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    可吸收防粘連液的生物安全性評(píng)價(jià)

    2017-12-08 01:17:44鄭紫燕張曉敏
    寧夏醫(yī)學(xué)雜志 2017年11期
    關(guān)鍵詞:熱原褐藻稀釋液

    張 巖,鄭紫燕,張曉敏

    ·經(jīng)驗(yàn)交流·

    可吸收防粘連液的生物安全性評(píng)價(jià)

    張 巖,鄭紫燕,張曉敏

    目的對(duì)可吸收防粘連液進(jìn)行生物學(xué)安全性評(píng)價(jià),為產(chǎn)品成功應(yīng)用于臨床提供依據(jù)。方法參照GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》的要求,對(duì)可吸收防粘連液進(jìn)行熱原試驗(yàn)、體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)、遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)、急性全身毒性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn))、體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)及小鼠淋巴瘤細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)(mLA試驗(yàn))等生物相容性試驗(yàn)研究。結(jié)果可吸收防粘連液經(jīng)熱原檢測(cè)最高升溫0.1℃,無致熱性,細(xì)胞毒性1級(jí),急性全身毒性反應(yīng)陰性,遲發(fā)型超敏反應(yīng)陰性,遺傳毒性檢測(cè)均為陰性。以市售醫(yī)用幾丁糖為對(duì)照品,經(jīng)動(dòng)物血液學(xué)一般檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn),試驗(yàn)組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),動(dòng)物體重/臟器系數(shù)與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),結(jié)果顯示無亞慢性全身毒性。結(jié)論可吸收防粘連液具有良好的生物相容性和生物學(xué)安全性,可為產(chǎn)品應(yīng)用于臨床提供依據(jù)。

    可吸收防粘連液;褐藻寡糖;海藻酸鈉;熱原試驗(yàn); 細(xì)胞毒性試驗(yàn)

    可吸收防粘連液是由天然海洋植物褐藻經(jīng)生物酶解反應(yīng)提取的褐藻寡糖、海藻酸鈉等高分子材料精制而成的液狀膠體。研究表明,褐藻寡糖具有抗氧化、抑菌、抗腫瘤及增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)等生物活性[1-4]。海藻酸鈉為天然高分子聚合物,生物相容性良好,可在體內(nèi)降解,毒性低,來源廣泛,作為藥用輔料應(yīng)用越來越廣泛[5-6]。羧甲基纖維素鈉對(duì)活性物質(zhì)具有良好的包載能力,可用作針劑的乳化穩(wěn)定劑和片劑的粘結(jié)劑,還可作為載體材料用于活性物質(zhì)的控制釋放,經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明還是可靠的抗癌藥物載體[7]。本研究按照GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》的要求,采用細(xì)胞毒性試驗(yàn)、致敏試驗(yàn)、皮內(nèi)刺激反應(yīng)試驗(yàn)、急性全身毒性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、植入試驗(yàn)及亞慢性毒性試驗(yàn)對(duì)可吸收防粘連液進(jìn)行生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 動(dòng)物:本試驗(yàn)于2015年3月在北京醫(yī)療器械監(jiān)督檢驗(yàn)中心開展,所用動(dòng)物均由該單位提供。其中家兔3只,昆明小鼠5只,豚鼠30只,SD大鼠46只,雌雄不限。

    1.1.2 試藥:可吸收防粘連液[中英阿諾康(寧夏)生物科技有限公司生產(chǎn),批號(hào):15012901]。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 熱原試驗(yàn):將樣品與生理鹽水1∶2 比例稀釋后,按照0.1 g/mL的比例,(37±1)℃條件下浸提(72±2)h,以無菌無熱原的生理鹽水為浸提介質(zhì),按照《中國(guó)藥典》2010 版(二部)附錄Ⅺ D 的方法進(jìn)行測(cè)試,結(jié)果應(yīng)無熱原反應(yīng)。

    1.2.2 細(xì)胞毒性試驗(yàn):將樣品與生理鹽水1∶2 比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,使用細(xì)胞完全培養(yǎng)基,在(37±1)℃條件下浸提24 h,按照 GB/T 16886.5-2003 中 8.2 浸提液試驗(yàn)規(guī)定 MTT 方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果應(yīng)不>1級(jí)。

    1.2.3 急性全身毒性試驗(yàn):將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照 0.1 g/mL 的比例,在生理鹽水中(37±1)℃條件下浸提(72±2)h,按照 GB/T 16886.11-2011 中第五章規(guī)定試驗(yàn)方法,采用 A.8 尾靜脈注射途徑進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果應(yīng)無急性全身毒性。

    1.2.4 遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn):將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,在生理鹽水中(37±1)℃條件下浸提(72±2)h,按照 GB/T 16886.10-2005 中 7.4 最大劑量試驗(yàn)規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn),根據(jù)GB/T 16886.10-2005 中 7.4.6 對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果應(yīng)無遲發(fā)型超敏反應(yīng)。

    1.2.5 遺傳毒性試驗(yàn)

    1.2.5.1 鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn)),將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,分別以生理鹽水和DMSO為浸提介質(zhì),(37±1)℃條件下浸提(72±2)h,按照 GB/T 16886.3-2008 中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果應(yīng)為陰性。

    1.2.5.2 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn):將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,以細(xì)胞完全培養(yǎng)基為浸提介質(zhì),(37±1)℃條件下浸提 24 h,根據(jù)GB/T 16886.3-2008 中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果應(yīng)為陰性。

    1.2.5.3 小鼠淋巴瘤細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)(mLA試驗(yàn)),將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,以細(xì)胞完全培養(yǎng)基為浸提介質(zhì),(37±1)℃條件下浸提 24 h,根據(jù) GB/T 16886.3-2008 中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果應(yīng)為陰性。

    1.2.6 溶血試驗(yàn):按照GB/T 14233.2-2005 中第七章規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn),溶血率應(yīng)不>5%。

    1.2.7 植入試驗(yàn):以大小適宜的PE軟管作為載體,將樣品附著其上,按照 GB/T 16886.6-1997 中第四章規(guī)定采用皮下組織植入方式進(jìn)行試驗(yàn),植入期為12周,與對(duì)照組相比,樣品組應(yīng)無明顯局部生物學(xué)反應(yīng)。

    1.2.8 亞慢性毒性試驗(yàn):將樣品與生理鹽水1∶2比例稀釋,取稀釋液按照0.1 g/mL的比例,以生理鹽水為浸提介質(zhì),(37±1)℃條件下浸提(72±2)h,按照 GB/T 16886.11-2011 中第六章規(guī)定試驗(yàn)方法,采用 A.7 腹腔注射90 d方法進(jìn)行試驗(yàn),與對(duì)照組相比,樣品組應(yīng)無明顯亞慢性毒性反應(yīng)。

    2 結(jié)果

    2.1 熱原試驗(yàn):在3 h觀察時(shí)間內(nèi),3只家兔體溫升高值的總數(shù)在1.3 ℃以下,符合《中國(guó)藥典》可接受的限度范圍,試驗(yàn)材料無致熱性。

    2.2 細(xì)胞毒性試驗(yàn):在本試驗(yàn)條件下,被檢試驗(yàn)材料細(xì)胞毒性1級(jí)。

    2.3 急性全身毒性試驗(yàn):所有動(dòng)物在整個(gè)試驗(yàn)觀察過程中表現(xiàn)正常,沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,體重均在可接受的范圍內(nèi),表明被檢試驗(yàn)材料急性全身毒性反應(yīng)陰性。

    2.4 遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn):動(dòng)物經(jīng)激發(fā)(24±2)h,去除敷貼后24 h和48 h分別觀察試驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物激發(fā)部位皮膚過敏情況,結(jié)果顯示動(dòng)物皮膚反應(yīng)記分均為0分,即無皮膚紅斑和水腫反應(yīng)情況,表明可吸收防粘連液遲發(fā)型超敏反應(yīng)陰性。

    2.5 遺傳毒性試驗(yàn)

    2.5.1 鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn)):在本試驗(yàn)條件下,被檢試驗(yàn)材料的生理鹽水浸提液對(duì)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102誘變陰性。

    2.5.2 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn):在本試驗(yàn)條件下,試驗(yàn)材料浸提液的染色體畸變率低于陰性對(duì)照組,試驗(yàn)結(jié)果陰性。

    2.5.3 小鼠淋巴瘤細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)(mLA試驗(yàn)):在本試驗(yàn)條件下,被檢樣品小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變?cè)囼?yàn)結(jié)果陰性,覆蓋兩個(gè)終點(diǎn)。

    2.6 溶血試驗(yàn):根據(jù)醫(yī)療器械預(yù)期臨床用途和器械材料特性確定適宜的合格判定指標(biāo)。按本試驗(yàn)檢驗(yàn)醫(yī)療器械時(shí),合格判定指標(biāo)一般為溶血率應(yīng)<5%。在本試驗(yàn)條件下,樣品溶血率為3.5%,符合醫(yī)療器械的溶血試驗(yàn)要求。

    2.7 植入試驗(yàn):與對(duì)照組相比,樣品在皮下植入 12 周后無明顯局部生物學(xué)反應(yīng)。

    2.8 亞慢性毒性試驗(yàn):動(dòng)物血液學(xué)一般檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn),試驗(yàn)組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),試驗(yàn)組大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和鉀濃度低于對(duì)照組,肌酐高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但以上指標(biāo)的結(jié)果在本試驗(yàn)室參考區(qū)間。動(dòng)物體重/臟器系數(shù)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明樣品組無明顯的亞慢性毒性反應(yīng),見表1-表3。

    表1 2組動(dòng)物血液學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)比較

    表2 2組動(dòng)物血液學(xué)生化指標(biāo)比較

    表3 2組動(dòng)物體重/臟器系數(shù)比較

    3 討論

    本研究按照GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》的要求,采用熱原、細(xì)胞毒性、致敏、皮內(nèi)刺激反應(yīng)、急性全身毒性、溶血、遺傳毒性(Ames試驗(yàn)、體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)和mLA試驗(yàn))、植入及亞慢性全身毒性試驗(yàn)對(duì)制備的可吸收防粘連液進(jìn)行生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示:在3 h觀察時(shí)間內(nèi),3只家兔體溫升高值的總數(shù)在1.3 ℃以下,符合《中國(guó)藥典》可接受的限度范圍,無致熱性。在本試驗(yàn)條件下,可吸收防粘連液的細(xì)胞毒性1級(jí),急性全身毒性反應(yīng)陰性,遲發(fā)型超敏反應(yīng)陰性,可吸收防粘連液的生理鹽水浸提液對(duì)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102誘變陰性,染色體畸變率低于陰性對(duì)照組,試驗(yàn)結(jié)果陰性。在本試驗(yàn)條件下,可吸收防粘連液對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞(L5178Y)TK基因突變?cè)囼?yàn)結(jié)果陰性。在本試驗(yàn)條件下,樣品溶血率為3.5%,符合醫(yī)療器械的溶血試驗(yàn)要求。 與對(duì)照組相比,樣品在皮下植入 12 周后無明顯局部生物學(xué)反應(yīng)。動(dòng)物血液學(xué)一般檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn),試驗(yàn)組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),樣品無亞慢性毒性,因此,結(jié)果證明可吸收防粘連液具有良好的生物相容性。

    防粘連產(chǎn)品對(duì)人體應(yīng)安全,不能對(duì)人體組織、血液、免疫等系統(tǒng)產(chǎn)生不良反應(yīng)。產(chǎn)品所使用材料的生物相容性優(yōu)劣是防粘連產(chǎn)品研究設(shè)計(jì)中首先考慮的重要問題。理想的防粘連產(chǎn)品應(yīng)具有良好的生物相容性、自動(dòng)黏附性、可降解吸收性、足夠的體內(nèi)存留時(shí)間、促進(jìn)傷口愈合并將纖維組織增生降至最低程度等特性。可吸收防粘連液是由天然海洋植物褐藻經(jīng)生物酶解反應(yīng)提取的褐藻寡糖、海藻酸鈉等高分子材料精制而成的液狀膠體,適用于預(yù)防和減少盆腹腔粘連的發(fā)生。本研究結(jié)果表明,可吸收防粘連液具有良好的生物相容性,然而,要想將可吸收防粘連液應(yīng)用于臨床,還需進(jìn)一步對(duì)其安全性進(jìn)行驗(yàn)證。

    [1] 孫麗萍,薛長(zhǎng)湖,許家超,等.褐藻膠寡糖體外清除自由基活性的研究[J].中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,35(5):811-814.

    [2] 王媛媛,郭文斌,王淑芳.褐藻寡糖的生物活性與應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2010,36(10):122-125.

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    R965.3

    B

    10.13621/j.1001-5949.2017.11.1025

    中英阿諾康(寧夏)生物科技有限公司,寧夏 銀川 750101

    2017-09-19責(zé)任編輯馬興忠

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