烤煙葉對(duì)五種常見淡水魚類的毒性實(shí)驗(yàn)

王春勇 ，劉開潤(rùn) ，潘家有 ，王翠蓮 ，夏黎亮

（1．通海縣水產(chǎn)工作站，云南 通海 652700；2.玉溪市紅塔區(qū)水產(chǎn)工作站，云南 玉溪 653102；3.玉溪市水產(chǎn)工作站，云南 玉溪 653102）

烤煙葉對(duì)五種常見淡水魚類的毒性實(shí)驗(yàn)

王春勇1，劉開潤(rùn)1，潘家有2，王翠蓮1，夏黎亮3

（1．通?？h水產(chǎn)工作站，云南 通海 652700；2.玉溪市紅塔區(qū)水產(chǎn)工作站，云南 玉溪 653102；3.玉溪市水產(chǎn)工作站，云南 玉溪 653102）

采用靜態(tài)生物毒性實(shí)驗(yàn)方法研究等級(jí)外廢棄烤煙葉對(duì)5種常見一齡淡水魚類的急性毒性，為養(yǎng)殖戶提供一個(gè)參考的使用濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：水溫22℃時(shí)，24.2 g鳙魚的96 h LC50為42.51 g/m3，安全濃度為4.3 g/m3；27.6 g鰱魚的96 h LC50為43.47 g/m3，安全濃度為4.3 g/m3；25.3 g鯽魚的96 h LC50為 104.23 g/m3，安全濃度為10.4 g/m3；28.5 g草魚的96 h LC50為111.78 g/m3，安全濃度為 11.2 g/m3；28 g 鯉魚的 96 h LC50為 145.8 g/m3，安全濃度為 14.6 g/m3。

烤煙葉；安全濃度

等級(jí)外廢棄烤煙葉能有效預(yù)防和治療魚類細(xì)菌性疾病[1]和殺滅魚體寄生蟲[2]，它既能防治各種細(xì)菌性魚病，特別是魚類皮膚病，又能殺滅一些原生動(dòng)物性寄生蟲[3]，還能改善水質(zhì)，可用于清塘、預(yù)防和治療，具有原料來源廣、防治魚病方法簡(jiǎn)便、成本低廉、治療效果好等優(yōu)點(diǎn)，在漁業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用比較廣泛，推薦使用的劑量、方法盡管有許多參考，比如潑灑（每立方米0.25 g[1]）、掛袋（扎成小捆堆放在進(jìn)水口處[4]），但是養(yǎng)殖戶在實(shí)際應(yīng)用中劑量的使用隨意性較大，使用過量導(dǎo)致養(yǎng)殖魚類死亡，劑量過低達(dá)不到魚病防治的目的。為給養(yǎng)殖戶提供一個(gè)參考的安全用量，減少養(yǎng)殖戶劑量使用不當(dāng)造成的損失，實(shí)驗(yàn)選擇鰱魚（Hypophthalmichthys molitrix）、鳙魚（Aristichthys nobilis）、鯉魚 （Cyprinus carpio Linnaeus）、草魚 （Ctenopharyngodon idellus Valenciennes）和鯽魚（Carassius auratus Linnaeus）等五種較為常見的養(yǎng)殖品種，采用掛袋給藥方式，開展了等級(jí)外廢棄烤煙葉的毒性實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)魚類 1齡鳙魚[BW（24.2±2）g]；1齡鰱魚[BW（27.6±3）g]；1 齡鯽魚[BW（25.3±2）g]；1 齡草魚[BW（28.5±2）g]；1 齡鯉魚[BW（28±3）g]。

1.1.2 烤煙葉 實(shí)驗(yàn)用烤煙葉為前一年廢棄的等級(jí)外烤煙葉，當(dāng)年收集后用塑料袋密封保存。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)魚缸 實(shí)驗(yàn)魚缸9個(gè)，規(guī)格尺寸：1 200 mm×600 mm×700 mm。實(shí)驗(yàn)時(shí)水體水量全部保持在0.4 m3。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)水源 實(shí)驗(yàn)水源為飲用自來水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用相同的水源水質(zhì)，相同的水溫條件，用同一種給藥方法，不同品種，在不同的濃度梯度下，進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 實(shí)驗(yàn)水質(zhì)處理 實(shí)驗(yàn)的前一天把自來水分別注入實(shí)驗(yàn)的6個(gè)魚缸，放入恒溫棒，把溫度調(diào)節(jié)到22℃，同時(shí)進(jìn)行曝氣，消除自來水中殘留的有效氯，每次實(shí)驗(yàn)前統(tǒng)一曝氣12 h。

1.2.2 增氧恒溫 為了使實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)水體有充足的溶氧，保證實(shí)驗(yàn)魚不受缺氧干擾意外死亡，實(shí)驗(yàn)中定期測(cè)定實(shí)驗(yàn)水體含氧量并及時(shí)使用增氧泵增氧，使溶解氧保持在5～6 mg/L之間。

使用恒溫設(shè)備使實(shí)驗(yàn)水體溫度保持在（22±0.2）℃，使每次實(shí)驗(yàn)水體都保持相同的溫度環(huán)境，從而減少水體溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的干擾。

1.2.3 給藥方法 采用掛袋法，就是把烤煙葉裝入袋子中，直接放入實(shí)驗(yàn)魚缸，此種方法簡(jiǎn)單方便，在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用廣泛。方法：用40目篩網(wǎng)制作成15 cm×20 cm的袋子，根據(jù)梯度濃度計(jì)算烤煙葉用量，稱量后放入袋子直接放入魚缸。為保證藥袋及時(shí)沉入水中，在藥袋中放入一小塊石塊。

1.2.4 烤煙葉加工 為了減少烤煙葉質(zhì)量差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，在實(shí)驗(yàn)之前把烤煙葉人工切割加工成2 cm×2 cm大小的烤煙葉碎塊，再把加工好的烤煙葉碎塊混合攪拌均勻，然后裝入大塑料袋密封待用。

1.2.5 預(yù)備實(shí)驗(yàn) 通過不同的梯度分別找到五種常見魚類出現(xiàn)死亡及全部死亡的濃度范圍。

1.2.6 正式實(shí)驗(yàn) 根據(jù)預(yù)備實(shí)驗(yàn)結(jié)果按相等間距梯度開展烤煙葉對(duì)五種常見魚類的毒性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間96 h[5]，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)量，用Bliss法計(jì)算LC50值。實(shí)驗(yàn)中定期監(jiān)測(cè)水溫和溶解氧，使水溫保持22℃，溶解氧保持在5～6 mg/L之間。

1.2.7 評(píng)價(jià)計(jì)算方法 半致死量計(jì)算（Bliss法）：實(shí)驗(yàn)半致死量的計(jì)算是采用“半致死量（LC50）Bliss法的評(píng)價(jià)與計(jì)算”[6]，通過Bliss法分別計(jì)算出烤煙葉對(duì)五個(gè)品種的 96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值。

安全濃度計(jì)算：安全濃度的計(jì)算是根據(jù)Bliss法得出的烤煙葉對(duì)五個(gè)品種的96 h LC50（半致死濃度），按照安全濃度（satfety concentration.SC）經(jīng)驗(yàn)公式[7]，即安全濃度（SC）=96 h LC50×0.1，分別計(jì)算出五個(gè)品種的安全濃度。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同品種、不同濃度的死亡情況

烤煙葉采用掛袋法給藥方式，在不同的濃度下分別對(duì)鰱魚、鳙魚、鯉魚、草魚和鯽魚等五種較為常見的1齡魚類進(jìn)行攻毒后觀察96 h，記錄死亡數(shù)量結(jié)果見附表1。

2.2 計(jì)算 96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95及安全濃度值

表1 烤煙葉對(duì)五種常規(guī)魚的毒性實(shí)驗(yàn)情況對(duì)照表

根據(jù)不同濃度對(duì)五種常見1齡魚類進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)[8]，得出的死亡情況，按照Bliss法分別計(jì)算烤煙葉對(duì)五種 1齡魚類的 96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值，并根據(jù)安全濃度經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算安全濃度，結(jié)果見附表2。

3 討論與小結(jié)

3.1 在穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，五種常見1齡魚類的半致死濃度差異顯著

當(dāng)水溫維持在（22±0.2）℃，溶解氧在 5～6 mg/L之間時(shí)，24.2 g鳙魚的96 h LC50為 42.51 g/m3，27.6g鰱魚的96 h LC50為43.47 g/m3，25.3 g鯽魚的 96 h LC50為 104.23 g/m3，28.5 g 草魚的 96 h LC50為111.78 g/m3，28 g鯉魚的 96 h LC50為 145.8 g/m3。在這五種常見淡水魚類中鰱魚和鳙魚的半致死濃度差異不大，其他品種之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 五種常規(guī)魚的96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95及安全濃度值

3.2 五種常見1齡魚類的安全濃度

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：水溫在（22±0.2）℃，溶解氧在5～6 mg/L之間時(shí)，五種常見淡水1齡魚的安全濃度分別為：鳙魚 4.3 g/m3，鰱魚 4.3 g/m3，鯽魚 10.4 g/m3，草魚 11.2 g/m3，鯉魚 14.6 g/m3。

3.3 五種常見魚類中鰱鳙魚的耐藥性最低，鯉魚的耐藥性最高

五種常規(guī)魚的LC5、LC50、LC95及安全濃度值對(duì)比圖可以看出：當(dāng)水溫維持在（22±0.2）℃，溶解氧在5～6 mg/L之間時(shí)，五種常見魚類中鳙魚96 h LC5為33.4 g/m3性最低，鯉魚的96 h LC5為133 g/m3最高，96 h LC5值鯉魚是鳙魚的3.98倍。

耐藥性由高到低的排列分別是：鯉魚＞草魚＞鯽魚＞鰱魚≥鳙魚。

3.4 五個(gè)品種間半致死量（96 h LC50）相比較

五個(gè)品種間半致死量（96 h LC50）相比較：鳙魚與鯉魚相比較，相差103.3 g/m3；鳙魚與草魚之間相差69.27 g/m3；鳙魚與鯽魚之間相差61.72 g/m3；鳙魚與草魚之間相差69.27 g/m3；草魚與鯉魚之間相差34.02 g/m3；鯽魚與鯉魚之間相差41.57 g/m3；草魚與鯽魚之間相差7.55 g/m3，差異最大的是鳙魚與鯉魚，差異最小的是草魚與鯽魚（鰱魚鳙魚無差異），這表明烤煙葉對(duì)不同品種的淡水魚類毒性作用各不相同，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以在漁業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用中，不能憑經(jīng)驗(yàn)根據(jù)單個(gè)品種的安全使用劑量，套用到其他品種中，特別是在多個(gè)品種混養(yǎng)的池塘中使用烤煙葉防治魚病時(shí)，要優(yōu)先考慮耐藥性低的品種，合理有效的使用烤煙葉劑量，否則給養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來損失。

3.5 安全濃度與致死濃度（96 h LC5）間相比較

安全濃度與致死濃度（96 h LC5）的比較，此次實(shí)驗(yàn)的五個(gè)養(yǎng)殖品種中，耐藥性最強(qiáng)的是鯉魚，其致死濃度為（96 h LC5）為133 g/m3、安全濃度為14.6 g/m3，耐藥性最弱的鳙魚，其致死濃度（96 h LC5）為33.36 g/m3。耐藥性最強(qiáng)的鯉魚的安全濃度與耐藥性最弱的鳙魚致死濃度（96 h LC5）相比較，相差18.76 g/m3，這表明在此次實(shí)驗(yàn)的五個(gè)品種中，當(dāng)以鯉魚的安全濃度14.6 g/m3使用烤煙葉防治魚病時(shí)，并不能威脅到其他4個(gè)品種的生命安全，也就是在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，此次實(shí)驗(yàn)的草、鰱、鳙、鯉、鯽魚這五個(gè)品種之間任意混養(yǎng)時(shí)，可以選擇最強(qiáng)耐藥性品種的安全濃度來防治魚病，這一濃度不會(huì)危及到其他品種的安全，可以放心使用。

3.6 五個(gè)品種對(duì)烤煙葉的毒性作用反應(yīng)各不相同

鰱、鳙魚對(duì)烤煙葉的毒性作用較為敏感，反應(yīng)較為激烈，主要表現(xiàn)為：對(duì)藥物反應(yīng)時(shí)間短，用藥1.5 h后出現(xiàn)興奮活躍，時(shí)而急速上串，時(shí)而急速下串，時(shí)而打轉(zhuǎn)，時(shí)而漂浮在水面，并出現(xiàn)呼吸困難，1.6 h后出現(xiàn)死亡，死亡時(shí)間集中，總死亡量的80%在1 h內(nèi)發(fā)生。草、鯽、鯉魚藥物反應(yīng)較為平緩，主要表現(xiàn)為：對(duì)藥物反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，用藥3 h后出現(xiàn)興奮活躍，時(shí)而上串，時(shí)而下串，時(shí)而打轉(zhuǎn)，時(shí)而漂浮在水面，時(shí)而靜靜的待在水底，并出現(xiàn)呼吸困難，3.3 h后出現(xiàn)死亡，與鰱、鳙魚比較，死亡時(shí)間分散，總死亡量的80%在2.7 h內(nèi)發(fā)生。

3.7 五個(gè)品種對(duì)烤煙葉毒性作用反應(yīng)的相同點(diǎn)

5個(gè)品種在毒性實(shí)驗(yàn)中的共同點(diǎn)主要表現(xiàn)為：①魚體體色沒有明顯變化，死亡魚體沒有明顯癥狀。②用藥后由于應(yīng)激反應(yīng)[9]，魚體分泌大量黏液，導(dǎo)致水體出現(xiàn)不同程度的絮狀物，36 h后絮狀物逐漸減少。③烤煙葉對(duì)魚體的毒性作用主要發(fā)生在24 h內(nèi)，24 h后不再出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。

3.8 烤煙葉病害防治在其他領(lǐng)域的應(yīng)用

烤煙葉的主要化學(xué)成分是：煙堿、總糖、還原糖、總氮、鉀、氯等[10]，利用烤煙葉治療其他動(dòng)物疾病也有相關(guān)報(bào)道：煙草具有驅(qū)蟲、殺菌、解毒、消脹等功效，用于防治畜禽病，療效顯著可治療雞蛔蟲病、雞異刺線蟲病[11]，治療牛、豬虱病，治療牛、羊瘤胃鼓氣病等[12]。烤煙葉的化學(xué)成分中，對(duì)人體具有毒害作用的主要是煙堿[13]（尼古?。谥委熜笄?、魚類疾病時(shí)起主要作用的化學(xué)成分及對(duì)魚類具有毒害作用的化學(xué)成分目前尚無報(bào)道，待有條件時(shí)作進(jìn)一步研究分析。

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湖北潛江小龍蝦蝦殼“變廢為寶”出口歐美

湖北省潛江市享有“中國(guó)小龍蝦之鄉(xiāng)”、“中國(guó)小龍蝦加工出口第一市”的美譽(yù)，是目前中國(guó)最大的淡水小龍蝦加工出口基地。2016年，潛江養(yǎng)殖小龍蝦面積達(dá)45萬畝，產(chǎn)量達(dá)7.35萬t，綜合產(chǎn)值180億元（人民幣，下同），出口創(chuàng)匯達(dá)1.5億美元。

潛江市龍蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展局總工程師陶忠虎表示，一只小龍蝦可食用的部分不到20%，因此在傳統(tǒng)龍蝦加工生產(chǎn)過程中，約80%的蝦殼就成為了廢棄物，“每年產(chǎn)生廢棄蝦殼10萬多t，既浪費(fèi)資源，又污染環(huán)境?！碧罩一⒄f。

陶忠虎介紹，甲殼素是從蝦蟹等甲殼類動(dòng)物外殼中提取出來的一種物質(zhì)，具有多種生理調(diào)節(jié)機(jī)能，有抑制癌、瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、提高人體免疫力及護(hù)肝解毒作用，目前廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域。

2009年，華山公司投資4.15億元建成年處理10萬t廢棄蝦殼提取氨鹽和蝦魚加工資源利用項(xiàng)目，成功拿到了“健”字號(hào)批文?！肮灸壳皳碛邢冗M(jìn)的甲殼素保健品車間，2016年產(chǎn)值達(dá)20億元?！比A山公司辦公室主任劉時(shí)璇說。

陶忠虎表示，甲殼素等蝦殼衍生品具有十分重要的開發(fā)價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值，這些衍生品的附加值將比原來提高10～100倍，有望轉(zhuǎn)化增值的直接效益超過數(shù)百億元，且將新增就業(yè)崗位近10萬個(gè)。

趙甫平在種養(yǎng)蝦稻前，每年僅有1.5萬余元的純收入。潛江市推廣“蝦稻共作”后，他將手里的土地進(jìn)行流轉(zhuǎn)，再通過“返租包”的方式擁有了20×667 m2蝦稻田的經(jīng)營(yíng)權(quán)，如今，年收入可達(dá)26萬多元，比之前翻了近20倍。

趙甫平告訴記者，他養(yǎng)殖的小龍蝦，一部分會(huì)運(yùn)至交易中心賣給蝦商或餐飲店，另一部分就出售給華山公司進(jìn)行深加工?！暗?017年7月份，我有近20萬的毛收入，加上后期的蝦稻，今年有26萬多元的收入。”他說。

從養(yǎng)殖戶手中收來的小龍蝦，蝦肉被加工成蝦球、鹵蝦等包裝食品，銷售至全國(guó)各地并出口至歐美。剩下的蝦殼就由華山公司集中處理，加工成甲殼素等衍生品。而這些目前都需要人工操作才能完成。

“手工剝蝦的工作盡管有點(diǎn)辛苦，但是工作環(huán)境好，工資待遇也不錯(cuò)?！蹦杲逖墓と死钣抡f，小龍蝦“淡季”時(shí)，他就在家務(wù)農(nóng)，其他時(shí)間他就會(huì)來到華山公司等水產(chǎn)加工企業(yè)做剝蝦工，月薪在6 000元左右。

劉時(shí)璇表示，餐飲的火熱讓小龍蝦的行情看漲，而25 kg小龍蝦只能生產(chǎn)出0.5 kg的甲殼素，因此按照目前的市價(jià)，1 t甲殼素的價(jià)錢為10萬元，且一般都是出口至歐美。因此，工人們的工資自然也不低。

“潛江將用5～10年的時(shí)間建設(shè)220億元產(chǎn)值的甲殼素精深加工產(chǎn)業(yè)集群。實(shí)現(xiàn)小龍蝦產(chǎn)業(yè)由傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品加工向生物高新科技產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型，建設(shè)成中國(guó)乃至世界的‘甲殼素產(chǎn)業(yè)之都’?！睗摻形瘯淈S劍雄說。

（www.bbwfish.com）

Toxicity of flue-cured tobacco leaves to five common freshwater fishes

Wang Chunyong1，Liu Kairun1，Pan Jiayou2，Wang Cuilian1，Xia Liliang3
（1.Tonghai County Aquatic workstation，Tonghai 652700，China；2.Hongta District Aquatic Workstation，Yuxi 653102，China；3.Yuxi Aquatic Workstation，Yuxi 653102，China）

The static toxicity test was used to study the acute toxicity of discarded tobacco leaves to 5 common one year old freshwater fishes：when the water temperature was 22 ℃，24.2 g bighead carp of 96 h LC50for 42.51 g/m3，the safety concentration of 4.3 g/m3；27.6 g silver carp of 96 h LC50for 43.47 g/m3，the safety concentration of 4.3 g/m3；25.3 g crucian carp of 96 h LC50for 104.23 g/m3，the safety concentration of 10.4 g/m3;28.5 g grass carp of 96 h LC50for 111.78 g/m3，the safety concentration of 11.2 g/m3；28 g carp of 96 h LC50for 145.8 g/m3，the safety concentration of 14.6 g/m3。

flue－cured tobacco leaf；safe concentration；test

S942.2

A

1004-2091（2017）10-0012-05

10.3969/j.issn.1004-2091.2017.10.003

玉溪市自然科學(xué)研究基金項(xiàng)目（編號(hào)：yxzkl2016076）

王春勇（1968-），男，高級(jí)農(nóng)藝師，研究方向：淡水漁業(yè).E-mail:wang62018@126.com

2017-01-04）