谷胱甘肽肌膚凝膠劑對(duì)大鼠皮膚淺Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究

王清+陶繼善+朱萱萱+張迪+楊晨+符蕊

[摘要] 目的 觀察谷胱甘肽肌膚凝膠劑對(duì)大鼠皮膚淺Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的作用。 方法 選取60只雄性SD大鼠，分為正常組、模型組、生長(zhǎng)因子組、康復(fù)新組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組和高劑量組，每組各10只。采用75℃熱水浸燙脫毛區(qū)（3 cm×3 cm）25 s，成功建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型。應(yīng)用谷胱甘肽肌膚凝膠劑涂抹燙傷創(chuàng)面，并以生長(zhǎng)因子組和康復(fù)新組為對(duì)照，給藥量為1 mL/只，每天涂藥2次，連續(xù)給藥16 d，涂藥后創(chuàng)面不加覆蓋，逐日觀察創(chuàng)面感染愈合情況及動(dòng)物全身情況（體征表現(xiàn)和創(chuàng)面結(jié)痂、愈合情況），連續(xù)觀察20 d。 結(jié)果 谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組對(duì)淺Ⅱ度燙傷模型大鼠可縮短創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間，縮小愈合面積，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。病理組織學(xué)檢查結(jié)果表明：模型組可見創(chuàng)面結(jié)痂，痂皮內(nèi)為較多的炎性滲出物，痂皮下肉芽組織已經(jīng)再生修復(fù)，創(chuàng)緣周圍開始有少量上皮再生，并逐漸開始覆蓋創(chuàng)面；與模型組相比，各組均有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用，炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟，上皮再生較為明顯，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量作用與重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子相當(dāng)。 結(jié)論 谷胱甘肽肌膚凝膠劑對(duì)淺Ⅱ度燙傷具有較好地促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。

[關(guān)鍵詞] 谷胱甘肽肌膚凝膠劑；淺Ⅱ度燙傷模型；病理組織學(xué)；創(chuàng)面結(jié)痂；愈合情況

[中圖分類號(hào)] R644 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）11（a）-0009-06

Experiment study of healing effects of glutathione skin gel on superficial second-degree burn wounds in rats

WANG Qing1 TAO Jishan2 ZHU Xuanxuan1 ZHANG Di1 YANG Chen1 FU Rui1

1.Pharmacological Room， Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China； 2.Chengdu Zhuoyang Biotechnology Co.， Ltd.， Sichuan Province， Chengdu 611500， China

[Abstract] Objective To observe the effects of glutathione skin gel on wound healing of superficial second-degree burn in rats. Methods 60 SPF male SD rats were divided into normal group， model group， growth factor group， Kangfuxin group， low-dose and high-dose glutathione skin gel groups， each group had 10 rats. The superficial second-degree burn model was successfully established by scalding the hair-removed area （3 cm × 3 cm） of rats with 75℃ water bath for 25 s. The rats were subjected to application of glutathione skin gel on wound without coverage （1 mL， bid） for 16 days， and recombinant human basic fibroblast growth factor and Kangfuxin were used as control. The wound healing process and whole body conditions of animals （physical signs and scabs formation） were observed daily for 20 days. Results Compared with the model group， treatment of high-dose glutathione skin gel shortened the time of wound healing and getting rid of scabs， reduced healing area in superficial second-degree burn model of rats （P < 0.05 and P < 0.01）. Histopathological examination results showed that the wound scab was visible in model group， but with excessive inflammatory exudate. Granulation tissue had been repaired and regenerated under the scabs， and small quantities of epithelia had been regenerated around the wound edge， covering the wound gradually. Compared with the model group， all other groups promoted wound healing and decreased inflammatory exudates. And regeneration of the granulation tissue and epithelia were more obvious and significant in these groups. High-dose glutathione skin gel group and growth factor group had comparable effects on the wound healing. Conclusion Glutathione skin gel significantly promotes wound healing of superficial second-degree burn in rats.endprint

[Key words] Glutathione skin gel； Superficial second-degree burn model； Pathological histology； Wound scab； Wound healing

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸構(gòu)成的三肽，在體內(nèi)起重要作用的是還原型谷胱甘肽。還原型谷胱甘肽是細(xì)胞內(nèi)主要的非蛋白質(zhì)巰基化合物，在許多生命活動(dòng)中起著直接或間接的作用，包括基因表達(dá)調(diào)控、酶活性和代謝調(diào)節(jié)、對(duì)細(xì)胞的保護(hù)、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)、免疫功能調(diào)節(jié)等。還原型谷胱甘肽在多學(xué)科、多病種中作為一種重要的治療或輔助治療藥物[1-2]。近年來發(fā)現(xiàn)，谷胱甘肽除具有以上作用外還具有祛斑、護(hù)膚和促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合的作用[3-4]。為了驗(yàn)證谷胱甘肽促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合作用，本研究建立了動(dòng)物淺Ⅱ度燙傷模型，應(yīng)用谷胱甘肽肌膚凝膠劑涂抹燙傷創(chuàng)面，以觀察其促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合作用，現(xiàn)報(bào)道如下；

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

動(dòng)物：SD大鼠60只，雄性，體重180～200 g，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：scxk（蘇）2014-0001。

儀器：恒溫水浴鍋HH-2，國(guó)華電器有限公司；剃毛器，松下電工萬寶電器（廣州）有限公司；秒表，上海秒表廠。

藥物：谷胱甘肽肌膚凝膠劑，美國(guó)中央配方制藥公司，批號(hào)：20AEGBE，由水、谷胱甘肽、維生素C、葡萄糖和苯扎氯銨組成?？瞻谆|(zhì)，美國(guó)中央配方制藥公司，批號(hào)：20AEAABB，由水、維生素C、葡萄糖和苯扎氯銨組成。重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，南海朗肽制藥有限公司，批號(hào)：1503004?？祻?fù)新，四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限公司，批號(hào)：160181。水合氯醛，上海五連化工廠，批號(hào)：20150315。

1.2 方法

1.2.1 淺Ⅱ度燙傷模型建立[1-2] 實(shí)驗(yàn)前每只大鼠背部用剃毛器剃毛，面積為3 cm×3 cm，腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg。麻醉后，背部放置一小木板（中間開洞），暴露脫毛區(qū)。取50只大鼠，用一薄小塑料袋裝75℃熱水，放在大鼠脫毛區(qū)上，用熱水浸燙脫毛區(qū)25 s，造成淺Ⅱ度燙傷。另10只大鼠為正常組，不做燙傷處理。

1.2.2 試驗(yàn)分組 將淺Ⅱ度燙傷大鼠分成5組，每組各10只，分別為模型組、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子組（生長(zhǎng)因子組）、康復(fù)新組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組、谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組，給予相應(yīng)藥物1 mL/只，每天涂藥2次，模型組大鼠給予生理鹽水溶液1 mL/只。連續(xù)給藥16 d，涂藥后創(chuàng)面不加覆蓋，逐日觀察創(chuàng)面感染愈合情況及動(dòng)物全身情況（體征表現(xiàn)和創(chuàng)面結(jié)痂、愈合情況），連續(xù)觀察（創(chuàng)面感染愈合情況及動(dòng)物全身情況）20 d后，全部脫頸椎處死，取燙傷部位，用10%甲醛溶液固定，觀察大鼠燙傷部位病理組織學(xué)變化情況。

1.2.3 大鼠燙傷部位病理組織學(xué)變化評(píng)價(jià) 根據(jù)炎性滲出物、肉芽組織再生及上皮再生情況進(jìn)行評(píng)分，由東南大學(xué)病理教研室完成。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[5-6]如下：①炎性滲出物，1～3分：少許壞死組織+少量纖維素滲出+少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；4～6分：較多壞死組織+較多纖維素滲出+較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；7～9分：大量壞死組織+大量纖維素滲出+大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。②肉芽組織再生，1～3分：僅少許細(xì)胞浸潤(rùn)，無肉芽組織形成；4～6分：薄、不成熟肉芽組織，以少量新生毛細(xì)血管、纖維母細(xì)胞及炎細(xì)胞浸潤(rùn)為主；7～9分：中等程度再生的肉芽組織，更多的新生毛細(xì)血管形成，較多的纖維母細(xì)胞出現(xiàn)伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有膠原纖維沉積；10～12分：厚、血管化的肉芽組織，纖維細(xì)胞增多，膠原纖維沉積明顯，向瘢痕組織轉(zhuǎn)化。③上皮再生修復(fù)，1分：少許上皮再生覆蓋創(chuàng)面；2分：較多上皮再生覆蓋創(chuàng)面；3分：創(chuàng)面全部被上皮再生覆蓋。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠淺Ⅱ度燙傷造模后觀察

淺Ⅱ度燙傷大鼠造模后，局部皮膚發(fā)白，水腫不明顯。見圖1。

2.2 給藥后大鼠體征表現(xiàn)

2.2.1 進(jìn)食量 造模后淺Ⅱ度燙傷大鼠食欲不振，進(jìn)食量減少，給藥物干預(yù)后各組進(jìn)食量與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.2.2 體重 造模后淺Ⅱ度燙傷大鼠體重減輕，給予藥物干預(yù)后各組大鼠體重略有增加，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。自給藥第2周起模型組與正常組大鼠體重差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見表2。

2.2.3 飲水量 造模后，淺Ⅱ度燙傷大鼠飲水量明顯減少；給予藥物干預(yù)后各組大鼠飲水量略有增加，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

2.3 造模后各組動(dòng)物情況

2.3.1 模型組 淺Ⅱ度燙傷大鼠造模后，創(chuàng)面有感染，5～6 d后創(chuàng)面輕微結(jié)痂，18 d時(shí)仍有部分大鼠無愈合傾向。見圖2。

2.3.2 生長(zhǎng)因子組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創(chuàng)面無感染、無膿苔現(xiàn)象；用藥5 d后，創(chuàng)面結(jié)痂；12 d后脫痂部分愈合，或留有小條狀瘢痕；16 d部分創(chuàng)面基本愈合，組織高度與正常皮膚一致。見圖3。

2.3.3 康復(fù)新組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創(chuàng)面無感染、無膿苔現(xiàn)象；用藥6 d后，創(chuàng)面結(jié)痂，13 d后創(chuàng)面脫痂，17 d后部分創(chuàng)面基本愈合，或留有小條狀瘢痕，愈合創(chuàng)面有鼠毛長(zhǎng)出，組織高度與正常皮膚一致。見圖4。

2.3.4 谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創(chuàng)面無感染、無膿苔現(xiàn)象；用藥6 d后，創(chuàng)面結(jié)痂；13 d后創(chuàng)面脫痂；17 d后創(chuàng)面基本愈合，或留有小條狀瘢痕，愈合創(chuàng)面有鼠毛長(zhǎng)出，組織高度與正常皮膚一致。見圖5。endprint

2.3.5 谷胱甘肽肌膚凝膠劑低劑量組 淺Ⅱ度燙傷大鼠在用藥后，創(chuàng)面無感染、無膿苔現(xiàn)象；用藥6 d后，創(chuàng)面結(jié)痂，15 d后創(chuàng)面脫痂；18 d后創(chuàng)面基本愈合，組織高度與正常皮膚一致。見圖6。

2.4 谷胱甘肽肌膚凝膠劑對(duì)淺Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間的影響

與模型組比較，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間，縮小愈合面積，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）；生長(zhǎng)因子組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間，縮小愈合面積，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。康復(fù)新組可縮短淺Ⅱ度燙傷模型大鼠創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間，縮小愈合面積（P < 0.05或P < 0.01）。見表4。

2.5 病理組織學(xué)檢查結(jié)果

正常組大鼠皮膚結(jié)構(gòu)清晰，被覆表皮完整，鱗狀上皮較薄，真皮內(nèi)無充血炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，附屬結(jié)構(gòu)完整。模型組可見創(chuàng)面結(jié)痂，痂皮內(nèi)為較多的炎性滲出物，痂皮下肉芽組織已經(jīng)再生修復(fù)，創(chuàng)緣周圍開始有少量上皮再生，并逐漸開始覆蓋創(chuàng)面。與模型組相比，各治療組均有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用，炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟，上皮再生較為明顯，以谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組、康復(fù)新組和生長(zhǎng)因子組較明顯。見圖7。

2.6 各組大鼠病理學(xué)檢查評(píng)分比較

與模型組相比，谷胱甘肽肌膚凝膠劑高劑量組和康復(fù)新組大鼠病理學(xué)檢查評(píng)分明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表5。

3 討論

皮膚是人體最大器官，每個(gè)人皮膚約有2 m2，每平方厘米皮膚有10～70個(gè)毛囊、200～250個(gè)汗腺。皮膚組成主要有表皮、真皮、皮下組織3層。表皮的最外層為角質(zhì)層，是阻止外源性物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)的屏障。角質(zhì)層是由角質(zhì)化細(xì)胞和分布其中的油脂構(gòu)成。角質(zhì)細(xì)胞內(nèi)充滿一束束干燥僅含20%水份的脂蛋白。真皮層含豐富的結(jié)締組織和血管汗腺、毛發(fā)淋巴管、皮脂腺及神經(jīng)等組織。最內(nèi)層的皮膚便是皮下組織。皮膚創(chuàng)面愈合過程有4個(gè)主要步驟，凝血期、炎癥期、增生期、成熟期，愈合過程十分復(fù)雜，影響創(chuàng)面愈合的因素也很多[7]。

本研究采用75℃熱水浸燙動(dòng)物脫毛區(qū)25 s，成功建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型。動(dòng)物皮膚呈現(xiàn)局部紅腫，有水皰形成，內(nèi)含黃色血漿樣液體，可見潮紅的創(chuàng)面，動(dòng)物疼痛，體重減輕，進(jìn)食量減少。應(yīng)用谷胱甘肽肌膚凝膠劑對(duì)淺Ⅱ度燙傷模型大鼠的創(chuàng)面進(jìn)行連續(xù)16 d治療后，對(duì)皮膚創(chuàng)面愈合過程的凝血期、炎癥期、增生期和成熟期都有較好的作用。研究顯示，谷胱甘肽肌膚凝膠劑可清除在皮膚炎癥期創(chuàng)面產(chǎn)生過量的活性氧[8]。在治療的過程中GSH涂于創(chuàng)面的作用為創(chuàng)面靶向補(bǔ)充，GSH可還原過氧化物及自由基后被氧化為谷胱甘肽二硫鍵GSSG。GSSG經(jīng)由體內(nèi)的谷胱甘肽還原酶（GR）及輔酶（NADPH）還原成GSH，循環(huán)使用[9]。GSH還可以協(xié)助被氧化而失去功能的維生素A、C及E，還原并循環(huán)使用。靶向補(bǔ)充GSH，通過活化T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，提升創(chuàng)面機(jī)體免疫力，縮短皮膚炎癥期并減少感染及水腫[10-20]。本研究結(jié)果也表明谷胱甘肽肌膚凝膠劑可縮短創(chuàng)面脫痂時(shí)間和愈合時(shí)間，縮小愈合面積，愈合后的皮膚與正常皮膚高度一致，未見瘢痕增生。病理檢查也提示谷胱甘肽肌膚凝膠劑具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用，創(chuàng)面炎性滲出物減少，肉芽組織更加成熟。

本研究表明谷胱甘肽肌膚凝膠劑具有極強(qiáng)抗氧化能力，能靶向作用于燙傷皮膚部位。該產(chǎn)品采用特殊的包裹及透皮技術(shù)，保護(hù)了GSH的抗氧化活性，同時(shí)使皮膚能靶向高效吸收，在淺Ⅱ度動(dòng)物燙傷模型上應(yīng)用后取得了良好療效。另外，實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物體癥未見異常，說明了谷胱甘肽肌膚凝膠劑安全，為臨床使用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2017-04-24 本文編輯：程 銘）endprint