CRP干片在干化學(xué)儀器內(nèi)放置時(shí)間對(duì)其測(cè)定值的影響

張君，程云章

上海理工大學(xué)，上海 200093

CRP干片在干化學(xué)儀器內(nèi)放置時(shí)間對(duì)其測(cè)定值的影響

張君，程云章

上海理工大學(xué)，上海 200093

目的探討CRP干片在干化學(xué)儀器上存放時(shí)間過長(zhǎng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，為CRP干片的臨床使用提供必要的參考。方法選取高、低兩種濃度的質(zhì)控品，每隔8 h對(duì)兩種濃度的質(zhì)控品進(jìn)行20個(gè)測(cè)試。判讀結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度是否符合規(guī)定。結(jié)果CRP干片在機(jī)時(shí)間超過48 h對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，精密度和準(zhǔn)確度均不合格。結(jié)論CRP干片裝載到機(jī)器上后，需在48 h內(nèi)盡快使用。

CRP干片；在機(jī)穩(wěn)定性；實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控；精密度

近年來，Ortho公司的干化學(xué)技術(shù)由于其結(jié)果準(zhǔn)確，抗干擾能力強(qiáng)，檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)，受到越來越多臨床檢驗(yàn)科室的青睞。但是干化學(xué)檢驗(yàn)所需的試劑載體—干片，對(duì)儲(chǔ)存要求比較嚴(yán)格，需要冷凍或冷藏儲(chǔ)存。拆包后的干片也需要盡快使用，否則干片中的某些成分容易失效，影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。然而某些基層醫(yī)院測(cè)試量非常小，1個(gè)干片試劑包（50個(gè)測(cè)試）經(jīng)常需要花很多天才能用完。

C-反應(yīng)蛋白由肝臟合成，是一種急性反應(yīng)蛋白。在急性期反應(yīng)中，可以觀察到一些血漿蛋白的濃度升高，其中包括CRP。CRP濃度的測(cè)定有助于檢測(cè)和評(píng)估炎癥、組織損傷和感染。如果CRP濃度不準(zhǔn)確，會(huì)對(duì)臨床醫(yī)生診斷疾病時(shí)造成誤導(dǎo)，因此確保CRP濃度測(cè)定的準(zhǔn)確顯得尤為重要[1]。

為了分析CRP干片在全自動(dòng)干生化分析儀Vitros 350上放置時(shí)間會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成何種影響，該文對(duì)C-反應(yīng)蛋白測(cè)定（CRP）干片進(jìn)行了穩(wěn)定性研究，旨在對(duì)干片的臨床使用提供一些參考。幫助基層醫(yī)院在購(gòu)買CRP測(cè)定干片時(shí)選擇合適的規(guī)格和數(shù)量，以免造成不必要的浪費(fèi)。

1 材料和方法

1.1 儀器

①Ortho公司生產(chǎn)的Vitros 350全自動(dòng)干生化分析儀；②上海大龍 1 000 μL 加樣槍（YE4A342684）。

1.2 試劑

①C-反應(yīng)蛋白測(cè)定（CRP）干片（批號(hào)371208962224）；②Ortho公司原廠的定標(biāo)品Kit 7（批號(hào)1320498）；③Ortho公司原廠的質(zhì)控品CRP PV 1（批號(hào)N5113）和CRP PV 2，（批號(hào)N5115）；④Ortho公司原廠的免疫洗液Immuno-Wash Fluid（批號(hào) B4840）。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

①對(duì)Vitros 350干化學(xué)分析儀進(jìn)行調(diào)試維護(hù)，保證設(shè)備運(yùn)行正常，并使用Kit 7完成CRP的定標(biāo)。②將液體CRP PV 1、PV 2分裝，標(biāo)記，然后立即放入冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。③同時(shí)從冰箱中取出10個(gè)同批次的CRP測(cè)定干片，復(fù)溫30 min后立即裝載到機(jī)器上。④立刻運(yùn)行CRP PV 1和PV 2，各20次，依據(jù)廠家文件FRM23509，判斷標(biāo)準(zhǔn)差SD和變異系數(shù)CV%是否在限值內(nèi)。如在限值內(nèi)，則繼續(xù)下一步驟。如超限則終止實(shí)驗(yàn)。⑤間隔8 h后，再次運(yùn)行CRP PV 1&2，各20次，判讀標(biāo)準(zhǔn)同步驟4，同時(shí)依據(jù)Westgard多規(guī)則質(zhì)控程序，判斷質(zhì)控是否失效。計(jì)算步驟5中的均值與步驟4中的均值的偏倚（%），判斷是否超出室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的±25%的可接受范圍。⑥如果步驟5的數(shù)據(jù)未超限，則重復(fù)步驟5，如超限則終止實(shí)驗(yàn)。

表1 批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其對(duì)應(yīng)的SD值和CV%值

2 實(shí)驗(yàn)原理和結(jié)果

臨床試驗(yàn)室通常采用室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)這兩種評(píng)價(jià)方法來判斷結(jié)果是否準(zhǔn)確。室內(nèi)質(zhì)控是監(jiān)測(cè)一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)，包括方法學(xué)、儀器、試劑、環(huán)境及操作過程等綜合因素作用下結(jié)果的穩(wěn)定性。室間質(zhì)評(píng)是檢測(cè)、控制實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的準(zhǔn)確度。是實(shí)驗(yàn)室結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間的互認(rèn)的基礎(chǔ)。該文即采用室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)兩種方法，研究CRP干片在干化學(xué)分析儀器內(nèi)放置時(shí)間對(duì)其測(cè)定值的影響。

2.1 室內(nèi)質(zhì)控評(píng)價(jià)

室內(nèi)質(zhì)控最基本的評(píng)價(jià)方法是精密度判定。通常是對(duì)穩(wěn)定的樣品作多次測(cè)定，求這些重復(fù)測(cè)定值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，以及變異系數(shù)CV。對(duì)某樣品作多次重復(fù)測(cè)定，均值就是這組測(cè)定值的平均水平。標(biāo)準(zhǔn)差是各重復(fù)測(cè)定值對(duì)于均值的離散程度。標(biāo)準(zhǔn)差大小反映了該測(cè)試的精密度水平。標(biāo)準(zhǔn)差越大，表明測(cè)定值位于均值附近的概率較小，即測(cè)定的精密度低。反之，標(biāo)準(zhǔn)差越小，表明測(cè)定值位于均值附近的概率較大，即測(cè)定的精密度高。精密度又可以分為批內(nèi)精密度、批間精密度和天間精密度。見圖1。

2.1.1 批內(nèi)精密度 批內(nèi)精密度是指對(duì)同一標(biāo)本用同一方法在相同條件下重復(fù)測(cè)定所得的各次結(jié)果間或各次結(jié)果與均值之間的符合程度。對(duì)批內(nèi)精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般是一批內(nèi)重復(fù)測(cè)量20～30次。該次實(shí)驗(yàn)則選取高低水平的兩種質(zhì)控品：PV1和PV2，對(duì)兩種質(zhì)控品各運(yùn)行20個(gè)測(cè)試，記錄檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算均值，SD和CV。根據(jù)均值和測(cè)試次數(shù)，在廠家的提供的指導(dǎo)文件FRM23509中找到對(duì)應(yīng)的允許SD和允許CV[2]。將測(cè)試所得的SD值和CV值和廠家的允許值進(jìn)行比較。如沒有超過允許值，則說明結(jié)果有效，并將所得的均值作為基準(zhǔn)，用于質(zhì)控判斷，見表 1、表 2。

圖1 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控評(píng)估值示意圖

表2 廠家的SD和CV%合格值

依據(jù)廠家文件FRM23509的Guideline SD和CV%值，當(dāng)干片在設(shè)備上存放時(shí)間在48 h內(nèi)，PV 1和PV 2的批內(nèi)精密度都合格，當(dāng)在機(jī)存放時(shí)間達(dá)到56 h時(shí)，PV 2的SD值和CV%值都超限。

2.1.2 天間精密度 天間精密度是在不同時(shí)間重復(fù)檢測(cè)同一樣本所得的變異性。根據(jù)EP5-A2《定量測(cè)量方法的精密度性能評(píng)價(jià)》的要求，天間精密度的試驗(yàn)需連續(xù)測(cè)試10 d或20 d，而對(duì)于短時(shí)運(yùn)行，樣本可在實(shí)驗(yàn)過程的任意時(shí)刻進(jìn)行[3]。因此該次實(shí)驗(yàn)每8 h做一組試驗(yàn)，所得的結(jié)果作為評(píng)價(jià)天間精密度的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

該文對(duì)天間精密度的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控程序。Westgard多規(guī)則質(zhì)控程序是利用5種不同的判斷規(guī)則來確定一個(gè)分析結(jié)果是在控還是失控的方法，它被廣泛地應(yīng)用與臨床實(shí)驗(yàn)室[4]。Westgard多規(guī)則質(zhì)控程序大底如下。

13S：?jiǎn)我凰降馁|(zhì)控測(cè)量數(shù)據(jù)超出了平均值±3 SD的控制限范圍，為失控。22S：連續(xù)2個(gè)質(zhì)控測(cè)量結(jié)果在同側(cè)超過平均值±2 SD控制限，失控。R4S：一個(gè)質(zhì)控水平的連續(xù)兩次質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，一個(gè)超過了mean+2SD，一個(gè)超過了mean-2 SD，為失控。41S：4次連續(xù)的質(zhì)控結(jié)果超過了同一側(cè)的mean±1SD質(zhì)控線，為失控。10x：連續(xù)10個(gè)質(zhì)控結(jié)果都落在均值的一側(cè)，為失控。見表3、圖2、圖3。

表3 天間精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 允許誤差結(jié)果(%)

圖2 westgard多規(guī)則質(zhì)控流程圖

圖3 天間精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果折線圖

根據(jù)Westgard多規(guī)則質(zhì)控程序，當(dāng)CRP干片在機(jī)存放48 h，PV2的結(jié)果大于2 SD，達(dá)到警戒值。當(dāng)CRP干片在機(jī)存放時(shí)間達(dá)56 h后，PV1和PV2的結(jié)果均大于3S D，違反了13S規(guī)則。且PV1和PV2的連續(xù)7個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)呈逐漸上升的趨勢(shì)，違反了7T規(guī)則。因此試驗(yàn)數(shù)據(jù)失控。

2.2 室間質(zhì)控評(píng)價(jià)

對(duì)于室間質(zhì)評(píng)，從1999年衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心已不再采用VIS和DI，而是采用類似美國(guó)臨床檢驗(yàn)?zāi)芰︱?yàn)證計(jì)劃（CLIA’88）評(píng)價(jià)模式。即靶指±允許總誤差。

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定C-反應(yīng)蛋白（CRP）的可接受范圍是靶值±25%[5]。該實(shí)驗(yàn)以首次（即CRP干片剛上機(jī)）測(cè)得的均值作為靶值，并以±25%以內(nèi)作為可接受范圍，以此來判定CRP干片在機(jī)存放時(shí)間多久之后，室間質(zhì)評(píng)失敗，結(jié)果不可控。

CRP干片在機(jī)時(shí)間達(dá)到84 h后，PV2的偏倚大于靶值+25%，超出臨床檢驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的可接受范圍。測(cè)定值的準(zhǔn)確性已經(jīng)得不到保證。見表4、圖4。

圖4 允許誤差折線圖

3 討論

CRP干片中的試劑成份特殊，它的在機(jī)穩(wěn)定時(shí)間非常短，長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)影響CRP的測(cè)定值，究竟CRP干片在干化學(xué)分析儀上放置時(shí)間會(huì)對(duì)CRP測(cè)定值造成何種影響，目前尚無相關(guān)報(bào)道[6-9]。針對(duì)這個(gè)問題，該試驗(yàn)采用高，低兩種濃度的CRP質(zhì)控品—PV1和PV2，對(duì)批內(nèi)精密度，天間精密度和結(jié)果偏倚進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示CRP干片在機(jī)放置48 h內(nèi)，PV1和PV2的批內(nèi)精密度變化都較小，在可接受范圍內(nèi)。CRP干片在機(jī)放置時(shí)間達(dá)56 h，PV2的批內(nèi)精密度超出標(biāo)準(zhǔn)。PV1和PV2的天間精密度在56 h均出現(xiàn)失控[10-11]。且根據(jù)Westgard規(guī)則，當(dāng)CRP干片在機(jī)存放48 h的時(shí)候，PV2的質(zhì)控值已經(jīng)超過了2 SD，達(dá)到了預(yù)警線。CRP測(cè)定值隨在機(jī)時(shí)間增長(zhǎng)呈正偏倚，在機(jī)56 h后PV1的偏倚超出可接受范圍[12-13]。

綜上所述，在測(cè)定C-反應(yīng)蛋白（CRP）時(shí)，一定要保證CRP干片在機(jī)存放時(shí)間不超過48 h，這樣可確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性?；鶎俞t(yī)院應(yīng)根據(jù)實(shí)際測(cè)試需求，在生化分析儀上放置合適數(shù)量的CRP干片以保證CRP干片在穩(wěn)定期內(nèi)用完，減少不必要的浪費(fèi)，同時(shí)也保證結(jié)果的準(zhǔn)確性與精密度。

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Effect of Placement Time of CRP Dry Plate in the Dry Chemical Instrument on the Measurement Value

ZHANG Jun,CHENG Yun-zhang
Shanghai University of Technology,Shanghai,200093 China

ObjectiveTo study the effect of placement time of CRP dry plate in the Dry chemical instrument on the measurement value and provide necessary reference for the clinical use of CRP dry plate.MethodsThe high concentration and low concentration of quality control articles were selected and they were given 20 tests every 8 h,and whether the precision and accuracy of results was determined.ResultsWhen the in-machine time of CRP dry plate was more than 48 h,the effect on the test results was bigger,and the precision and accuracy were not qualified.ConclusionThe CRP dry plate needs to be used within 48 h after fixing on the machine.

CRP dry plate;In-machine stability;Quality control in the laboratory;Precision

R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1672-5654（2017）11（c）-0022-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.33.022

張君（1986-），男，上海人，在職碩士，研究方向：生物醫(yī)學(xué)工程。

2017-08-25）