桑葉黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

□何東與

（成都七中萬達中學(xué) 四川 成都 610036）

桑葉黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

□何東與

（成都七中萬達中學(xué) 四川 成都 610036）

研究桑葉中黃酮對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響。采用連續(xù)30天腹腔注射D-半乳糖（200mg/kg）建立小鼠亞急性衰老模型。建模之后，分別灌胃低、高劑量桑葉黃酮（0.3g、0.6g/kg），同時衰老模型組和藥物治療組灌胃同等體積生理鹽水與抗壞血酸（0.5g/kg）。21天后檢測小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。結(jié)果表明：與正常對照組相比，衰老模型組中SOD水平極顯著降低，MDA含量升高；與衰老模型組比，桑葉黃酮高劑量組可以明顯提高小鼠機體SOD活性，降低MDA含量。因此，桑葉黃酮能抑制體內(nèi)過氧化物的生成，有效清除體內(nèi)的自由基，提高衰老小鼠的抗氧化能力，為桑葉的開發(fā)與應(yīng)用提供一定依據(jù)。

桑葉；黃酮；衰老；抗氧化

機體的衰老是由多種因素累積而成，隨著分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，人們對機體內(nèi)大量存在的自由基及其產(chǎn)生的危害有了越來越多的認識[1;2]。研究表明，過量的自由基是導(dǎo)致機體衰老和死亡的重要因素之一。因此，如何清除生物體內(nèi)過量的自由基已經(jīng)成為抗衰老研究的核心問題[3]。

桑葉中富含的多糖、黃酮、蛋白質(zhì)、氨基酸等活性成分具有降血脂、降血糖、抗凝血等作用[4;5]。黃酮類化合物是桑葉的主要功能成分之一，包括槲皮素、異槲皮素、二氫山柰素等[6-8]。目前，對于桑葉黃酮對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響尚未見報道。本實驗通過其對D-半乳糖致衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影響，觀察其抗衰老作用，為桑葉的開發(fā)與應(yīng)用提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桑葉，購自于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場，經(jīng)四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物學(xué)教研室鑒定?？偟鞍诇y定試劑盒（BCA法）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒，均購自于北京天根生化科技有限公司；其它石油醚、無水乙醇、抗壞血酸、D-半乳糖、蘆丁標準品、亞硝酸鈉、硝酸鋁、NaOH等均為國產(chǎn)分析純。電子天平（賽多利斯）、燒杯、玻璃棒、超聲清洗儀（寧波新芝）、溫度計、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Buchi）、100mL容量瓶、分光光度計（AJ耶拿）。

1.2 試驗方法

1.2.1 桑葉黃酮的提取。按照文獻方法提取桑葉黃酮：利用建立蘆丁標準液建立標準曲線的方法檢測黃酮含量并配置成生藥濃度1g/mL溶液備用[4;6;9]。

1.2.2 動物衰老模型建立。25只ICR小鼠，雄性，22-26克，購自四川省成都達碩實驗動物有限公司。小鼠自由進食、飲水。隨機分為正常對照組（5只）與D-半乳糖組（20只），D-半乳糖組連續(xù)腹腔注射（200mg/kg）溶液30天，建立小鼠衰老模型，正常對照組腹腔注射同等體積的生理鹽水。

1.2.3 桑葉黃酮灌胃治療。將注射D-半乳糖的20只小鼠再隨機分為4組：衰老模型組、藥物治療組、桑葉黃酮低、高劑量組。桑葉黃酮低、高劑量組按體重每天分別灌胃0.3g、0.6g/kg；藥物治療組灌胃按體重灌胃0.5g/kg抗壞血酸；衰老模型組與正常對照組給予等體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥21天。灌胃結(jié)束后禁食1天，眼球采血，分離血清，按試劑盒說明書檢測血清中SOD和MDA含量。

1.2.4 進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。采用Excel的方差分析與多重比較，數(shù)據(jù)用±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響

與正常對照組相比，衰老模型組小鼠在持續(xù)D-半乳糖的作用下，血清的SOD活性顯著降低（P＜0. 01），MDA含量升高（P＜0.01），表明小鼠衰老模型建立成功。在灌胃桑葉黃酮后，與衰老模型組相比，桑葉黃酮高劑量組在SOD活性顯著升高（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05）；低劑量組小鼠無明顯差異（P＞0. 05）。藥物治療組小鼠血清中SOD活性較衰老模型組小鼠升高顯著（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.05），見表1。

表1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響（±s n=5）

表1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響（±s n=5）

注：與正常對照組相比，** P＜0.01;與衰老模型組相比，△P＜0.05,△△P＜0.01

3 討論

機體抗氧化能力的強弱與健康程度存在密切的關(guān)系?？寡趸改軌蚯宄头纸怏w內(nèi)過量的O2-和H2O2等自由基，作為重要的抗氧化酶之一，SOD活性可以反應(yīng)機體的抗氧化能力[2;10]。而MDA是一種脂質(zhì)過氧化物，可反映出機體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化程度，MDA含量的高低間接反映了機體受到自由基攻擊的嚴重程度。大量研究表明，當(dāng)機體受到自由基攻擊而被氧化時，抗氧化劑的注射和使用，使得MDA含量下降，機體抗氧化能力得到明顯增強[11]。

根據(jù)衰老的代謝紊亂學(xué)說，D-半乳糖的持續(xù)注射導(dǎo)致細胞代謝紊亂，自由基氧化與抗氧化作用動態(tài)平衡失調(diào)，使個體細胞易受自由基的傷害，最終導(dǎo)致機體衰老[12]。本研究中，小鼠在注射D-半乳糖后，SOD活性顯著降低，MDA含量升高，說明衰老模型建立成功。在衰老組小鼠灌胃桑葉黃酮后，與衰老模型組比較，高劑量組SOD活性顯著升高，MDA含量顯著降低，表明桑葉黃酮可顯著提高衰老小鼠機體的抗氧化能力，降低衰老小鼠脂質(zhì)過氧化物MDA含量，有效清除體內(nèi)產(chǎn)生的過量自由基，具有明顯的抗氧化作用，但其抗氧化機理仍然需要進一步的研究。

[1]武清芳,張秋霞.黃芪穴位注射對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚抗氧化酶和羥脯氨酸的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué),2012,(12):28-29.

[2]石娜,蘇潔,楊正標,等.白術(shù)多糖對D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用[J].中國新藥雜志,2014,(05):577-581 +584.

[3]高璐,王瀅,饒勝其,等.葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用[J].食品科學(xué),2014,(23):253-256.

[4]陳玲玲,劉煒,陳建國,等.桑葉黃酮對糖尿病小鼠調(diào)節(jié)血糖的作用機制研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2010, (11):835-838.

[5]孟慶海,殷秋憶,郭靜,等.4種不同桑葉提取物降血糖作用的篩選[J].中成藥,2014,(06):1288-1291.

[6]朱玉霞,鄒德平,劉學(xué)鵬,等.桑葉黃酮對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響的研究[J].四川醫(yī)學(xué),2008,(09):1114-1116.

[7]吳雯,梁凱倫,陳波,等.桑葉提取物對食源性肥胖大鼠的減肥作用及機制研究[J].中國中藥雜志,2017,(09): 1757-1761.

[8]呂歡,羅明琍,方飛,等.桑葉提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性體系的優(yōu)化及動力學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2012,(01):42-44.

[9]王珂,王瑞坡,李姣,等.桑葉黃酮對腺嘌呤誘導(dǎo)大鼠高尿酸血癥腎損傷的防治作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012,(02):172-175+202.

[10]王君巧,聶少平,余強,等.黑靈芝多糖對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用[J].食品科學(xué),2012,(23):274-277.

[11]唐靜.不同劑量川牛膝多糖對小鼠抗氧化活性的影響[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[12]劉功成.重樓多糖對衰老模型小鼠免疫功能和抗氧化能力的影響[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

10.16675/j.cnki.cn14-1065/f.2017.22.061

1004-7026（2017）22-0080-02

R285.5

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