雙氯芬酸鈉注射液對奶牛安全性的試驗(yàn)研究

李世宏，孔曉軍，秦哲，劉希望，楊亞軍，焦增華，李劍勇

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050）

雙氯芬酸鈉注射液對奶牛安全性的試驗(yàn)研究

李世宏，孔曉軍，秦哲，劉希望，楊亞軍，焦增華，李劍勇

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730050）

為了評價(jià)雙氯芬酸鈉注射液對奶牛的安全性，本試驗(yàn)選擇24頭健康奶牛并隨機(jī)分成3個(gè)試驗(yàn)組（1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組）和1個(gè)空白對照組，每組6頭奶牛。試驗(yàn)組頸部肌內(nèi)注射給藥，對照組不用藥，連續(xù)觀察，分析其對奶牛體征、血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，試驗(yàn)組的臨床指標(biāo)及血常規(guī)指標(biāo)均無明顯差異，血液生化指標(biāo)雖然在試驗(yàn)初期試驗(yàn)組的個(gè)別指標(biāo)與對照組出現(xiàn)差異，但在7d后均恢復(fù)正常。說明雙氯芬酸鈉注射液在奶牛臨床上按推薦劑量（2.2mg/kg體重）使用是安全的。

雙氯芬酸鈉注射液；奶牛；安全性試驗(yàn)

雙氯芬酸鈉（Diclofenac sodium，DS）是苯乙酸類衍生物，屬于第三代非甾體抗炎藥物。雙氯芬酸鈉注射液的藥理效應(yīng)與其抑制前列腺素合成有關(guān)，是環(huán)氧化酶的強(qiáng)抑制劑，可減少前列腺素、血栓素的合成，從而起到抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用[1]。雙氯芬酸鈉注射液是鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司和中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所等單位聯(lián)合研制開發(fā)的用于治療奶牛臨床型乳房炎的新制劑。本試驗(yàn)觀察了不同劑量雙氯芬酸鈉注射液作用于奶牛后，其從有效作用到毒性作用，甚至到致死作用的動(dòng)態(tài)變化過程，考察了雙氯芬酸鈉注射液的安全性及安全劑量范圍，旨在為進(jìn)一步臨床試驗(yàn)制定給藥方案提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥品

雙氯芬酸鈉注射液：10mL/瓶（10mL∶0.5g），透明液體制劑，批號：20150826，鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

2015年10月10～31日，在鄭州市中牟縣富源牧業(yè)有限公司選取24頭健康荷斯坦牛為試驗(yàn)動(dòng)物，每頭體重約450kg。飼料為奶牛全價(jià)混合日糧（TMR）。

1.3 儀器與試劑

全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀（邁瑞B(yǎng)C2800V）、血液生化分析儀（XL-640, Alfra, Germany）、血細(xì)胞分析儀和血液生化分析儀配套試劑、離心機(jī)、真空采血管等。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

將試驗(yàn)?zāi)膛ｋS機(jī)分為3個(gè)試驗(yàn)組，即1倍劑量組（2.2mg/kg）、3倍劑量組（6.6mg/kg）、5倍劑量組（11.0mg/kg）和1個(gè)空白對照組，每組6頭奶牛，采用耳號進(jìn)行標(biāo)記識別，其中，1倍劑量組為推薦劑量。用藥前先預(yù)飼1周以適應(yīng)環(huán)境。各組按擬定的給藥劑量，經(jīng)頸部肌肉注射給藥，每天用藥1次，連用3d，分別于末次給藥后24h、末次給藥后第7天尾靜脈采集血樣并進(jìn)行血常規(guī)和血生化檢測[2]。分組和給藥劑量見表1。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥劑量

1.4.2 臨床觀察

試驗(yàn)期間每天定時(shí)觀察記錄各組試驗(yàn)牛的精神、呼吸、心率、反芻、飲食、糞便等臨床癥狀。

1.4.3 血常規(guī)檢測

在末次給藥后24h和末次給藥后第7天，用1%肝素鈉抗凝真空采血管對所有試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行尾靜脈采血，用邁瑞B(yǎng)C-2800V血液分析儀檢測血常規(guī)。

1.4.4 血液生化學(xué)檢測

在末次給藥后24h和末次給藥后第7天，對所有試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行尾靜脈采血，4 000r/min離心10min后分離血清，采用XL-640全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血液生化學(xué)檢測。

1.4.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 19.0應(yīng)用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性檢驗(yàn)，采用t檢驗(yàn)比較試驗(yàn)組與對照組間血常規(guī)和血液生化學(xué)等各項(xiàng)指標(biāo)的顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察結(jié)果

整個(gè)試驗(yàn)期間，與空白對照組奶牛相比，各試驗(yàn)組奶牛的精神、飲水、采食、步態(tài)、呼吸、心率及反芻等均無明顯差異。接取少量尿液靜置后，顏色、澄清度無明顯變化，糞便色澤、黏稠度無明顯變化。在試驗(yàn)期間，各組試驗(yàn)牛均無死亡記錄。試驗(yàn)組奶牛臨床觀察主要結(jié)果見表2。

表2 臨床觀察結(jié)果

2.2 血常規(guī)檢測結(jié)果

血常規(guī)檢測結(jié)果見表3、表4。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，各試驗(yàn)組與空白對照組奶牛相比，血液常規(guī)指標(biāo)無顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 血液生化檢測結(jié)果

血液生化檢測結(jié)果見表5、6。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，給藥24h后，與空白對照組相比，試驗(yàn)組血液生化指標(biāo)中的總蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶肌酸激酶、乳酸脫氫酶有極顯著（P＜0.01）或顯著性差異（P＜0.05）。但給藥后第7天，與對照組相比，各試驗(yàn)組奶牛血液生化指標(biāo)均無顯著性差異（P＞0.05）。

3 討論

本研究中，在末次給藥后24h后3倍劑量和5倍劑量試驗(yàn)組奶牛的總蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶、谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶等血液生化指標(biāo)與空白對照組比較差異顯著或極顯著，但1倍劑量組無明顯差異。分析其原因，是因?yàn)檫^多雙氯芬酸鈉注射液肌肉注射后隨著吸收、分布至全身后，肝臟作為藥物濃集、轉(zhuǎn)化和代謝的主要器官，多會引起急性損傷，其機(jī)制可能與氧化應(yīng)激、線粒體損傷以及一氧化氮生成

等有關(guān)。線粒體通透性改變可導(dǎo)致活性物質(zhì)生成和線粒體腫脹并引起肝細(xì)胞壞死[3]。由于雙氯芬酸鈉注射液對肝臟的上述可能存在的影響，從而導(dǎo)致一些血液生化指標(biāo)發(fā)生變化。但是隨著藥物在體內(nèi)的分解、代謝，上述指標(biāo)均可恢復(fù)正常，說明雙氯芬酸鈉注射液在體內(nèi)引起部分血液生化指標(biāo)的波動(dòng)是暫時(shí)的、輕微的，不會對機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重危害[4]。在雙氯芬酸鈉注射液靶動(dòng)物安全性試驗(yàn)過程中，由于各受試組奶牛未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀或中毒現(xiàn)象，故未進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

表3 末次給藥24h后各試驗(yàn)組和對照組奶牛的血常規(guī)指標(biāo) （n=6）

表4 末次給藥第7天各試驗(yàn)組和對照組奶牛的血常規(guī)指標(biāo)（n=6）

表5 末次給藥24h后各試驗(yàn)組和對照組奶牛的血液生化指標(biāo)（n=6）

表6 末次給藥第7天試驗(yàn)組和對照組奶牛的血液生化指標(biāo)（n=6）

在雙氯芬酸鈉注射液靶動(dòng)物奶牛安全性試驗(yàn)中，通過觀測分析臨床指標(biāo)、血常規(guī)、血液生化學(xué)等指標(biāo)，結(jié)果表明，受試藥物雙氯芬酸鈉注射液在奶牛臨床上按推薦劑量使用是安全的，具有良好的應(yīng)用前景。

[1] 農(nóng)業(yè)部獸藥評審中心.獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編(2006-2011年)[S]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2012,3.

[2] 張宇.血常規(guī)檢測的臨床意義[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(17):390-391.

[3] 唐光武.雙氯芬酸鈉注射液對家禽的毒性作用研究[D].鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010.

[4] 劉磊,周緒正,李冰,等.伊維菌素納米乳對牛的安全性研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,2:125-127.

Study on the Safety Test of Diclofenac Sodium Injection in Cows

LI Shi-hong, KONG Xiao-jun, QIN Zhe, LIU Xi-wang, YANG Ya-jun, JIAO Zeng-hua LI Jian-yong
(Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS / Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development, Ministry of Agriculture / Key Laboratory of New Animal Drug Project, Lanzhou 730050)

To evaluate the safety of Diclofenac Sodium Injection in cows, totally 24 healthy cows were randomly divided into high, medium and low doses of 3 different experimental groups and 1 control group, each group with 6 cows. The experimental group cows were given cervical intramuscular injection, control group without medication,with continuous observating and detecting the signs, to analyse the effects on the blood and blood biochemical index of cows.The results showed that: 2.2 mg/kg weight in the middle dose group and the control group had no difference,and no other obvious toxic reaction; 11 mg/kg high dose group had no significant toxic effect. This test shows that the clinical use of the drug is safe when Diclofenac Sodium Injection is not more than 2.2mg/kg body weight.

Diclofenac Sodium Injection; Cow; Safety test

S858.23

A

1004-4264（2017）12-0041-05

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.12.011

2017-03-30

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程（CAAS-ASTIP-2016-LIHPS），獸用化學(xué)藥物創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)。

李世宏（1974-），男，甘肅白銀人，本科，副研究員，研究方向?yàn)槟膛ＥR床疾病防治。