酸性黃顯現(xiàn)潛血手印中固定技術(shù)比較研究

常 冉

(1.證據(jù)科學(xué)教育部重點實驗室(中國政法大學(xué))， 北京 100088；2.北京市公安局刑偵總隊刑事技術(shù)支隊， 北京 100054)

0 引言

血是命案現(xiàn)場常見的成痕介質(zhì)，血指紋、血足跡等血痕不僅能為偵查提供方向和線索，在證明犯罪、鎖定嫌疑人方面有不可比擬的證據(jù)價值。通常情況下，由于血對可見光強(qiáng)烈的吸收作用，現(xiàn)場即便血量不大，血痕也很容易被發(fā)現(xiàn)。然而，當(dāng)血量極少以致形成潛血痕跡，亦或是成痕客體背景復(fù)雜、干擾強(qiáng)烈的情況下，勘查人員就需要借助血痕顯現(xiàn)技術(shù)來增強(qiáng)其與背景的反差。

當(dāng)前，血痕顯現(xiàn)的方法很多。根據(jù)反應(yīng)對象的不同，血痕顯現(xiàn)技術(shù)大致可分為兩類：一是與血卟啉反應(yīng)的顯現(xiàn)技術(shù)；二是與蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物反應(yīng)的顯現(xiàn)技術(shù)，即蛋白染色技術(shù)[1]。

與血卟啉反應(yīng)的顯現(xiàn)技術(shù)主要以3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為代表,其靈敏度高、操作簡便、顯現(xiàn)效果出色的優(yōu)點使其迅速成為命案現(xiàn)場勘查中血痕顯現(xiàn)的首選。然而，盡管至今尚無研究表明TMB是否具有致癌性，但鑒于其聯(lián)苯胺的結(jié)構(gòu)，加之許多技術(shù)人員在使用過程中確有不適反應(yīng)，許多歐美國家已不再使用此方法，轉(zhuǎn)向更加安全健康的蛋白染色法。

然而，在國內(nèi)蛋白染色法多用于實驗室顯現(xiàn)，而非現(xiàn)場勘查中，其主要原因在于蛋白染色法的操作復(fù)雜，耗時長。蛋白染色技術(shù)分3個步驟：固定、染色和漂洗，3個步驟缺一不可。實際工作中許多操作者對血痕的固定時間不夠，甚至跳過血痕固定環(huán)節(jié)直接染色，致使效果不佳，久而久之，蛋白染色漸漸退出了現(xiàn)場勘查的舞臺。

可以說，血痕固定的好壞決定著蛋白染色的成敗，而能否縮短血痕固定時間是蛋白染色技術(shù)能否被應(yīng)用于現(xiàn)場勘查的關(guān)鍵。如果想要使安全健康的蛋白染色法在現(xiàn)場勘查環(huán)節(jié)取代四甲基聯(lián)苯胺，就必須解決血痕固定時間長，固定效果不佳的問題。

酸性黃作為熒光黃(lucifer yellow VS)等系列蛋白質(zhì)染色劑的替代試劑，用作指紋顯現(xiàn)試劑，最早是英國內(nèi)政部在2005年出版的《指紋顯現(xiàn)手冊》一書中提出。為了進(jìn)一步明確酸性黃和血手印中蛋白質(zhì)反應(yīng)效果。2005年，Vaughn G.Sears等人又專門針對酸性黃和蛋白質(zhì)的反應(yīng)同氨基黑10B、隱色龍膽紫、魯米諾等做了比較研究。結(jié)果表明：酸性黃的效果要好于氨基黑10B、隱色龍膽紫等[2]，國內(nèi)水晶晶等學(xué)者通過專門研究也證實了酸性黃在眾多蛋白染色法中的優(yōu)勢。因此，本文在比較血痕固定技術(shù)時選用酸性黃作為蛋白染色的方法。

1 材料與方法

1.1 血痕固定技術(shù)的原理及常用操作方法

“固定”是指將血液中的蛋白質(zhì)固定在客體表面，以防細(xì)節(jié)特征在染色和漂洗階段出現(xiàn)擴(kuò)散或被洗掉。蛋白質(zhì)的固定涉及交聯(lián)、脫水、沉降等一系列的反應(yīng)機(jī)理，蛋白固定劑普遍應(yīng)用的機(jī)理是通過改變親油親水區(qū)的平衡來破壞蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu)，引發(fā)蛋白的溶解度下降，從而達(dá)到防止其擴(kuò)散的目的[3]。國外有文獻(xiàn)報道使用5-磺基水楊酸固定血痕效果較好[4]，除此之外，病理學(xué)領(lǐng)域常常使用乙醇浸泡或加熱法固定蛋白[5]。亦有文獻(xiàn)提及在蛋白染色顯現(xiàn)血指紋前用502膠或刷粉進(jìn)行前處理，有利于固定血痕[4]?？紤]到現(xiàn)場勘查中對痕跡顯現(xiàn)講求便捷高效，本文對502膠與刷粉兩種前處理方法不做探討，而重點研究5-磺基水楊酸、乙醇和加熱法固定血痕的效果。

1.2 3種血痕固定技術(shù)的原理比較及操作方法

盡管血痕固定的基本原理是使血液中的蛋白質(zhì)沉淀，但本實驗選用的3種固定技術(shù)在固定原理上也有顯著的區(qū)別：

5-磺基水楊酸中的磺酸基在血液中發(fā)生水解，使得血液PH值呈現(xiàn)酸性，進(jìn)而促使血液中的堿性蛋白質(zhì)發(fā)生變性沉淀[6]；

乙醇借助其親水的特性，能奪取血液中含有的水分，使得血液中的蛋白質(zhì)發(fā)生脫水反應(yīng)而形成蛋白質(zhì)沉淀；

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，容易受到強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、高壓等外界條件的影響而發(fā)生變性。在加熱條件下，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，產(chǎn)生凝固現(xiàn)象而沉淀[4]。

1.3 實驗設(shè)計

為比較文獻(xiàn)中記載的3種血痕固定技術(shù)在固定時間、固定效果上的區(qū)別，特設(shè)計如下實驗：

志愿者1次在白色瓷磚上由上至下連續(xù)捺印5枚血漬指紋后，用瓷磚切割刀沿連續(xù)捺印的指紋中心線將瓷磚切開，制成2組樣本備用(如圖1)。志愿者共捺印24次，制得樣本48組，半面指紋240枚。

圖1 樣本制作示意圖

將樣本豎立放置，分別用2%的5-磺基水楊酸溶液噴顯、70%的乙醇溶液噴顯、噴顯0.9%的生理鹽水后放入70℃恒溫箱中加熱3種方法進(jìn)行固定，固定時間設(shè)置1 min, 5 min, 10 min, 30 min 4個節(jié)點，固定后統(tǒng)一使用酸性黃進(jìn)行染色、漂洗后觀察顯現(xiàn)效果。實驗中酸性黃的配方選用英國內(nèi)政部的官方配方[3]，即：

染色液：1 g酸性黃7溶于700 mL蒸餾水中，加入250 mL乙醇和50 mL冰醋酸；

漂洗液：700 mL蒸餾水中，加入250 mL乙醇和50 mL冰醋酸。

酸性黃(acid yellow 7)，又稱C.I.酸性黃3、亮磺胺五羥黃酮。分子式為C19H13N2NaO5S，分子量為404.37，熔點≥100 ℃，相對密度為5～800 kg/m3，無毒，易溶于水，黃色粉末，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖2所示。

圖2 酸性黃結(jié)構(gòu)式

在具體操作上，對于5-磺基水楊酸固定法，配置2%的5-磺基水楊酸水溶液對血痕進(jìn)行噴顯；對于乙醇固定法，配置70%的乙醇溶液對血痕進(jìn)行噴顯；對于加熱法，則首先對血痕噴灑0.9%的生理鹽水，然后放入70℃恒溫箱中加熱[4]。

2 結(jié)果

經(jīng)對240枚半面指紋進(jìn)行顯現(xiàn)，獲得如下實驗結(jié)果(見表1～表3)。

表1 3種血痕固定方法效果比對總表

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

表2 3種血痕固定方法顯出指紋鑒定價值統(tǒng)計表

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

3 討論

3.1 固定時間和固定效果方面

5-磺基水楊酸溶液對血痕固定十分有效，其效果是其他兩種方法不可比擬的；

應(yīng)用5-磺基水楊酸溶液固定血痕，最快1 min即可固定垂直瓷磚表面的血指紋，非?？焖儆行А：笃陔S著固定時間的增加，其顯現(xiàn)效果沒有顯著提升(見表4、圖3、圖4)；

70%乙醇溶液固定、0.9%的生理鹽水加熱法均不能十分有效地固定血痕，而且，隨著固定時間的增加，此兩種方法對血痕的固定效果越來越差(見表5、表6、圖3、圖4)。

表3 3種血痕固定方法效果比對

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

表4 5-磺基水楊酸法不同固定時間導(dǎo)致的顯現(xiàn)效果變化

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

表5 乙醇法不同固定時間導(dǎo)致的顯現(xiàn)效果變化

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

3.2 便捷程度和成本方面

在便捷程度上，3種血痕固定藥液均配置簡單，其中5-磺基水楊酸固定法和乙醇固定法均可將固定液裝入噴罐中在現(xiàn)場進(jìn)行噴灑，而加熱法除噴灑生理鹽水外還需加熱，現(xiàn)場操作復(fù)雜，且效果不佳。

表6 加熱法不同固定時間導(dǎo)致的顯現(xiàn)效果變化

注：+++：鑒定價值高；++：有一定鑒定價值；+：鑒定條件不足，但能看清指紋輪廓；-：看不清指紋輪廓

在成本上，3種固定方法涉及的試劑均為價格低廉的常見品種，在顯現(xiàn)固定成本上可以忽略不計。

3.3 是否具備鑒定條件和鑒定價值方面

由表2中可以看出，效果為“+++”鑒定價值高的最大比例為60%，其相對應(yīng)的實驗條件為2% 5-璜基水楊酸固定1 min、10 min、30 min。效果為“+++”和“++”，即具備鑒定條件的最大比例為80%，其相對應(yīng)的實驗條件為2% 5-璜基水楊酸固定10 min。

對于70%乙醇固定法來說，所有的實驗條件組合效果均不能達(dá)到“+++”，其效果達(dá)到“++”的比例為20%，相對應(yīng)的實驗條件為70%乙醇固定1 min、5 min。在固定時間為10 min、30 min時，該固定方法的效果全部為“-”。

對于加熱法來說，所有的實驗條件組合效果均位于“+”和“-”，即所有的顯現(xiàn)效果都不具備鑒定條件和鑒定價值。

圖3 固定1 min/5 min/10 min/30 min的效果(左側(cè)為5-磺基水楊酸固定，右側(cè)為乙醇固定)

圖4 固定1/10 min的效果(左側(cè)為5-磺基水楊酸固定，右側(cè)為加熱固定)

4 結(jié)論

通過上述系列實驗可知，噴灑2%的5-磺基水楊酸溶液是應(yīng)用酸性黃等蛋白染色法染色前的最佳固定方法，且該方法耗時極短，噴灑固定液1 min后立即染色便會得到令人滿意的結(jié)果，整個顯現(xiàn)過程耗時5 min以內(nèi)。實驗選取的立面白色光滑瓷磚表面的血指紋，模擬了現(xiàn)場勘查實踐中最難固定的情況，5-磺基水楊酸可以在此條件下耗費1 min的時間成功固定住血痕，為后續(xù)的蛋白染色提供基礎(chǔ)，足以證明此種方法可以在現(xiàn)場勘查實踐中廣泛應(yīng)用。此外，國外文獻(xiàn)中談及酸性黃染色前的固定時，提到應(yīng)用5-磺基水楊酸固定血痕至少需要5 min，但實驗結(jié)果表明固定1 min即可達(dá)到預(yù)期效果，固定時間增加并不能帶來顯現(xiàn)效果的顯著增強(qiáng)。