Klotho基因多態(tài)性與老年高血壓患者靶器官損害的相關(guān)性分析

張力輝，李冬梅，鄒子揚(yáng)

Klotho基因多態(tài)性與老年高血壓患者靶器官損害的相關(guān)性分析

張力輝1，李冬梅1，鄒子揚(yáng)2

目的通過分析klotho G395A,F352V,C370S三個(gè)位點(diǎn)的等位基因與單核苷酸多態(tài)性（SNP）在老年性高血壓人群中的分布情況，探究klotho基因?qū)Ω哐獕夯颊咴斐砂衅鞴贀p害的相關(guān)特性。方法選取2013年1月～2016年1月于河北港口集團(tuán)有限公司港口醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科老年高血壓患者104例，其中男性54例，女性50例，平均年齡（67.32±7.32）歲。按是否合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟?，CHD）分為兩組，即高血壓合并CHD組（n=57，男性30例，女性27例）和高血壓未合并CHD組（n=47，男性24例，女性23例）。再按是否發(fā)生腎損害分為高血壓合并腎損害組（n=66，男性35例，女性31例）和高血壓未合并腎損害組（n=38，男性19例，女性19例），分別統(tǒng)計(jì)各組患者臨床資料及klotho的等位基因的分布情況，分析其與心、腎靶器官損害的相關(guān)性。結(jié)果在合并CHD和未合并CHD兩組患者中，合并CHD組患者年齡較高，而性別，糖尿病及血脂等方面，則無顯著差異（P＞0.05）；對klotho基因G395A SNP的三個(gè)等位基因GG,GA,AA的比較中，合并CHD和未合并CHD兩組中患者無顯著差異；性別比較顯示：男性患者AA基因型在合并CHD組中顯著高于未合并CHD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。klotho基因F352V SNP中，F(xiàn)V基因型的頻率在高血壓并發(fā)CHD組中較未并發(fā)CHD的患者更低，在男性分層中這一差距依然存在，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；klotho基因SNP C370S的各個(gè)等位基因CC,CS,SS在兩組中均無顯著差異，按性別分層后仍無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)論男性高血壓患者伴klotho基因G-395A SNP AA等位基因易并發(fā)CHD，而攜帶F352V FV等位基因的男性高血壓患者患CHD的概率更低；高血壓合并腎損害與klotho基因的相關(guān)性不明顯。

等位基因；冠心?。籯lotho基因

高血壓是臨床常見的老年性疾病，發(fā)病率逐年上升，靶器官損害已成為危害患者生命的重要原因[1]。Klotho基因于1997年被發(fā)現(xiàn)，其與人類衰老有高度相關(guān)性，Klotho缺失小鼠可呈現(xiàn)衰老表現(xiàn)，如動(dòng)脈硬化，骨質(zhì)疏松，運(yùn)動(dòng)減少，皮膚皺縮等，將該基因?qū)牖蛉笔У男∈篌w內(nèi)，小鼠生長發(fā)育及外在表現(xiàn)均可出現(xiàn)明顯改善[2]。研究發(fā)現(xiàn)klotho基因及其表達(dá)產(chǎn)物可在體內(nèi)血管活性物質(zhì)的協(xié)助下達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮，促進(jìn)血管新生，預(yù)防動(dòng)脈硬化的目的[3]。klotho基因存在較多位點(diǎn)及等位基因，且該基因在高血壓患者的心、腎等靶器官損害中的作用尚不明確。本文選取104例老年性高血壓患者，對其心、腎并發(fā)癥及klotho等位基因分布情況進(jìn)行分析，現(xiàn)分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北港口集團(tuán)有限公司港口醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科于2013年1月～2016年1月收治的老年高血壓患者104例。根據(jù)是否并發(fā)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（冠心病，CHD）分為高血壓合并CHD組和高血壓未合并CHD組。再根據(jù)是否伴腎損害分為高血壓合并腎損害組和高血壓未合并腎損害組。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：收縮壓≥130 mmHg和（或）舒張壓≥張壓90 mmHg（1 mmHg=0.133 kpa），除外繼發(fā)性高血壓。

1.2 方法 患者于檢測當(dāng)日空腹抽取靜脈血6 ml。2 ml應(yīng)用EDTA抗凝，行klotho基因多樣性檢測，其余血樣應(yīng)用Hitachi7600生化分析儀檢測。

1.3 觀察指標(biāo) Klotho SNP信息檢測根據(jù)文獻(xiàn)[5]完成，所需引物及試劑均采購自大連寶生物公司。將采集的klotho等位基因利用pcr技術(shù)擴(kuò)增并進(jìn)行基因多態(tài)性電泳。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo) 采用SSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行 檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 klotho基因電泳圖 對klotho F352V基因進(jìn)行電泳分析，該點(diǎn)位包括FF，F(xiàn)V，VV三組，結(jié)果見圖1。

圖1 F352V基因電泳圖

2.2 高血壓合并CHD與klotho基因間的相關(guān)性分析 高血壓合并CHD與未合并CHD組的患者基本資料對比，合并CHD組患者年齡顯著高于未合并CHD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其余參數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表1。對klotho基因G395A SNP的三個(gè)等位基因GG，GA，AA的比較中，兩組無顯著差異。不同性別比較可知：男性患者AA基因型在合并CHD組中的比例顯著高于未合并CHD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。klotho基因F352V SNP中，F(xiàn)V基因型的頻率在高血壓合并CHD組中較未合并CHD的患者更低，在男性分層中這一差距依然存在，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；klotho基因SNP C370S的各個(gè)等位基因CC,CS,SS在兩組中均無顯著差異，按照性別分層后仍無顯著差異（P＞0.05），表2。

表1 高血壓合并CHD與未合并CHD兩組患者的基本資料對比

表2 高血壓合并CHD與未合并CHD兩組患者klotho基因的統(tǒng)計(jì)

2.3 高血壓患者klotho基因與腎損害的相關(guān)性

伴腎損害的高血壓患者在年齡，血尿素氮（BUN），血肌酐（Cr），血尿酸（UA）及BMI指數(shù)方面均較無腎損害的患者有顯著差異，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3；而klotho基因全部等位基因在兩組患者中的分布均無顯著差異，在不同性別分層的患者中亦無顯著差異，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表4。

表3 高血壓并發(fā)腎損害與未并發(fā)腎損害兩組患者的基本資料對比

3 討論

研究顯示，klotho基因的表型與其表達(dá)蛋白對血管內(nèi)皮狀態(tài)、脂代謝及心血管疾病等密切相關(guān)，可以此為突破口進(jìn)行相關(guān)疾病的研究[6]。G395AA基因已被證實(shí)與老年性高血壓的發(fā)生密切相關(guān)[7]。本次對klotho等位基因的研究發(fā)現(xiàn)，老年男性高血壓患者如伴CHD，其G395AAA等位基因的頻率顯著較無CHD的男性患者更高，在女性分層中則無此現(xiàn)象，提示其對于血壓影響受性別因素調(diào)控，在男性患者中影響更大。該結(jié)果與尤寧等[8]研究結(jié)果一致。

關(guān)于klotho F352V相關(guān)等位基因在高血壓患者中的表達(dá)，有研究發(fā)現(xiàn)VV基因型的人群高血壓發(fā)生率更高，而FF基因型則抑制可能發(fā)生的腎臟損害[9]。腎素-血管緊張素系統(tǒng)失調(diào)是高血壓形成的原因之一，而血管緊張素Ⅱ的大量輸注可顯著減弱klotho基因在腎臟中的表達(dá)。提示klotho基因的表達(dá)對于高血壓病程延緩進(jìn)展，預(yù)防腎損傷具有積極意義。

klotho基因?qū)τ诟哐獕旱恼{(diào)控機(jī)理為：klotho基因表達(dá)出klotho蛋白，該蛋白含量與體內(nèi)一氧化氮（NO）含量呈正相關(guān)。klotho表達(dá)增多可促進(jìn)NO的大量生成。后者直接調(diào)控血管的收縮與舒張。推斷klotho基因通過調(diào)控NO的水平進(jìn)而控制高血壓進(jìn)展。上述研究提示，高血壓，CHD等疾病與klotho基因3個(gè)位點(diǎn)G395A，F(xiàn)352V與C370S的SNP聯(lián)系緊密。

綜上所述，本研究中klotho基因中FV型在高血壓患者的CHD控制中起到積極效果，使該基因型患者的CHD發(fā)病率降低；而AA基因型的男性患者則有更高可能罹患CHD，因?yàn)樵摶虮磉_(dá)受性別影響較大。蔣宜等[10]報(bào)道稱，其可能與該基因F352V表達(dá)時(shí)苯丙氨酸被纈氨酸所替代并引起基因突變有關(guān)，仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。

表4 高血壓合并腎損害與未并發(fā)腎損害兩組患者的klotho基因統(tǒng)計(jì)

[1]李湘民,周巧玲. 纈沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠腦超微結(jié)構(gòu)和Klotho基因表達(dá)的影響[J]. 中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)報(bào)）,2010,35(3):254-61.

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Correlation between polymorphism of Klotho gene and target organ injury in elderly patients with hypertension

Zhang Lihui*, Li Dongmei, ZOU Ziyang.
*Department of Neurology, Port Hospital, Hebei Port Group Co, LTD, Qinhuangdao 066000, China.
Corresponding author: Zhang Lihui, E-mail: 13703237177@163.com

ObjectiveTo investigate the correlation between Klotho gene and target organ injury through analyzing the distribution of alleles at 3 locus (G395A, F352V, C370S) of Klotho gene and single nucleotide polymorphism (SNP) in elderly patients with hypertension.MethodsThe patients (n=104, male 54, female 50 and average age=67.32±5.85) were chosen from the Department of Neurology of Port Hospital of Hebei Port Group Co., LTD from Jan. 2013 to Jan. 2016. All patients were divided, according to whether or not with complicated coronary heart disease (CHD), into hypertension+CHD group (n=57, male 30 and female 27) and hypertension without CHD group (n=47, male 24 and female 23). The patients were again divided, according to whether or not with renal damage, into hypertension+renal damage group (n=66, male 35 and female 31) and hypertension without renal damage group (n=38, male 19 and female 19). The clinical materials were collected from all groups. The distribution of alleles of Klotho gene was respectively counted and the correlation between the alleles and target organs (heart and kidney) was analyzed.ResultsThe age was elder in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group, and sex, diabetes and blood sugar had no significant difference between 2 groups(P＞0.05). The comparison in 3 alleles (GG, GA, AA) of G395A SNP of Klotho gene had no significant difference between 2 groups. The comparison in sex showed that AA genotype in male patients were significantly higher in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group (P＜0.05). The frequency of FV genotype of F352V SNP of Klotho gene was lower in hypertension+CHD group than that in hypertension without CHD group,and the difference existed in male hierarchy (P＜0.05). The alleles (CC, CS, SS) of SNP C370S of Klotho gene had no significant difference between 2 groups and also in sex hierarchy (P＞0.05).ConclusionMale patients with hypertension carrying AA allele of G-395A SNP of Klotho gene are commonly complicated by CHD, and those carrying FV allele of F352V of Klotho gene have a lower probability of CHD. The correlation between hypertension complicated by kidney damage and Klotho gene is not significant.

Allele; Coronary heart disease; Klotho gene

1066000 秦皇島,河北港口集團(tuán)有限公司港口醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;2063000 唐山,解放軍第二五五醫(yī)院心內(nèi)科

張力輝,E-mail:13703237177@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.11.26

R541.4

A

1674-4055(2017)11-1381-03

孫竹