液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚

張敏娟，安 瑜，唐 欣，王慧芳，李 曉

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安 710048）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚

張敏娟，安 瑜，唐 欣，王慧芳，李 曉

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安 710048）

建立了嬰幼兒配方奶粉中雙酚A和壬基酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的測(cè)定方法。樣品經(jīng)溶劑提取凈化后，采用Poroshell 120SB-C18型液相色譜柱分離，以0.1%氨水和甲醇為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，雙酚A的方法檢出限為0.05 μg/kg，壬基酚的方法檢出限為0.1 μg/kg。線性范圍內(nèi)低、中、高3個(gè)添加水平雙酚A的回收率為76.80%～86.75%，壬基酚的回收率為77.00%～87.34%。該方法具有靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚的檢測(cè)。

雙酚A；壬基酚；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；嬰幼兒配方食品；檢測(cè)

雙酚A和壬基酚是重要的化工原料，是環(huán)境中廣泛分布的污染物。目前發(fā)現(xiàn)雙酚A和壬基酚普遍存在于各類食品中[1]，可通過(guò)各種途徑污染食品。雙酚A和壬基酚親脂性較強(qiáng)，易在脂肪和蛋白含量高的食品中富集[2]。雙酚A和壬基酚是一種公認(rèn)的內(nèi)分泌干擾物[3-4]，具有類似雌激素作用，能夠?qū)C(jī)體產(chǎn)生毒害作用。大量體內(nèi)外試驗(yàn)證明雙酚A和壬基酚的雌激素效應(yīng)和生物毒性，其對(duì)人體產(chǎn)生的不良作用，包括對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的影響及致癌作用[1]。

近年來(lái)，隨著我國(guó)乳業(yè)的快速發(fā)展，乳制品產(chǎn)量大大提高，人均消費(fèi)量也大幅增加。隨著食品安全意識(shí)的提高，人們對(duì)乳制品，特別是嬰幼兒食品的安全更是提出更高的要求。NP和BPA不允許添加到食品中，特別是嬰幼兒配方奶粉中。但在嬰幼兒配方奶粉的生產(chǎn)過(guò)程和使用的包裝材料中可能存在雙酚A和壬基酚，導(dǎo)致雙酚A和壬基酚有可能被引入到奶粉中，進(jìn)而給嬰幼兒的健康帶來(lái)危害[5]，因此對(duì)雙酚A和壬基酚的檢測(cè)就尤為重要。目前，雙酚A和壬基酚的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜[6-7]、氣相色譜-質(zhì)譜法[8]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1-5]等。試驗(yàn)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，以乙腈為提取溶劑，同時(shí)測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 材料

嬰幼兒配方乳粉，內(nèi)蒙古伊利集團(tuán)提供；嬰幼兒配方奶粉，陜西銀橋集團(tuán)提供；嬰幼兒配方羊奶粉，陜西百躍集團(tuán)提供。

1.1.2 試劑

雙酚A和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)品，純度＞98.5%，德國(guó)Dr.ehrenstorfer gmbh公司產(chǎn)品。

甲醇，色譜純，德國(guó)默克公司產(chǎn)品；乙腈，色譜純，德國(guó)默克公司產(chǎn)品。

1.1.3 儀器

6420 A型液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品；TG16-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品；JDX-300型多功能搖床，上海世平實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；UHP-Ⅲ-20T型超純水機(jī)，成都超出科技有限公司產(chǎn)品；BSA224S型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司產(chǎn)品；Poroshell 120EC-C18型色譜柱，美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品。

1.2 方法

準(zhǔn)確稱取樣品2.0 g（精確到0.01 g） 于25 mL玻璃離心管（用乙醇和超純水清洗，經(jīng)180℃烘干）內(nèi)，加入5 mL乙腈，振蕩提取20 min，以轉(zhuǎn)速5 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至另外1個(gè)干凈的玻璃離心管中，再用5 mL乙腈提取，合并2次提取的上清液，氮?dú)獯蹈?。? mL甲醇溶解，以轉(zhuǎn)速6 500 r/min離心3 min，上清液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Poroshell 120EC-C18，2.1 mm×100 mm×1.8 μm，或性能相當(dāng)者。柱溫30℃；進(jìn)樣量5 μL；流動(dòng)相0.1%氨水∶甲醇為90∶10，梯度洗脫；流速0.3 mL/min。

色譜條件見(jiàn)表1。

表1 色譜條件

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI負(fù)離子模式；干燥氣：氮?dú)?，純度?9.9%，23 L/min；離子源溫度300℃；采集模式多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）。

雙酚A和壬基酚的質(zhì)譜參數(shù)及保留時(shí)間見(jiàn)表2。

表2 雙酚A和壬基酚的質(zhì)譜參數(shù)及保留時(shí)間

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理方法的優(yōu)化

試驗(yàn)采用無(wú)水乙醇、甲醇、乙酸乙酯∶環(huán)己烷（1∶1）、乙腈4種溶劑進(jìn)行提取，同時(shí)進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)分析，發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用乙腈為提取溶劑時(shí)，對(duì)奶粉中蛋白質(zhì)的沉淀效果較好，無(wú)干擾峰。雙酚A和壬基酚的回收率比較穩(wěn)定，且能獲得76%～88%的回收率。因此，確定乙腈為該方法的提取溶劑。

2.2 色譜與質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

試驗(yàn)選擇了Agilent公司的Poroshell 120EC-C18、SB-C18和BEH-C183種色譜柱。結(jié)果表明，采用BEH-C18色譜柱和SB-C18色譜柱時(shí)，雙酚A和壬基酚峰形較差，定性及定量分析結(jié)果偏差比較大。當(dāng)采用Poroshell 120EC-C18色譜柱時(shí)，雙酚A和壬基酚響應(yīng)值和峰形都比較好，保留時(shí)間穩(wěn)定。因此，試驗(yàn)最終選用Poroshell 120EC-C18色譜柱。

3種色譜柱分離雙酚A和壬基酚得到的MRM色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 3種色譜柱分離雙酚A和壬基酚得到的MRM色譜圖

2.2.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)先后使用甲醇和水，乙腈和水、甲醇和0.1%甲酸、甲醇和0.1%氨水作為流動(dòng)相。通過(guò)對(duì)照峰形、保留時(shí)間和靈敏度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為甲醇和0.1%氨水溶液為流動(dòng)相時(shí)，其質(zhì)譜響應(yīng)值最高，峰形平滑對(duì)稱，并且色譜分離效果也很好。因此，最終確定流動(dòng)相為甲醇和0.1%氨水溶液。

2.2.3 質(zhì)譜條件的選擇

雙酚A和壬基酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)表明，此化合物進(jìn)行電噴霧負(fù)離子模式掃描。在負(fù)離子模式下，雙酚A和壬基酚分別產(chǎn)生133.1，212.2，133.1，147.1 m/z的特征離子。最終確定雙酚A和壬基酚的定量離子對(duì)分別為227.2/212.2和219.2/133.1，定性離子對(duì)分別為227.2/133.1和219.2/147.1。試驗(yàn)對(duì)裂碎電壓和碰撞能量進(jìn)行了優(yōu)化，確定了雙酚A和壬基酚的最佳質(zhì)譜參數(shù)。

雙酚A和壬基酚子離子MRM色譜圖及質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 雙酚A和壬基酚子離子MRM色譜圖及質(zhì)譜圖

圖3 空白樣品 （a）、雙酚A和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)品（b）及加標(biāo)樣品（c） MRM色譜圖

2.3 方法的驗(yàn)證

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

雙酚 A：0.5，1.0，2.5，5.0，10.00 μg/L，壬基酚：1，2，5，10，20 μg/L質(zhì)量濃度范圍，在選定的色譜條件和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定，得到雙酚A和壬基酚的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限。

試驗(yàn)采用在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法，以各定量離子3倍和10倍的信噪比（S/N） 對(duì)應(yīng)樣品中目標(biāo)化合物的濃度，得到檢出限和定量限。

雙酚A和壬基酚的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限見(jiàn)表3，空白樣品（a）、雙酚A和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)品（b） 及加標(biāo)樣品（c） MRM色譜圖見(jiàn)圖3。

表3 雙酚A和壬基酚的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.3.2 方法精密度和回收率

采用在空白樣品（嬰幼兒配方乳粉） 中進(jìn)行加標(biāo)的方法進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)。在空白樣品中添加低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度水平（雙酚A：0.25，2.50，10.00 μg/kg；壬基酚：0.5，5.0，20.0 μg/kg）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.1描述的方法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次。

雙酚A和壬基酚在樣品中的回收率和精密度見(jiàn)表4。

表4 雙酚A和壬基酚在樣品中的回收率和精密度

試驗(yàn)結(jié)果表明，表明該方法回收率良好，數(shù)據(jù)結(jié)果穩(wěn)定，可以滿足實(shí)際檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

建立液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢驗(yàn)檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚含量的方法。該方法具有前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，適用于嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚的檢測(cè)與驗(yàn)證。

[1]羅紀(jì)軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定乳制品中雙酚A和壬基酚 [J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（1）：288-289，291.

[2]牛宇敏，張晶，張書軍，等.同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中的雙酚A、壬基酚及辛基酚 [J].分析化學(xué)，2012（4）：534-538.

[3]李錦清，綦艷，酈明浩，等.UPLC-MS/MS法測(cè)定奶粉中壬基酚和雙酚A[J].廣東化工，2015（14）：211-212.

[4]曲雙雙，肖光輝，劉婷，等.UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中的壬基酚和雙酚A[J].中國(guó)食品添加劑，2016（8）：185-190.

[5]曲雙雙.UPLC-MS/MS法測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中壬基酚和雙酚A的方法建立及應(yīng)用 [D].哈爾濱：黑龍江東方學(xué)院，2016.

[6]周建科，張前莉，韓康，等.中老年奶粉中雙酚A和己烯雌酚的反相高效液相色譜測(cè)定 [J].食品工業(yè)科技，2007 （2）：233-234，145.

[7]田宏哲，徐靜.高效液相色譜法測(cè)定牛奶中雙酚A[J].食品科技，2012（8）：286-289.

[8]黃會(huì)，鄧旭修，張華威，等.凝膠滲透色譜-固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中辛基酚、壬基酚和雙酚A[J].食品科學(xué)，2013（24）：116-120.◇

Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Detection of Infant Formula Foods Bisphenol A and Nonylphenol

ZHANG Minjuan，AN Yu，TANG Xin，WANG Huifang，LI Xiao
（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection，Xi'an，Shaanxi 710048，China）

A test method for the determination of bisphenol A and nonylphenol in infant formula by liquid chromatography-tandem mass spectrometry was established.Samples were extracted by solvent extraction and cleaned up before chromatographic separation on a Poroshell 120SB-C18column using a mobile phase consisting of water and methanol by isocratic elution.The dyes were analyzed by LC-MS/MS in multiple reaction monitoring（MRM） mode and quantified by the external standard method.The method of bisphenol A was found to be 0.05 μg/kg.The method of nonylphenol was found to be 0.1 μg/kg.The recycling rate of low，medium and high levels in linear range the recovery of bisphenol A was 76.80%～86.75%，the recovery of nonylphenol was 77.00%～87.34%.This method had the characteristics of high sensitivity and quantitative accuracy，which could be applied to the detection of bisphenol A and nonylphenol in infant formula.

bisphenol-A；nonylphenol；LC-MS/MS；infant formula foods；determination

O657.63

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.12.013

1671-9646（2017） 12a-0049-03

2017-07-31

嬰幼兒配方乳粉中雙酚A和壬基酚的測(cè)定方法研究（2015QK212）。

張敏娟（1975— ），女，本科，工程師，研究方向食品安全與檢測(cè)。