葛明膠囊薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)研究※

馬雪云戚歡陽(yáng) 黃亦琦 錢葉雯潘東明

（1 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 350122；2 廈門市醫(yī)藥研究所·廈門市天然藥物研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門 361008）

葛明膠囊薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)研究※

馬雪云1，2戚歡陽(yáng)2*黃亦琦2*錢葉雯1潘東明1，2

（1 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 350122；2 廈門市醫(yī)藥研究所·廈門市天然藥物研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門 361008）

目的 建立葛明膠囊及處方的定性鑒別方法。方法 采用薄層色譜法，以葛根素，丹酚酸B，熊果酸和大黃素為對(duì)照品，分別對(duì)葛明膠囊及處方中的葛根、山楂、丹參及決明子進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果 所建立的薄層色譜分析方法分離效果良好。結(jié)論 所建立的鑒別方法重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，為葛明膠囊及處方的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

葛明膠囊；薄層色譜法；葛根；山楂；丹參；決明子

葛明膠囊是廈門市醫(yī)藥研究所依據(jù)中醫(yī)食療理論和現(xiàn)代中醫(yī)藥研究的成果，經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)的保健食品（國(guó)食健字G20100467），具有輔助降血脂作用[1-2]。由葛根、山楂、決明子及丹參等中藥制成，具有清肝利濕、活血理氣、潤(rùn)腸通便等功效，除輔助降血脂作用外，可用于防治脂肪肝、高脂血癥和肥胖癥[3-6]。葛明膠囊中主要藥效成分為葛根素、熊果酸、大黃素、丹酚酸B，葛根素可通過增加肝臟中膽固醇和膽汁酸的排泄來減輕高膽固醇飲食導(dǎo)致的動(dòng)脈粥樣硬化[7]。熊果酸通過促進(jìn)乙酰輔酶A羧化酶磷酸化和肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1的蛋白表達(dá)，抑制胚胎成纖維細(xì)胞分化和脂肪形成來降脂[8]。大黃素抑制動(dòng)脈粥樣硬化，降低血脂[9]。丹酚酸B通過抑制低密度脂蛋白（LDL）被氧化成氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL），從而減少巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等釋放酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子使原已發(fā)生的動(dòng)脈粥樣硬化（AS）病變發(fā)展延緩甚至消退[10]。為嚴(yán)格控制葛明膠囊內(nèi)在質(zhì)量的穩(wěn)定性，提升產(chǎn)品技術(shù)水平，本文采用多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)，為葛明膠囊及處方質(zhì)量檢測(cè)和控制方法提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 XS205電子分析天平（瑞士梅特勒，托利多公司，d=0.01 mg）；KQ-500VDB型三頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WS70-1紅外線快速干燥器（南通科學(xué)儀器廠），WFH-203三用紫外分析儀（上海精課實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 試藥與試劑 甲醇（批號(hào)20160902），石油醚（60～90°C，批號(hào)1607181），乙酸乙酯 （批號(hào)1606211），無水乙醇（批號(hào)20160222），三氯甲烷（批號(hào)1411181），鹽酸 （批號(hào)1410211），氨水 （批號(hào)1412281），硫酸（批號(hào)1311251），均為分析純（西隴科學(xué)股份有限公司）。硅膠G/GF254薄層板（青島海洋化工有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水均為超純水系統(tǒng)自制雙蒸水。

標(biāo)準(zhǔn)品：葛根素 （批號(hào)110752-201313，純度95.5%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），丹酚酸B（批號(hào)111562-200403，中國(guó)藥品生物制品鑒定所），大黃素（110876-200619，中國(guó)藥品生物制品鑒定所），熊果酸（110844-2004120，中國(guó)藥品生物制品鑒定所）。葛明膠囊（批號(hào) 20140407，20140523，20140817，廈門市醫(yī)藥研究所）。飲片：丹參（批號(hào)161215），山楂（批號(hào)161219），澤瀉（批號(hào)161116）購(gòu)自廈門燕來福制藥有限公司；決明子（批號(hào)1608270122），葛根（批號(hào)1611010072）購(gòu)自亳州市滬譙藥業(yè)有限公司。

2 方法及結(jié)果

2.1 提取溶劑的選擇

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取葛根素、熊果酸、丹酚酸B對(duì)照品，分別加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 葛明膠囊提取物制備：取葛明膠囊內(nèi)容物0.05 g，平行稱7份，分別加入10 mL水、石油醚（60～90°C）、70%乙醇、甲醇、無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯浸泡30 min，超聲處理（100 W，80 HZ） 30 min，過濾，濾液蒸干至1 mL（石油醚（60～90°C） 提取物蒸干至0.5 mL），作為供試品溶液。葛明處方提取物制備：按葛明膠囊處方配比，取各單味藥混合，粉碎，稱取2 g（n=3），加入20 mL的甲醇，浸泡30 min，超聲處理（100 W，80 HZ）30 min，過濾，濾液蒸干，加甲醇3 mL使溶解，過濾后作為葛明處方供試品溶液。

2.1.3 薄層色譜條件及結(jié)果 取以上供試品溶液5 μL，對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水 （14∶1∶1） 為展開劑[11]，展開，展距3.5 cm，取出，晾干，再以石油醚-乙酸乙酯（3∶1） 為展開劑，展開，展距7.5 cm，取出，晾干，在氨蒸氣中熏蒸10 min，置日光下或紫外燈（365 nm）下檢視，或噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見圖1。

圖1 葛明膠囊7種不同提取溶劑薄層色譜圖

2.2 葛明膠囊中葛根、山楂、丹參的定性鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 稱取3個(gè)不同批次（20140407，20140523，20140817） 的葛明膠囊內(nèi)容物各0.05 g，分別加入10 mL甲醇，浸泡30 min，超聲處理（100 W，80 HZ） 30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 制備方法同2.1.1。

2.2.3 色譜條件及結(jié)果 色譜條件同2.1.3，結(jié)果見圖2~3。

圖2 葛明膠囊中葛根、山楂、丹參的薄層色譜圖

圖3 葛明處方中葛根、山楂、丹參薄層圖

2.3 葛明膠囊中決明子的定性鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 稱取3個(gè)不同批次的（20140407，20140523，20140817）葛明膠囊內(nèi)容物0.5 g，加30%乙醇-鹽酸 （10∶1） 的混合液30 mL使溶解，置水浴鍋中加熱回流1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶液2 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取適量大黃素對(duì)照品，用甲醇配成0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

2.3.3 色譜條件及結(jié)果 取以上供試品溶液、對(duì)照品溶液2 μL，在同一硅膠GF254薄層板上分別點(diǎn)樣，以石油醚∶乙酸乙酯（3∶1） 為展開劑，展開，展距7.5 cm，取出，晾干，在氨蒸氣中熏蒸10 min，置紫外365 nm下檢視，結(jié)果見圖4~5。

圖4 葛明膠囊中中決明子薄層色譜圖

圖5 葛明處方中決明子薄層色譜圖

3 討論

以葛根素、丹酚酸B和熊果酸為對(duì)照品，考察不同溶劑提取葛明膠囊，通過薄層色譜圖（圖1）可以同時(shí)檢測(cè)到3種對(duì)照品，且各組分間的分離效果較好，故采用甲醇作為供試樣品的提取溶劑。從圖2和3可見，樣品展開后在氨蒸氣中熏蒸10 min，置紫外365 nm下檢視，供試品在與葛根素對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；另外，展開后的薄層板經(jīng)過10%硫酸顯色后，供試品與丹酚酸B、熊果酸對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，置紫外365 nm下檢視，供試品與丹酚酸B、熊果酸對(duì)照品相應(yīng)位置處顯相同的熒光斑點(diǎn)，該薄層鑒別方法分離度好，Rf值適宜，穩(wěn)定性好，適合于葛明膠囊和處方中葛根、山楂、丹參的定性鑒別。由圖4和5可見，樣品展開后，在氨氣中熏蒸10 min后，供試品與大黃素對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，置紫外365 nm下檢視，供試品與大黃素對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，該薄層鑒別方法分離度好，Rf值適宜，穩(wěn)定性好。適合于葛明膠囊和處方中決明子的定性鑒別。實(shí)驗(yàn)確定的多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)葛明膠囊及處方中有效成分的薄層色譜定性鑒定方法，為嚴(yán)格控制葛明膠囊內(nèi)在質(zhì)量的穩(wěn)定性，保障產(chǎn)品質(zhì)量，提升產(chǎn)品技術(shù)水平提供依據(jù)。

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The Experimental Study on the Identification of Geming Capsules by Thin Layer Chromatography

MA Xueyun1,2,QI Huanyang2*,HUANG Yiqi2*,QIAN Yewen2,PAN Dongming1,2
(1.College of Pharmacy,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fujian Province,Fuzhou 350122,China;2.Xiamen Medicine Institute·Xiamen Natural Medicine Research and Development Key Laboratory,Fujian Province,Xiamen 361008,China)

Objective To establish the qualitative identification method of Geming capsule and prescription.Methods The puerarin,salvianolic acid B,ursolic acid and emodin were selected as the reference substance.The qualitative identification of Pueraria lobata,Hawthorn,Salvia miltiorrhiza and Cassia obtusifolia was carried out by thin layer chromatography (TLC).Results The established TLC analysis method is effective.Conclusion The identification method has good repeatability and strong specific,can provide the basis for the quality control of Geming capsule and prescription.

Geming capsule;thin layer chromatography;pueraria lobata;hawthorn;salvia miltiorrhiza;cassia obtusifolia

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.23.067

1672-2779（2017）-23-0150-03

福建省廈門市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目【No.3502Z20021011】

*通訊作者：huanyang7@163.com；huangyq502@sina.com

2017-10-27）