VEGF、IL-6表達(dá)水平在糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者中的差異性分析

嚴(yán)鳴光,殷衛(wèi)兵,解傳奇

(河南省商丘市第一人民醫(yī)院,河南 商丘476000)

VEGF、IL-6表達(dá)水平在糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者中的差異性分析

嚴(yán)鳴光,殷衛(wèi)兵,解傳奇

(河南省商丘市第一人民醫(yī)院,河南 商丘476000)

目的探究不同程度糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清及房水中的VEGF、IL-6水平差異。方法研究對象選取2015.1-2015.12我院收治的90例糖尿病患者，根據(jù)視網(wǎng)膜病變程度進(jìn)行分組，包括無糖尿病性視網(wǎng)膜病變組32例(A組)，非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變27例(B組)，增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變31例(C組)，并選取同期收治的30例老年性白內(nèi)障患者作為對照組，采用ELISA法對4組患者的血清及眼房水中的VEGF、IL-6水平進(jìn)行測定并分析其差異性。結(jié)果無論在血清還是眼房水中，VEGF、IL-6表達(dá)程度均為C組>B組>A組>對照組，且兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，從同組表達(dá)水平來看，四組患者血清中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平顯著低于眼房水中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；從相關(guān)性分析來看，A、B、C三組患者血清中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平均與眼房水中的表達(dá)水平呈正相關(guān)。結(jié)論VEGF、IL-6水平隨著糖尿病病變程度的加深表達(dá)水平存在差異性，提示兩者可能在視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用，血清及眼房水中的VEGF、IL-6表達(dá)具有一致性。

視網(wǎng)膜病變；糖尿?。徊∽兂潭龋谎軆?nèi)皮生長因子；白細(xì)胞介素-6

(ChinJLabDiagn,2017,21:2119)

糖尿病是常見的內(nèi)分泌疾病，可能引發(fā)多種并發(fā)癥，其中糖尿病性視網(wǎng)膜病變是糖尿病患者最常見也最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，如果長期未能得到有效控制甚至可能致盲[1]。隨著近年來生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國糖尿病患者人數(shù)逐漸增多，糖尿病性視網(wǎng)膜病變也成為了影響患者健康及生存質(zhì)量的一大重要問題。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，臨床發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子可能是引起血-視網(wǎng)膜屏障破壞的重要因素[2]，也是引發(fā)視網(wǎng)膜病變的主要原因，主要包括腫瘤壞死因子(TNF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、胰島素樣生長因子(IGF)等，其中VEGF被認(rèn)為是導(dǎo)致多種新生血管性視網(wǎng)膜病變的主要作用因子[3,4]。此外也有學(xué)者認(rèn)為糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者的發(fā)病與自身免疫機(jī)能有關(guān)[5,6]，被激活的免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子在促胰島β細(xì)胞損傷中有著重要的意義。因此本文就不同程度的糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清及眼房水中的VEGF、IL-6水平差異性及相關(guān)性進(jìn)行了研究分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料研究對象選取為2015.1-2015.12我院收治的90例糖尿病患者，根據(jù)視網(wǎng)膜病變程度進(jìn)行分組，包括無糖尿病性視網(wǎng)膜病變32例(A組)，非增殖期糖尿病性視網(wǎng)膜病變27例(B組)，增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變31例(C組)，并選取同期收治的30例老年性白內(nèi)障患者作為對照組。A組患者包括男性18例，女性14例，年齡52-76歲，平均63.5±5.7歲，病程3-16年，平均9.9±3.2年；B組患者包括男性15例，女性12例，年齡54-78歲，平均64.1±6.0歲，病程5-15年，平均10.3±4.0年；C組患者包括男性18例，女性13例，年齡51-79歲，平均63.9±5.6歲，病程6-18年，平均10.8±3.8年；對照組患者包括男性17例，女性13例，年齡55-79歲，平均64.4±6.9歲。4組患者在年齡、性別等一般資料對比上無顯著差異(P>0.05)。

1.2方法采用ELISA法對4組患者的血清及眼房水中的VEGF、IL-6水平進(jìn)行測定?；颊叱槿】崭轨o脈血3 ml，注入無菌離心管混勻，3 000 r/min下離心10分鐘，去血清保存于-20℃環(huán)境下備用；患者行白內(nèi)障手術(shù)前打開前房，用無菌1 ml注射器在角膜緣內(nèi)1 mm進(jìn)行穿刺，從中央瞳孔區(qū)抽取房水0.2 ml，注意操作時(shí)避免觸及晶狀體或虹膜，將標(biāo)本置入0.5 ml的Eppendorf管保存于-80℃環(huán)境下備用。檢驗(yàn)儀器為日本日立公司7170型全自動(dòng)生化分析儀，VEGF檢驗(yàn)試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供，IL-6檢驗(yàn)試劑盒由北京百奧萊博科技有限公司提供，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3觀察指標(biāo)對比各組患者血清及眼房水中的VEGF、IL-6水平，對比并分析血清與眼房水中VEGF、IL-6水平的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1血清VEGF、IL-6水平對比各組患者血清中VEGF、IL-6表達(dá)程度為C組>B組>A組>對照組，兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組患者血清VEGF、IL-6表達(dá)水平統(tǒng)計(jì)對比

注：*表示與對照組相比P<0.05；#表示與A組相比P<0.05；&表示與B組相比P<0.05

2.2眼房水VEGF、IL-6水平對比 各組患者血清中VEGF、IL-6表達(dá)程度為C組>B組>A組>對照組，兩兩組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組患者眼房水VEGF、IL-6表達(dá)水平統(tǒng)計(jì)對比

注：*表示與對照組相比P<0.05；#表示與A組相比P<0.05；&表示與B組相比P<0.05

2.3血清及眼房水中VEGF、IL-6水平表達(dá)差異及相關(guān)性從表1、表2數(shù)據(jù)對比來看，四組患者血清中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平顯著低于眼房水中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從相關(guān)性分析來看，A、B、C三組患者血清中的VEGF、IL-6的表達(dá)水平均與眼房水中的表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05)。

3 討論

糖尿病性視網(wǎng)膜病變是世界范圍內(nèi)最常見的后天致盲性眼病，其中增殖性視網(wǎng)膜病變占總數(shù)的10%左右，超過50%的患者會(huì)在5年內(nèi)發(fā)展成盲[7]，雖然目前玻璃體切除和激光光凝技術(shù)已十分成熟，但此類患者發(fā)展成盲的風(fēng)險(xiǎn)性仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他患者。目前糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制臨床尚未闡明，以往主要認(rèn)為是長期高血糖導(dǎo)致血栓形成，白細(xì)胞淤積所致，近年來隨著生物分子學(xué)的進(jìn)展，臨床發(fā)現(xiàn)多種生長因子表達(dá)增加和細(xì)胞因子的活化也可能是導(dǎo)致此類疾病發(fā)生的重要原因[8]。

糖尿病性視網(wǎng)膜病變的病理基礎(chǔ)是血-視網(wǎng)膜屏障的破壞和新生血管的形成，因此VEGF在此類疾病中的作用逐漸被重視。VEGF屬于一種促內(nèi)皮生長糖蛋白，具有誘導(dǎo)血管生成、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的生理功能，在正常人體內(nèi)同樣存在，具有維持血管正常生理活動(dòng)的意義，但正常情況下VEGF的表達(dá)較低[9]。研究發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞具有多種VEGF受體，VEGF能夠選擇性的與這些受體結(jié)合，導(dǎo)致血管通透性增加，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)新生血管形成，進(jìn)而導(dǎo)致血-視網(wǎng)膜屏障的破壞[10]。Kurihara T等人[11]的研究顯示視網(wǎng)膜缺血性疾病患者的視網(wǎng)膜中含有大量的VEGF，且一些其他的血管滲透性因子也能夠通過VEGF間接發(fā)揮作用。一項(xiàng)研究采用原位雜交技術(shù)對新生血管性青光眼失明患者的摘除眼球進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示視網(wǎng)膜是唯一存在VEGFmiRNA表達(dá)的組織，VEGF廣泛存在于視網(wǎng)膜的內(nèi)核層[12]。從本次研究數(shù)據(jù)來看，無論在血清還是眼房水中，VEGF的表達(dá)均為C組>B組>A組>對照組，這說明VEGF的表達(dá)與視網(wǎng)膜病變程度有密切相關(guān)。有研究指出VEGF與糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的病程有密切相關(guān)[13]，但本文各組病例間病程對比并無顯著差異，這說在排除病程因素的情況下，VEGF的表達(dá)仍與視網(wǎng)膜病變程度密切相關(guān)。從血清和眼房水中VEGF的相關(guān)性分析來看，兩者呈正相關(guān)性，這提示視網(wǎng)膜病變患者血清的VEGF含量會(huì)一定程度上影響眼房水中的VEGF含量，這不單體現(xiàn)在糖尿病患者中，還同樣體現(xiàn)在非糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者中。

關(guān)于糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理機(jī)制，也有學(xué)者認(rèn)為與自身免疫有關(guān)，認(rèn)為細(xì)胞因子接到的炎癥反應(yīng)在視網(wǎng)膜病變中有著重要的作用[14]。IL-6屬于炎前細(xì)胞因子，能夠調(diào)節(jié)免疫，提高B細(xì)胞免疫活性，促進(jìn)巨噬細(xì)胞成熟，在機(jī)體的多種生理病理過程中均有參與，也是外傷刺激和感染反應(yīng)的主要誘導(dǎo)分子[15]。IL-6作為一個(gè)重要的炎癥指標(biāo)直接參與了血管病變的病理過程，大量循證醫(yī)學(xué)研究證實(shí)長期的慢性炎癥會(huì)導(dǎo)致局部平滑肌細(xì)胞損害，增加血小板對內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，進(jìn)而產(chǎn)生血栓前狀態(tài)[16,17]。Matsuyama K等人[18]的研究證實(shí)糖刺激能夠促進(jìn)IL-6的分泌，這說明糖尿病患者體內(nèi)的IL-6水平普遍高于健康人群，因此可認(rèn)為IL-6的高表達(dá)可能是引發(fā)糖尿病多種并發(fā)癥的重要因素。Ohno Matsui K等人[19]的研究發(fā)現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變患者玻璃體中的IL-6水平上升，與非糖尿病視網(wǎng)膜病變患者對比存在顯著差異，認(rèn)為IL-6與糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展有密切相關(guān)。從本次研究數(shù)據(jù)來看，雖然B組和C組患者血清和眼房水中的IL-6表達(dá)水平顯著高于A組，但A組血清和眼房水中的IL-6表達(dá)水平同樣顯著高于對照組，這說明IL-6在糖尿病患者體內(nèi)確實(shí)存在高表達(dá)的現(xiàn)象，但視網(wǎng)膜病變本身也是引起IL-6上升的一個(gè)重要因素?？紤]原因是由于IL-6屬于一種多功能細(xì)胞因子，在組織缺氧狀況下IL-6能夠誘導(dǎo)眼內(nèi)新生血管生成[20]。從血清和眼房水中的相關(guān)性分析來看，IL-6與VEGF保持一致，兩者之間呈正相關(guān)性，且同樣與患者的病變程度密切相關(guān)。

綜上所述，VEGF、IL-6水平隨著糖尿病病變程度的加深表達(dá)水平存在差異性，提示兩者可能在視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用，血清及眼房水中的VEGF、IL-6表達(dá)具有一致性。

[1]王 清，郭喬茜，李 琴，等．臭氧治療對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡和VEGF、PEDF因子表達(dá)的影響[J].眼科新進(jìn)展，2014，6(3)：111．

[2]王 超，邢邯英，王 杏，等．通心絡(luò)膠囊對糖尿病視網(wǎng)膜病變KK/UPJ-AY小鼠液及視網(wǎng)膜炎性因子表達(dá)的影響[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2014，4(27)：3264．

[3]鄭 磊，溫佳敏，張福燕．糖尿病視網(wǎng)膜病變患者視網(wǎng)膜光凝術(shù)后近期調(diào)節(jié)力的變化[J].眼科，2014，12(5)：322．

[4]茍文軍，方晏紅，劉思源，等．SNON蛋白及TGF-β在早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織中表達(dá)及意義[J].眼科新進(jìn)展，2014，34(11)：1035．

[5]金春花，李連喜，李梅芳，等．新診斷2型糖尿病患者視網(wǎng)膜微血管異常的臨床特征及危險(xiǎn)因素研究[J]．中國全科醫(yī)學(xué)，2015，18(5)：493．

[6]王 靜，朱 鴻，施彩虹．糖尿病視網(wǎng)膜病變中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和HIF-1對VEGF的調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2014，9(2)：240．

[7]Stewart MW．Aflibercept (VEGF-TRAP):The Next Anti-VEGF Drug[J]．Inflamm Allergy Drug Targets,2011，10(6):497.

[8]Zhang X，Bao S，Hambly BD，et al．Vascular endothelial growth factor-A:a multifunctional molecular player in diabetic retinopathy[J]．Int J Biochem Cell Biol,2014， 46(12):2368.

[9]Bhagat N，Grigorian RA，Tutela A，et al．Diabetic macular edema:pathogenesis and treatment[J]． Surv Ophthalmol,2009，54(1):1.

[10]Ellis LM，Hicklin DJ．VEGF-targeted therapy:mechanisms of anti-tumor activity[J].Nat Rev Cancer,2008， 8(8):579.

[11]Kurihara T，Westenskow PD，F(xiàn)riedlander M．Hypoxia-inducible factor (HIF)/vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling in the retina[J]．Adv Exp Med Biol,2014，80(1):275.

[12]Mohan N，Monickaraj F，Balasubramanyam M，et al.Imbalanced levels of angiogenic and angiostatic factors in vitreous， plasma and postmortem retinal tissue of patients with proliferative diabetic retinopathy[J]．J Diabetes Complications,2012， 26(5):435.

[13]Hong H，Zhou T，F(xiàn)ang S．Pigment epithelium-derived factor (PEDF) inhibits breast cancer metastasis by down-regulating fibronectin[J]．Breast Cancer Res Treat,2014,148(1):61.

[14]Unterlauft JD，Claudepierre T，Schmidt M， et al． Enhanced survival of retinal ganglion cells is mediated by Müller glial cell-derived PEDF[J]．Exp Eye Res,2014,127(2):206.

[15]Elahy M，Baindur-Hudson S，Cruzat VF， et al． Mechanisms of PEDF-mediated protection against reactive oxygen species damage in diabetic retinopathy and neuropathy[J]．J Endocrinol,2014，222(3):R129.

[16]Sanchez A，Tripathy D，Yin X，et al．Pigment epithelium-derived factor ( PEDF) protects cortical neurons in vitro from oxidant injury by activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 and induction of Bcl-2[J]．Neurosci Res,2012，72(1):1.

[17]Sivaprasad S，Browning RC，Starita C． An open-label，one-year，noncomparative study to evaluate the safety and tolerability of intravitreal pegaptanib sodium in patients with diabetic macular edema[J]．Clin Ophthalmol,2014，56(8):1565.

[18]Matsuyama K，Ogata N，Jo N，et al．Levels of Vascular Endothelial Growth Factor and Pigment Epithelium-Derived Factor in Eyes Before and After Intravitreal Injection of Bevacizumab[J]．Jpn Ophthalmol,2009,53(3):243.

[19]Ohno Matsui K，Yoshida T，Uetama T， et al．Vascular endothelial growth factor upregulates pigment epithelium-derived factor expression via VEGFR-1 in human retinal pigment epithelial cells[J]．Biochem Biophys Res Commun,2013,313(3):962.

[20]Zhang SX，Wang JJ，Gao G，et al．Pigment epithelium-derived factor downregulates vascular endothelial growth factor(VEGF ) expression and inhibits VEGF-VEGF receptor 2 binding in diabetic retinopathy[J]．J Mol Endocrinol,2016,47(1):1.

AnalysisofVEGFandIL-6levelsinserumandaqueoushumorofpatientswithdiabeticRetinopathy

YANMing-guang，YINWei-bing，XIEChuan-qi.

(TheFirstPeople’sHospitalofShangQiu,ShangQiu476000,China)

ObjectiveTo explore the differences of VEGF and IL-6 in serum and aqueous humor of patients with different causes of retinopathy.MethodsNinety patients with retinopathy were enrolled in our hospital from 2015.1 to 2015.12.According to their etiology,32 retinopathy patients (group A),27 patients with simple retinopathy (group B) (Group C),30 senile cataract patients were selected as the control group.All the patients were monocular.The levels of VEGF in the serum and aqueous humor of the four groups were measured by ELISA.IL-6 levels were measured and analyzed the difference.ResultsThe results of VEGF and IL-6 showed that the expression of VEGF and IL-6 in the serum and in the ocular aqueous humor was significantly higher than that in the control group(P<0.05),and the difference was statistically significant (P<0.05).And in all groups,the expression of VEGF and IL-6 in the serum was significantly lower than that in the aqueous humor (P<0.05).From the correlation analysis,the levels of A,B,The expression levels of VEGF and IL-6 in the sera of three groups were positively correlated with the expression levels in the aqueous humor.ConclusionThe expression of VEGF and IL-6 in diabetic retinopathy may be related to the development of diabetic retinopathy.The expression of VEGF and IL-6 in serum and ocular aqueous humor has a significant difference consistency.

Retinopathy;Diabetes mellitus;Degree of lesion;Vascular endothelial growth factor;Interleukin-6

1007-4287(2017)12-2119-04

R587.1

A

嚴(yán)鳴光,男，36歲，碩士，主管技師，檢驗(yàn)醫(yī)師，主要研究方向：自身免疫和感染免疫。

2016-12-11)