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    機(jī)械刺激對(duì)子宮內(nèi)膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的影響

    2017-12-26 06:25:02林秀英付建華蘆小單方艷秋
    中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2017年12期
    關(guān)鍵詞:機(jī)械

    林秀英,付建華,蘆小單,劉 磊,方艷秋

    (吉林省人民醫(yī)院,吉林 長春130021)

    機(jī)械刺激對(duì)子宮內(nèi)膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的影響

    林秀英,付建華,蘆小單,劉 磊,方艷秋*

    (吉林省人民醫(yī)院,吉林 長春130021)

    子宮內(nèi)膜容受性是胚胎植入的關(guān)鍵因素??刂菩源倥怕?controlled ovarian hypeistimulation COH)因?yàn)榇贵w降調(diào)、高水平雌激素的作用,導(dǎo)致種植窗提前、子宮內(nèi)膜容受性下降。國內(nèi)外大量臨床資料研究表明:機(jī)械刺激能夠提高IVF周期臨床妊娠率。但機(jī)制上不明確,而且對(duì)機(jī)械刺激的時(shí)間、次數(shù)存在很大爭(zhēng)議。本研究在不同時(shí)間對(duì)行COH患者進(jìn)行1-2次的機(jī)械刺激,觀察著床期子宮內(nèi)膜容受性標(biāo)志物整合素avβ3、VEGF、LIF的變化,探討機(jī)械刺激提高COH周期子宮內(nèi)膜容受性的機(jī)制及影響因素。

    1 資料與方法

    1.1研究對(duì)象

    2013年1月至2016年12月,在本生殖醫(yī)學(xué)中心接受IVF-ET治療,新鮮周期取消移植的90例患者(不包括因孕酮升高取消移植者)。排除標(biāo)準(zhǔn):年齡>40歲、月經(jīng)不規(guī)律(<25天或>35天)、排卵障礙、子宮畸形、宮腔異常(息肉、內(nèi)膜炎、宮腔粘連)、糖尿病、甲狀腺疾病、自身免疫性疾病、染色體異常、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢反應(yīng)不良等。

    1.2機(jī)械刺激方法及分組

    A組(34例): 分別在IVF周期前一周期排卵后7天及取卵后7天用子宮內(nèi)膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內(nèi)膜組織,制作成石蠟標(biāo)本,用免疫組化的方法檢測(cè)整合素avβ3、VEGF、LIF。不同時(shí)期的數(shù)據(jù)分為A1組、A2組。

    B組(31例):分別在IVF周期前2周期排卵后7天、前一周期排卵后7天及取卵后7天用子宮內(nèi)膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內(nèi)膜組織,制作成石蠟標(biāo)本,用免疫組化的方法檢測(cè)整合素avβ3、VEGF、LIF。不同時(shí)期的數(shù)據(jù)分為B1組、B2組、B3組。

    C 組(25例):IVF周期前未進(jìn)行任何內(nèi)膜刺激,取卵后7天用子宮內(nèi)膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內(nèi)膜組織,制作成石蠟標(biāo)本,用免疫組化的方法檢測(cè)整合素avβ3、VEGF、LIF。

    備注:自然周期未機(jī)械刺激組:A1組、B1組。自然周期機(jī)械刺激組:B2組。COH周期機(jī)械刺激組:A2組、B3組。COH周期未機(jī)械刺激組:C組。

    1.3超排卵方案

    所有患者均為黃體期短效長方案:于前一個(gè)月經(jīng)周期監(jiān)測(cè)排卵,排卵后7天開始注射短效GnRH-a 0.05-0.1 mg/日持續(xù)直至HCG日。7天后常規(guī)復(fù)查彩超排除卵巢囊腫,若有囊腫發(fā)生,可穿刺。注射GnRH-a 14天后抽血、彩超,若達(dá)到降調(diào)標(biāo)準(zhǔn)則開始用Gn促排卵,當(dāng)兩個(gè)卵泡直徑大于18 mm時(shí),給與艾澤250 μg皮下注射,36小時(shí)后取卵?;颊咭话闱闆r、平均Gn天數(shù)、Gn用量、HCG日E2水平、平均獲卵數(shù),自然周期及COH周期著床期子宮內(nèi)膜厚度各組間無明顯差別。

    1.4免疫組化結(jié)果判定根據(jù)Watanabe免疫組化半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分,高倍鏡下連續(xù)觀察5個(gè)視野,棕黃色顆粒為陽性著色,按染色強(qiáng)度和細(xì)胞的比例進(jìn)行評(píng)分:0分:未染色,陽性細(xì)胞比例<5%;1分:染色為淺棕色,陽性細(xì)胞比例5%-15%;2分:染色為棕色,陽性細(xì)胞比例15%-30%;3分:染色為深棕色,陽性細(xì)胞比例30%-50%;4分:染色為褐色,陽性細(xì)胞比例>50%。

    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    應(yīng)用SPSS l5.0軟件,采用t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1患者一般情況、平均Gn天數(shù)、Gn用量、HCG日E2水平、平均獲卵數(shù),自然周期及COH周期著床期子宮內(nèi)膜厚度各組間無明顯差別,P均>0.05。見表1。

    表1 患者的基本資料

    2.2機(jī)械刺激能提高自然周期種植窗期子宮內(nèi)膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的表達(dá)。

    無論自身對(duì)照(B2組vs B1組),還是組間對(duì)照(B2組vs A1組),機(jī)械刺激后子宮內(nèi)膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的表達(dá)量均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P均<0.05。見表2。

    2.3機(jī)械刺激能提高COH周期種植窗期子宮內(nèi)膜內(nèi)整合素avβ3、VEGF、LIF的表達(dá),延長內(nèi)膜種植窗,但與機(jī)械刺激次數(shù)無關(guān)。

    與自然周期組(A1組、B1組、B2組)相比,COH周期(A2組、B3組)機(jī)械刺激后的整合素avβ3、VEGF、LIF的表達(dá)雖然略低于自然周期組,但仍明顯高于C組,差異有顯著性,P均<0.05。COH周期前刺激一次和刺激二次比較(A2組 vs B3組),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P均>0.05。見表2。

    表2 各組整合素avβ3、VEGF、LIF表達(dá)情況

    3 討論

    3.1整合素avβ3、VEGF、LIF在評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜容受性中的作用

    胚胎成功種植的關(guān)鍵是滋養(yǎng)細(xì)胞與子宮內(nèi)膜相互識(shí)別、粘附、侵入以及這一過程中引發(fā)的血管重建。這需要大量的細(xì)胞因子參與,其中整合素avβ3、VEGF、LIF是目前研究證實(shí)與上述過程密切相關(guān)的因子。整合素avβ3表達(dá)始于月經(jīng)周期第20天,與“種植窗”期開啟時(shí)間一致,是目前證據(jù)最強(qiáng)的內(nèi)膜容受性標(biāo)志物[1]。VEGF能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞浸潤和遷移,促進(jìn)小血管新生,是血管發(fā)生的關(guān)鍵因子[2,3]。“種植窗"期子宮內(nèi)膜組織VEGF表達(dá)量顯著增加[4,5]。LIF促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)增殖、生長,有利于胚胎的孵化和繼續(xù)發(fā)育。同時(shí)通過對(duì)著床后滋養(yǎng)層細(xì)胞生長的調(diào)控,確保胎盤發(fā)育的時(shí)空順序。大量研究表明多囊卵巢綜合征、輸卵管積水、子宮內(nèi)膜異位癥、不明原因不孕,IVF-ET反復(fù)失敗、復(fù)發(fā)流產(chǎn)患者著床期整合素avβ3、VEGF、LIF表達(dá)下降[6-9]。

    3.2機(jī)械刺激在提高子宮內(nèi)膜容受性中的作用機(jī)制及影響因素

    早在1907年國外就有報(bào)道對(duì)準(zhǔn)備受孕的豚鼠的子宮內(nèi)膜進(jìn)行搔刮,可刺激子宮內(nèi)膜的快速生長,并誘導(dǎo)其蛻膜化[10]。直到2003年,Barash等[11]首次提出在人類助孕周期前一周期的d8、d12、d21、d26進(jìn)行內(nèi)膜活檢可提高妊娠率。2004年國內(nèi)李蓉等[12]首次報(bào)道在移植周期進(jìn)行機(jī)械刺激子宮內(nèi)膜可以提高妊娠率。至今可見到國內(nèi)外大量相關(guān)報(bào)道。國內(nèi)外指南將其列為改善子宮內(nèi)膜容受性的有效措施??梢姍C(jī)械刺激提高子宮內(nèi)膜容受性的有效性已經(jīng)被國內(nèi)外專家證實(shí)。

    機(jī)械刺激提高子宮內(nèi)膜容受性的重要機(jī)制之一即是增加內(nèi)膜局部整合素avβ3、VEGF、LIF等細(xì)胞因子的表達(dá),本研究證實(shí)機(jī)械刺激不但能提高自然周期內(nèi)膜局部整合素avβ3、VEGF、LIF的表達(dá),還能改善COH周期由于垂體降調(diào)、過量雌激素導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜容受性下降的狀況。同時(shí),本研究還表明,增加內(nèi)膜刺激的次數(shù),并不能增強(qiáng)上述作用,故不推薦連續(xù)多次應(yīng)用。

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    吉林省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào): 20150101164JC);吉林省科技廳國際合作項(xiàng)目(編號(hào):20150414023GH);吉林省衛(wèi)計(jì)委項(xiàng)目(編號(hào):2016Q007);吉林省衛(wèi)生技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目(編號(hào):2017J019)

    *通訊作者

    1007-4287(2017)12-2136-03

    林秀英(1981-),女,副主任醫(yī)師,醫(yī)學(xué)碩士,研究方向:生殖內(nèi)分泌。

    2017-03-14)

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