. Marine Sciences, 2015, 39(3): 100-105.

[17] Jiya J, Rajesh G, Abdulaziz A, et al. Heavy metal pollution exerts reduction/adaptation in the diversity and enzyme expression profile of heterotrophic bacteria in Cochin estuary, India[J]. Environmental Pollution, 2011, 159: 2775-2780.

[18] Balachandran K K, Laluraj C M, Martin G D, et al. Environmental analysis of heavy metal deposition in a flow-restricted tropical estuary and its adjacent shelf[J]. Environ Forensics, 2006, 7: 345-351.

[19] 張現(xiàn)榮, 張勇, 葉青, 等. 遼東灣北部海域沉積物重金屬環(huán)境質(zhì)量和污染演化[J]. 海洋地質(zhì)與第四紀(jì)地質(zhì), 2012, 32(2): 21-29. Zhang Xianrong, Zhang Yong, Ye Qing, et al. Environment quality of Liaodong Bay and pollution evolution of heavy metals[J]. Marine Geology & Quaternary Geology, 2012, 32(2): 21-29.

[20] 秦延文, 蘇一兵, 鄭炳輝, 等.渤海灣表層沉積物重金屬與污染評(píng)價(jià)[J]. 海洋科學(xué), 2007, 31(12): 28-33. Qin Yanwen, Su Yibing, Zheng Binghui, et al. Heavy metals and pollution assessment in surface sediments of Bohai Bay[J]. Marine Sciences, 2007, 31(12): 28-33.

[21] 胡寧靜, 石學(xué)法, 劉季花, 等. 萊州灣表層沉積物中重金屬分布特征和環(huán)境影響[J]. 海洋科學(xué)進(jìn)展, 2011, 29(1): 63-72. Hu Ningjing, Shi Xuefa, Liu Jihua, et al. Distributions and impacts of heavy metals in the surface sediments of the Laizhou Bay[J]. Advances in Marine Science, 2011, 29(1): 63-72.

[22] 張珂, 王朝暉, 馮杰, 等.膠州灣表層沉積物重金屬分布特征及污染評(píng)價(jià)[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2011, 30(12): 1406-1411. Zhang Ke, Wang Zhaohui, Feng Jie, et al. Distribution and pollution assessment of heavy metals in surface sediments of Jioazhou Bay[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2011, 30(12): 1406-1411.

[23] 柴小平, 胡寶蘭, 魏娜, 等. 杭州灣及鄰近海域表層沉積物重金屬的分布、來源及評(píng)價(jià)[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 35(12): 3906-3916. Chai Xiaoping, Hu Baolan, Wei Na, et al. Distribution, sources and assessment of heavy metals in surface sediments of the Hangzhou Bay and its adjacent areas[J]. Acta Scientias Circumstantiae, 2015, 35(12): 3906-3916.

[24] 楊文靜, 王在貴, 劉朝良, 等. 家蠶腸道產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌的分離鑒定及其酶基因的克隆與表達(dá)[J]. 激光生物學(xué)報(bào), 2011, 20(2): 219-229. Yang Wenjing, Wang Zaigui, Liu Chaoliang, et al. Isolation and identification of the Amylase-producing bacteria in silkworm intestine and cloning and expression of their amylase genes[J]. Acta Laser Biology Sinica, 2011, 20(2): 219-229.

[25] 莊百川. 一株產(chǎn)堿性磷酸酶菌株的分離鑒定及發(fā)酵條件研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2006: 1-44. Zhuang Baichuan. Studies on isolation and identification of an alkaline phosphates-producing bacterium and its fermentation conditions[D]. Hangzhou: Zhe Jiang University, 2006: 1-44.

[26] 張曉. 海洋產(chǎn)蛋白酶菌的分離、培養(yǎng)及其防污活性研究[D]. 青島: 中國海洋大學(xué), 2013: 1-68. Zhang Xiao. Isolation, culture and antifouling activity test of marine bacteria which can produce protease[D]. Qingdao: Ocean University of China, 2013: 1-68.

[27] 鄔敏辰, 孫崇榮, 鄔顯章. 平板擴(kuò)散法粗略確定堿性脂肪酶的活性[J]. 無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 2000, 19(2): 168-172. Wu Minchen, Sun Chongrong, Wu Xianzhang. Diffusion plate assay for quick and rough estimation of Alkaline lipase activity[J]. Journal of Wuxi University of Light Industry, 2000, 19(2): 168-172.

[28] Hoostal M J, Gabriela B M, Bouzat J L. Local adaptation of microbial communities to heavy metal stress in polluted sediments of lake Erie[J]. FEMS Microbiology and Ecology, 2008, 65: 156-158.

[29] Yamada N, Suzumura M. Effects of seawater acidification on hydrolytic enzymes[J]. Journal of Oceanography, 2010, 66: 233-241.

[30] 李志超. 甲基汞對(duì)大鼠腦內(nèi)巰基酶活性的影響[J]. 環(huán)境衛(wèi)生學(xué)雜志, 1983, (1): 50-51. Li Zhichao. Effects of methylmercury on activities of thiol enzymes in rat brain[J]. Journal of Environmental Hygiene, 1983, (1): 50-51.

[31] Souza M D, Nair S, Lokabharathi P A, et al. Metal and antibiotic-resistance in psychrotrophic bacteria from Antarctic marine waters[J]. Ecotoxicology, 2006, 15: 379-384.

[32] Pennanen T, Frostegard A, Fritze H, et al. Phospholipid fatty acid composition and heavy metal tolerance of soil microbial communities along two heavy metal-polluted gradients in coniferous forests[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1996, 62: 420-428.

[33] 宋超, 鄭春麗, 王建英. 微生物硫酸鹽的同化途徑及其與重金屬抗性的關(guān)系[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(11): 6368-6370. Song Chao, Zheng Chunli, Wang Jianying. Microorganism sulfate assimilation pathway and its pelationship with heavy metal resistance[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2012, 40(11): 6368-6370.

[34] 王建坤. 鉛鋅污染對(duì)土壤微生物多樣性的影響[D]. 四川: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2009. Wang Jiankun. The effects of Zinc-lead pollution on the diversity of soil microorganisms[D]. Sichuan: Sichuan Agricultural University, 2009.

[35] Diazravina M, Baath E, Frostegare A. Multiple heavy metal tolerance of soil bacterial communities and its measurement by a thymidine incorporation technique[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1994, 60 (7): 2238-2247.

(本文編輯: 康亦兼)

Research on effects of Hg on the metabolic enzymes of heterotrophic bacteria in surface sediments of Jinzhou Bay

XU Qing-tong1, 2, LIU Rui-zhi2, GUO Xiao-ya3, LI Jie1, LEI Kun2, LIU Qing-qing2, HAO Chen-lin2

(1. School of Environmental and Municipal Engineering, Qingdao University of technology, Qingdao 266033, China; 2. State Key Laboratory of Environmental Criteria and Risk Assessment (SKLECRA), CRAES, Chinese Research Academy of Environmental Sciences, Beijing 100012, China; 3. Shandong Province Jiaodong Water Transfer Bureau, Qingdao 266033, China)

To understand the effects of Hg on the major metabolic enzymes of heterotrophic bacteriain the surface sediments of Jinzhou Bay, in this study, we conducted field investigations and collected surface sediment samples from Jinzhou Bay in August 2012. We evaluated the potential ecological risk of Hg using the Hakanson method and performed diffusion plate assays to measure the activity of four kinds of metabolic enzymes of heterotrophic bacteria. The results showed that the content and potential ecological risk of Hg were highest and most serious in the estuary and this situation gradually weakened from the estuary to the ocean, which indicated that most Hg in the surface sediments of Jinzhou Bay originated from land sources. The metabolic enzyme activity of heterotrophic bacteria and the ratio of resistant heterotrophic bacteria were both higher in the southwest coastal waters than in the northeast offshore waters, which were also similar to the distribution of the heavy metal Hg content and the Hakanson potential ecological risk. This indicates that the metabolism of heterotrophic bacteria changed under long-term high concentrations of heavy metals pollution and produced a certain physiological resistance to heavy metals. The contents of phosphatase, protease, and lipase showed a significant positive correlation with the content of the heavy metal Hg, respectively, which indicates that they can be used as sensitivity indexes to reflect heavy metal Hg pollution in the surface sediments of Jinzhou Bay.

heavy metal; potential ecological risk; heterotrophic bacteria; metabolic enzyme; diffusion plate assay; resistance

[National Science and Technology Basic Work, No.2013FY111100- 005; Special Fund for Marine Public Welfare Industry Research, No.201505001; Natural Science Foundation of Shandong Province, No. ZR2013DM003; Special Fund for Environmental Public Welfare Industry Research, No.201409100]

Sep. 30, 2016

X172

A

1000-3096(2017)08-0108-08

10.11759/hykx20160930001

2016-09-30;

2016-12-08

科技基礎(chǔ)工作專項(xiàng)(2013FY111100-005); 海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201505001); 山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2013DM003); 環(huán)保公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201409100)

徐慶彤(1991-), 男, 山東濰坊人, 碩士研究生, 主要研究方向?yàn)榄h(huán)境微生物, E-mail: Andyxqt@163.com; 劉瑞志(1980-), 通信作者, 博士, 副研究員, 主要從事環(huán)境微生物與海洋污染防治研究, E-mail: liuruizhi@craes.org.cn; 李捷(1972-),通信作者, 博士, 教授, 主要研究方向?yàn)榄h(huán)境生態(tài)學(xué), E-mail: jli2001@sina.cn