APPswe／PS1d E9轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)突觸素及BDNF／Trk-B蛋白表達(dá)的變化*

董雪帆，王 婷，李 甜，焦娟娟，曲雪松，祁金順，楊 威

APPswe／PS1d E9轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)突觸素及BDNF／Trk-B蛋白表達(dá)的變化*

董雪帆，王 婷，李 甜，焦娟娟，曲雪松，祁金順，楊 威△

（山西醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)系，細(xì)胞生理學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，太原030001）

目的：觀察APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦突觸素及BDNF／Trk-B蛋白表達(dá)變化。方法：選用9月齡APP／PS1雄鼠（n1）和同窩對照野生型 WT雄鼠（n2）。采用 Western blot（n1＝6；n2＝6）、免疫組化（n1＝4；n2＝4）兩種方式定量、定位測定小腦組織功能活性依賴蛋白突觸素、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）和其高親和力受體（Trk-B）的蛋白表達(dá)。用透射電鏡觀察小腦皮質(zhì)突觸超微結(jié)構(gòu)變化（n1＝2；n2＝2）。結(jié)果：與WT組相比，APP／PS1組小腦皮質(zhì)內(nèi)突觸素、BDNF／Trk-B表達(dá)明顯減少；突觸間隙增寬，突觸后致密區(qū)變薄，密度降低。結(jié)論：APP／PS1小鼠小腦皮質(zhì)中突觸素、BDNF／Trk-B蛋白含量均明顯降低，突觸超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生明顯改變，提示AD小腦突觸數(shù)量及形態(tài)變化可能與BDNF合成及釋放減少有關(guān)。

APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠；小腦；突觸素；BDNF／Trk-B；突觸

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是老齡人中最常見的認(rèn)知功能進(jìn)行性下降的疾病，是發(fā)生在中樞神經(jīng)的一種病因未明的原發(fā)性神經(jīng)退行性疾病。其主要病理改變?yōu)锳β淀粉樣斑塊沉積、神經(jīng)原纖維纏結(jié)、大量神經(jīng)元丟失和腦萎縮［1］。“Aβ學(xué)說”認(rèn)為Aβ的集聚及其神經(jīng)毒性作用是AD的主要病因［2］。研究表明，AD患者或AD模型鼠的大腦皮層顳葉和海馬內(nèi)有大量Aβ沉積，并且突觸結(jié)構(gòu)和突觸傳遞效能也受到明顯損害［3，4］。動物體外研究發(fā)現(xiàn)，Aβ可直接引發(fā)突觸傳遞功能異常［5］，影響樹突棘的密度和穩(wěn)定性，突觸前神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放，突觸結(jié)構(gòu)和突觸傳遞效能也受到明顯損害。因此，Aβ神經(jīng)毒性作用導(dǎo)致的突觸丟失或突觸功能異常被廣泛認(rèn)為是AD認(rèn)知損害的潛在機(jī)制。

小腦是隨動物運(yùn)動的復(fù)雜化而逐漸進(jìn)化的腦部結(jié)構(gòu)。長期以來，人們認(rèn)為小腦只有運(yùn)動功能，但隨著小腦非運(yùn)動功能（如感覺、知覺、語言及認(rèn)知功能等）的發(fā)現(xiàn)及證實(shí)［6，7］，小腦在 AD認(rèn)知障礙中的作用也逐漸引起重視。臨床尸檢病理研究顯示，在晚期AD病人小腦內(nèi)Aβ1-42水平增高，細(xì)胞形態(tài)和功能發(fā)生明顯改變。例如，浦肯野細(xì)胞數(shù)量大量丟失，樹突長度變短，樹突末端分支減少等［8］。

APPswe／PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠是目前常用的AD轉(zhuǎn)基因模型鼠。其優(yōu)勢在于將兩個易感基因結(jié)合在一起，從而縮短病理變化時間，并使病理特征多樣化，能夠較好的模擬AD患者的早期病理和行為特征。研究發(fā)現(xiàn)，7～8月齡 APPswe／PS1dE9轉(zhuǎn)基因AD小鼠小腦內(nèi)含有高水平可溶性Aβ1-42，并出現(xiàn)散在Aβ斑塊［9］。突觸傳遞效能的長時程抑制（longtermpotentiation，LTD）是小腦學(xué)習(xí)記憶的細(xì)胞突觸模式和神經(jīng)基礎(chǔ)。小腦LTD受損將導(dǎo)致動物依賴自身運(yùn)動信息的空間定位航行能力明顯降低，而運(yùn)動功能卻不受影響。最新研究表明，APPswe／PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)浦肯野細(xì)胞興奮性降低，LTD明顯減?。?0］。以上研究結(jié)果提示，在AD的發(fā)生過程中小腦神經(jīng)元突觸形態(tài)和功能會發(fā)生明顯改變，但目前尚缺乏形態(tài)學(xué)證據(jù)支持，其具體機(jī)制還不十分清楚。

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derive neurotrophic factor，BDNF）是一種有促進(jìn)和維持神經(jīng)元生長、存活、和執(zhí)行功能作用的活性蛋白因子，在突觸活動和突觸可塑性中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。突觸素（synaptophysin）是突觸前囊泡蛋白釋放神經(jīng)遞質(zhì)的標(biāo)志物［11］，與突觸的生長、修復(fù)、再生和突觸重塑密切相關(guān)。本研究將利用APPswe／PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠，應(yīng)用Western blot，免疫組織化學(xué)和透射電鏡實(shí)驗(yàn)手段，觀察AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠小腦內(nèi)突觸相關(guān)蛋白表達(dá)以及超微結(jié)構(gòu)的變化，揭示AD小腦內(nèi)突觸相關(guān)結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)改變，為進(jìn)一步探討小腦突觸傳遞功能變化的可能機(jī)制提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

APPswe／PS1dE9（APP／PS1）雙轉(zhuǎn)基因小鼠和同窩同月齡野生型（wild type，WT）C57BL／6J小鼠，9月齡各12只，均為雄性，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所基因工程平臺提供。飼養(yǎng)環(huán)境自然晝夜節(jié)律光照，自由攝食進(jìn)水，通風(fēng)良好，（21±2）℃恒溫。

1.2 儀器和試劑

冰凍切片機(jī)（LEICA CM1850），光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS1X71），圖像采集系統(tǒng)（OLYMPUSDP71），電泳儀（BIO-RAD），轉(zhuǎn)膜儀（BIO-RAD），凝膠成像系統(tǒng)（BIO-Rad），Scanscope數(shù)字病理切片掃描成像系統(tǒng)（Aperio）。本 實(shí) 驗(yàn) 一 抗 為 β-actin（博 士 德 生 物BM0627，小鼠單克隆抗體），6E10（Sigma USA，小鼠單克隆抗體），Synaptophysin（abcam ab32127，兔單克隆抗體），BDNF（abcam ab108319，兔單克隆抗體），TrkB（abcam ab18987，兔單克隆抗體）。二抗為山羊抗兔（博士德生物 BA1054），山羊抗小鼠（博士德生物 BA1050）。

1.3 Western blot實(shí)驗(yàn)

小鼠腹腔注射過量的5%水合氯醛后斷頭，在冰上取新鮮小腦組織。稱重，剪碎組織，加入組織裂解液，在4℃靜置30 min。再加入 PMSF后，立即在超聲中混勻后，在4℃下靜置4 h后，離心，測蛋白濃度后備用。配置12%的分離膠和5%的濃縮膠后，取定量組織進(jìn)行SDS-PAGE電泳。濃縮膠穩(wěn)壓80 V，分離膠穩(wěn)壓120 V。轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，5%的牛血清白蛋白（ABS）室溫封閉1 h。分別加入6E10（1：500），Synaptophysin（1：60 000），BDNF（1：5 000），TrkB（1：1 000）。4℃過夜。用 TBST洗膜 3次 ×5 min，然后分別加入辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗兔（1：3 000），山羊抗小鼠（1：4 000）的二抗。室溫下孵育2 h。用TBST洗膜3次×5 min，電泳凝膠成像分析儀采集結(jié)果。用AlphaView SA軟件進(jìn)行光密度值分析，儲存目的蛋白與內(nèi)參β-actin的光密度比值［12］。

1.4 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)

將小鼠用5%水合氯醛麻醉后，PBS和4%的多聚甲醛行心臟灌注，取腦。置于4%多聚甲醛溶液中固定過夜，30%蔗糖脫水、包埋、切片，腦片厚度30μm。腦片用PBS漂洗，5%H2O2常溫避光孵育腦片15 min，PBS再次漂洗，5%正常血清室溫孵育30 min；滴加一抗 Synaptophysin（1：250），BDNF（1：200），TrkB（1：40）。4℃孵育過夜后，室溫孵育 2 h；PBS漂洗，滴加二抗羊抗兔 IgG（1：100），室溫孵育 2 h后PBS漂洗，ABC復(fù)合物室溫孵育2 h；漂洗后滴加DAB顯色劑避光反應(yīng)30 min，蒸餾水清洗后加蘇木素復(fù)染。酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，放于陰涼通風(fēng)處保存［13］。免疫組化結(jié)果用Aperio公司的cytoplasmic v2軟件進(jìn)行灰度值分析，再轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的光密度值進(jìn)行統(tǒng)計。

1.5 透射電鏡實(shí)驗(yàn)

將小腦皮層切成1mm×1mm×1mm的組織塊，用4%多聚甲醛固定4 h（4℃）后，用磷酸緩沖液（pH 7.2）沖洗，置于1%鋨酸中后固定2 h，雙蒸水沖洗后系列酒精脫水，丙酮與包埋劑混合液室溫浸透3 h，包埋劑環(huán)氧樹脂618包埋，40℃24 h浸透，60℃48 h聚合。超薄切片機(jī)（瑞典 LKB）切片（60～90 nm），醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染，透射電鏡（JEM-1011）下觀察并拍照。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，兩組間比較用獨(dú)立配對 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)Aβ沉積情況

如圖1所示，9月齡 APP／PS1組（圖1B）轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)有Aβ斑塊的沉積。且Aβ沉積主要部位為小腦的Ⅵ、Ⅶ小葉。而同齡的WT組（圖1A）則沒有Aβ斑塊的沉積（圖1，見彩圖頁Ⅲ）。

Fig. 1 The deposition of Aβ plaques in cerebellar A-A’：Representative image of total Aβ plaques in the cerebellar of 9 months old of WT mice；B’-B’：Representative image of total Aβ plaques in the cerebellar of 9 months old of APP/PS1 mice；A：Wild type mice group；B：App/PS1 mice group；A-B：IHC-Fr×10；A’-B’：IHC-Fr ×40

2.2 APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)突觸素蛋白含量和形態(tài)的改變

小腦由小腦皮質(zhì)和小腦核構(gòu)成。用Western blot技術(shù)可以分析整個小腦的蛋白表達(dá)含量，而單純對于小腦皮質(zhì)的分析則可以依靠免疫組織化學(xué)。兩個技術(shù)可以相互應(yīng)證，也可互為補(bǔ)充。突觸素是一種鈣結(jié)合糖蛋白，位于軸突終末的突觸前囊泡膜上，其定位和定量可準(zhǔn)確反映突觸的分布和功能狀態(tài)，從而反映其可塑性。

圖2所示，與 WT對照組（1.000±0.476）相比，APP／PS1轉(zhuǎn)基因組（0.200±0.176）小鼠小腦組織的突觸素表達(dá)下調(diào)（p＜0.05）。

Fig.2 The expression of synaptophysin in the cerebellum of mice.Western blot of homogenized cerebella from wild-type（WT）and APP／PS1 mice.Synaptopysin was normalized toβ-actin.Note that，there was a decrease of protein optical density in APP／PS1 mice（n＝6）

圖3，表1所示，小腦皮質(zhì)分為3層，分別為分子層，浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層。突觸素陽性反應(yīng)表現(xiàn)為棕褐色顆粒，它在APP／PS1組小鼠小腦中出現(xiàn)的比重少。同WT對照組相比，APP／PS1組小鼠小腦分子層突觸素含量減少，但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。在浦肯野細(xì)胞層（p＜0.01）和顆粒細(xì)胞層（p＜0.05）都有明顯的減少，尤以浦肯野細(xì)胞層明顯，極個別浦肯野細(xì)胞的胞漿呈弱陽性反應(yīng)。然而，兩組浦肯野細(xì)胞均為單層排列，呈梨形或燒瓶形，細(xì)胞直徑約25～30μm，形態(tài)上并無明顯差別（圖3，見彩圖頁Ⅲ）。

Fig. 3 Synaptophysin expression in cerebellar cortex of mice（IHC-Fr ×400）A-B：Digital images of immunohistochemical staining for synaptophysin in molecular layer（ML），purkinje cell layer（PCL）and granular layer（GL）from wild-type（WT）and APP/PS1 mice. There were weak positive reaction in the purkinje cell layer（PCL）and granular layer（GL）in APP/PS1 mice（n=4）

Tab.1 The relative optical density of synaptophysin in cerebellar cortex of mice

2.3 APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)的BDNF以及其高親和力受體Trk-B的含量

BDNF／Trk-B信號通路不僅作用于突觸前，對突觸后也有重要的作用，它可以改變突觸前的遞質(zhì)釋放而影響突觸強(qiáng)度的改變。

圖4，表2所示，與WT對照組相比，APP／PS1轉(zhuǎn)基因小鼠小腦組織的 BDNF表達(dá)下調(diào)（p＜0.01），Trk-B的表達(dá)下調(diào)（p＜0.05）。

圖5A和表3所示，免疫組化實(shí)驗(yàn)中，BDNF陽性反應(yīng)表現(xiàn)為棕褐色顆粒，它在APP／PS1組小鼠小腦皮質(zhì)浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層中出現(xiàn)的比重大。與WT對照組相比，APP／PS1組小鼠小腦分子層BDNF含量減少，但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），在浦肯野細(xì)胞層（p＜0.05）和顆粒細(xì)胞層（p＜0.05）都有明顯的減少，浦肯野細(xì)胞樹突也變得短小，分枝少。而浦肯野細(xì)胞單層排列整齊，形態(tài)無明顯差異（圖5，見彩圖頁Ⅳ）。

Fig. 5 Brain-derived neurotrophic factor（BDNF，A-A＇）/Tyrosine kinase B（Trk-B，B-B＇）expression in cerebellar cortex of mice A-B＇：Digital images of immunohistochemical staining for BDNF/Trk-B in molecular layer（ML），purkinje cell layer（PCL）and granular layer（GL）from wild-type（WT）and APP/PS1 mice（IHC-Fr ×400）. There was weak positive reaction in the purkinje cell layer（PCL）and granular layer（GL）in APP/PS1 mice stained BDNF. All the cortex had weak positive reaction in APP/PS1 mice stained Trk-B（n=4）

圖5B和表4所示，Trk-B陽性反應(yīng)仍表現(xiàn)為棕褐色顆粒，與WT對照組相比，APP／PS1組小鼠小腦皮質(zhì)Trk-B在分子層，浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層均有明顯的表達(dá)下調(diào)趨勢（p＜0.01）。浦肯野細(xì)胞樹突也變得短小，分枝減少。而浦肯野細(xì)胞形態(tài)并無明顯差異。

Fig.4 The expression of BDNF／Trk-Bin the cerebellum of mice.Western blot of homogenized cerebellar from wild-type（WT）and APP／PS1 mice.BDNF／Trk-Bwere normalized toβ-actin.Note that，there was a decrease of protein optical density in APP／PS1 mice（n＝6）

Tab.2 The relative optical density of BDNF／Trk-B in the cerebellum of mice

Tab.3 The relative optical density of BDNF in cerebellar cortex of mice

Tab.4 The relative optical density of Trk-Bin cerebellar cortex of mice

2.4 APP／PSl轉(zhuǎn)基因小鼠小腦皮質(zhì)形態(tài)學(xué)的改變

以上結(jié)果證實(shí)小鼠小腦突觸發(fā)生了改變。而電鏡超微結(jié)構(gòu)更能清楚直觀的反應(yīng)突觸形態(tài)的改變。因?yàn)橛贸㈦婄R觀察時小腦皮質(zhì)的3層結(jié)構(gòu)之間沒有明顯分界線，我們無法明確區(qū)別這3層結(jié)構(gòu)，故而沒有分層描述。我們發(fā)現(xiàn)，WT組（圖6A），突觸結(jié)構(gòu)清晰，突觸間隙分界明顯，突觸后膜上的突觸后致密區(qū)密度高，弧度小，較平滑。線粒體結(jié)構(gòu)完整，雙層膜結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴排列整齊。APP／PS1組（圖6B），突觸間隙分界模糊，突觸后致密區(qū)變薄，密度降低。弧度大，向突觸前膜突出明顯。線粒體結(jié)構(gòu)不完整，水腫脹大，雙層膜結(jié)構(gòu)不完整。

Fig.6 Electron micrographs of the cerebellar cortex in WT（A）and APP／PS1（B）mice（TEM×50 000）（n＝2）

3 討論

小腦是隨動物運(yùn)動的復(fù)雜化而逐漸進(jìn)化的腦部結(jié)構(gòu)。以前人們認(rèn)為小腦只有運(yùn)動功能，是維持自體平衡，調(diào)節(jié)肌張力和協(xié)調(diào)運(yùn)動的控制中樞。但近30年來日益增多的證據(jù)表明，小腦具有多種非運(yùn)動功能，如感覺、知覺、語言及認(rèn)知功能等，參與時間，知覺，空間判斷，并在抽象思維事件、復(fù)雜問題解決等過程中起重要作用［14］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，AD患者小腦細(xì)胞形態(tài)和功能會發(fā)生明顯改變，與其它認(rèn)知相關(guān)腦區(qū)之間的功能聯(lián)系在AD發(fā)病早期就出現(xiàn)異常，提示小腦在AD認(rèn)知障礙的發(fā)生發(fā)展中可能起著不可忽視的作用。

APPswe／PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型是目前國內(nèi)外比較公認(rèn)的AD轉(zhuǎn)基因動物模型之一，其優(yōu)勢在于將兩個易感基因結(jié)合在一起，從而縮短病理變化時間，并使病理特征多樣化，能夠較好的模擬AD患者的早期病理和行為特征［15］。本研究結(jié)果顯示，同齡的WT組（圖1A）沒有Aβ斑塊的沉積，而9月齡APP／PS1組（圖1B）轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)出現(xiàn)Aβ斑塊沉積，這與相關(guān)研究報道一致［16］。并且通過我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Aβ沉積主要部位為小腦的Ⅵ、Ⅶ小葉。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，小腦內(nèi)與認(rèn)知相關(guān)的區(qū)域位于小腦后葉，主要包括第Ⅵ小葉、第ⅦA小葉（含crusⅠ和 crusⅡ）以及第ⅦB小葉［17］。本文研究發(fā)現(xiàn)，Aβ斑塊出現(xiàn)在Ⅵ、Ⅶ小葉的居多，提示AD可能對小腦的認(rèn)知功能造成損害。

小腦浦肯野細(xì)胞是一類分泌GABA作為神經(jīng)遞質(zhì)的抑制性神經(jīng)元，它通過細(xì)胞表面的棘突接受傳入小腦的數(shù)萬個信息，在胞體整合后，由軸突將輸出信息傳至小腦深核，是小腦皮質(zhì)唯一的傳出性神經(jīng)元。有研究表明，APPswe／PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠小腦內(nèi)浦肯野細(xì)胞興奮性降低，LTD明顯減?。?0］，提示小腦突觸可塑性發(fā)生改變。突觸素是突觸前囊泡蛋白釋放神經(jīng)遞質(zhì)的標(biāo)志物［11］，與突觸的生長、修復(fù)、再生和突觸重塑密切相關(guān)。神經(jīng)細(xì)胞間突觸傳遞依賴于突觸前終末內(nèi)儲存神經(jīng)遞質(zhì)的突觸囊泡的胞吐作用，為Ca2+依賴性的遞質(zhì)釋放。突觸素的存在對于Ca2+依賴性的遞質(zhì)釋放是必需的。另外，突觸素可以評估突觸數(shù)量和神經(jīng)終末密度。本研究結(jié)果顯示，與WT組相比，APP／PS1組小鼠小腦突觸素表達(dá)含量明顯降低，突觸超微結(jié)構(gòu)也明顯受損，提示AD小腦內(nèi)細(xì)胞的突觸傳遞功能發(fā)生改變。

為探究小腦突觸可塑性變化的可能機(jī)制，我們進(jìn)一步觀察小腦各層BDNF及其受體Trk-B的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明，與WT組相比，APP／PS1組小鼠小腦組織中BDNF／Trk-B的表達(dá)總含量均有所下降；其中小腦皮質(zhì)浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層內(nèi)BDNF／Trk-B的蛋白含量均明顯下降。BDNF是一種有促進(jìn)和維持神經(jīng)元生長、存活、和執(zhí)行功能作用的活性蛋白因子，在突觸活動、聯(lián)系神經(jīng)元連接和突觸可塑性中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。顆粒細(xì)胞是小腦皮質(zhì)合成BDNF的主要位點(diǎn)。顆粒細(xì)胞內(nèi)合成的BDNF可以通過順行軸漿運(yùn)輸轉(zhuǎn)運(yùn)到軸突（平行纖維），并隨遞質(zhì)囊泡一起釋放入軸突間隙，進(jìn)而調(diào)節(jié)突觸傳遞功能［18］。缺乏BDNF將導(dǎo)致小腦突觸超微結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變。研究表明，BDNF-／-小鼠浦肯野細(xì)胞（purkinje cell，PC）的樹突形態(tài)異常，平行纖維（parallel fiber，PF）末梢終末腫脹。雖然 PF／PC的突觸數(shù)量沒有減少，但電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)卻發(fā)現(xiàn)PF／PC突觸傳遞效能出現(xiàn)異常［19］，據(jù)此推測 APP／PS1組小鼠小腦突觸形態(tài)異常可能與BDNF合成釋放減少有關(guān)。

近年來的研究表明，小腦在AD認(rèn)知障礙的發(fā)生發(fā)展中可能起著不可忽視的作用。但目前關(guān)于AD小腦的相關(guān)研究主要集中在臨床影像學(xué)研究，AD模型鼠，特別是AD轉(zhuǎn)基因鼠小腦的相關(guān)研究較少，更缺乏其突觸相關(guān)形態(tài)學(xué)的研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明APP／PS1小鼠小腦皮質(zhì)中突觸素、BDNF／Trk-B表達(dá)含量均明顯降低，突觸超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生明顯變化，提示AD小腦內(nèi)突觸傳遞功能改變。本研究豐富了AD轉(zhuǎn)基因小鼠小腦突觸形態(tài)學(xué)的相關(guān)資料，為進(jìn)一步探究AD小腦突觸形態(tài)及功能變化的可能機(jī)制提供新的理論依據(jù)，為早期診斷AD提供新的思路和方向。

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Expressions of synaptophysin and BDNF／Trk-B in cerebellum of APPswe／PS1dE9 transgenic mice

DONGXue-fan，WANGTing，LI Tian，JIAO Juan-juan，QU Xue-song，QI Jin-shun，YANGWei△
（Department of Physiology，Key Laboratory of Cellular Physiology，Ministry of Education，Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China）

Objective：To observe the expressions of synaptophysin and BDNF／Trk-Bin cerebellum of APPswe／PS1dE9 transgenic mice.Methods：The healthy 9-month old APP／PS1 male mice（n1）and the same wild type male mice（n2）were divided into two groups，APP／PS1 group and wild-type（WT）group.The expressions of synaptophysin and brain-derived neurotrophic factor／tyrosine kinase B（BDNF／Trk-B）in cerebellum were determined by Western blot（n1＝6；n2＝6）and immunohistochemical（n1＝4；n2＝4）.The possible synaptic changes in APP／PS1 group were observed by using electron microscopy.Results：Compared with WTgroup，the expressions of synaptophsin and BDNF／Trk-B in cerebellum were decreased in APP／PS1 group.Increased width of the synaptic cleft and decreased thickness of postsynaptic density were also observed.Conclusion：In APP／PS1 group，expressions of synaptophsin and BDNF／Trk-Bin cerebellum were decreased；changes in ultrastructure of synapses seemed to be widespread alterations.These findings suggest a possible association between expression of BDNF／TrkB and synaptic plasticity in AD cerebellum.

APP／PS1 transgenic mouse； cerebellum； synaptophysin； BDNF； Trk-B； synapse

R338

A

1000-6834（2017）06-488-07

10.12047／j.cjap.5530.2017.116

山西省回國留學(xué)人員科研資助項目（2016060）

2016-11-28

2017-05-23

△【通訊作者】Tel：13293910485；E-mail：vividmail＠163.com