益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法對(duì)甲狀腺功能減退癥大鼠腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ影響的實(shí)驗(yàn)研究*

許繼文 張曉昀 蔡蕭君 王 濤

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)·哈爾濱 150040）

·方藥研究·

益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法對(duì)甲狀腺功能減退癥大鼠腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ影響的實(shí)驗(yàn)研究*

許繼文 張曉昀**蔡蕭君 王 濤

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)·哈爾濱 150040）

目的：探究益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法對(duì)甲減模型大鼠血清TNF-α、IFN-γ的調(diào)節(jié)作用。方法：60只Wistar大鼠，隨機(jī)抽取10只為空白組，雌雄各半，其余50只予0.1%PTU生理鹽水溶液灌胃建造大鼠甲減模型。15天后檢測(cè)甲功，F(xiàn)T3、FT4水平低于空白組，TSH＞10uIU/ml為造模成功。將50只甲減模型大鼠隨機(jī)分為模型組、西藥組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，每組10只，雌雄各半，予相應(yīng)藥物治療12周后，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)血清FT3、FT4 、TSH、TNF-α、IFN-γ水平。結(jié)果：治療后，與模型組相比，各治療組FT3、FT4水平上升，TSH水平下降（p＜0.05），僅中藥中、高劑量組TNF-α水平低于模型組（p＜0.05），西藥及中藥各劑量組IFN-γ水平低于模型組（p＜0.05），但中藥中、高劑量組IFN-γ水平較西藥組更低（p＜0.05）。結(jié)論：益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法可以改善甲減模型大鼠的甲狀腺功能，調(diào)節(jié)TNF-α、IFN-γ水平，但需要較高劑量。

甲減 益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法 甲狀腺激素 TNF-α IFN-γ

中醫(yī)學(xué)根據(jù)甲狀腺功能減退癥（簡(jiǎn)稱(chēng)甲減）的臨床表現(xiàn)，將其歸為“虛勞”、“痰飲”“水腫”范疇，歷代醫(yī)家認(rèn)為其病因責(zé)之先天稟賦不足、胞胎失養(yǎng)，或由后天積勞內(nèi)傷、久病失治，加之飲食不節(jié)、情志不遂所致，其病機(jī)為心、脾、腎各臟陽(yáng)氣不足[1-2]，本研究團(tuán)隊(duì)根據(jù)臨床中所遇實(shí)際病例，概括甲減的病機(jī)主要為脾腎陽(yáng)虛，陽(yáng)氣推動(dòng)、氣化作用減弱，因虛致實(shí)，痰濁、瘀血等病理產(chǎn)物堆積，進(jìn)而形成甲減本虛標(biāo)實(shí)的臨床癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子廣泛地參與到下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)控中，病理?xiàng)l件下，嚴(yán)密的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)被破壞，但有關(guān)其變化方向及治療后效應(yīng)的證據(jù)較少。針對(duì)甲減脾腎陽(yáng)虛的基本病機(jī)，采用益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎，兼以活血化瘀之法，組方芪桂顆粒用于治療甲減，在臨床中取得良好的效果。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法對(duì)甲減模型大鼠甲狀腺功能及細(xì)胞因子：腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）水平的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重200±20g，由長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司購(gòu)入，許可證號(hào)SCXK（吉）031-0027，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。

1.2 藥物與試劑

芪桂顆粒由黃芪、黨參、白術(shù)、肉桂、巴戟天、干姜、熟地、菟絲子、川芎、當(dāng)歸、丹參、龍骨、牡蠣組成，以上顆粒劑實(shí)際重量64.5g，由江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；丙基硫氧嘧啶：50mg/片，由上海朝暉藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：091206；優(yōu)甲樂(lè)：50μg/片，由德國(guó)默克公司生產(chǎn)，批號(hào)：106226。FT3、FT4、TSH采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)；TNF-α，IFN-γ試劑盒由北京中杉金橋技術(shù)有限公司提供。

1.3 主要儀器

CHEMIX-180全自動(dòng)生化分析儀：日本Sysmex公司；352型酶標(biāo)儀：芬蘭Labsystems Multiskan MS。

2 方法

2.1 分組及造模

60只Wistar大鼠隨機(jī)選取10只為空白組，雌雄各半，其余50只予0.1%丙硫氧嘧啶（PTU）生理鹽水溶液按1mg/100g體重灌胃建造甲減大鼠模型。15天后檢測(cè)各組大鼠甲狀腺功能，F(xiàn)T3、FT4水平低于空白組，TSH＞10uIU/ml為造模成功，治療期間仍繼續(xù)予PTU生理鹽水溶液灌胃，隔日1次，空白組予等量生理鹽水。將50只甲減模型大鼠隨機(jī)分為5組：模型組、西藥組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。

2.2 給藥

甲減模型建立成功后，各治療組予相應(yīng)治療藥物12周，按照人與大鼠體表面積折算等效劑量比值計(jì)算大鼠用藥劑量，并根據(jù)大鼠體重予以調(diào)整。西藥組將25μg優(yōu)甲樂(lè)溶于水制備成222.2ml混懸液，中藥低、中、高劑量組分別將64.5g、129.0g、258.0g芪桂顆粒溶于水制備成222.2ml溶液，拌勻，加熱3分鐘致顆粒完全溶解，各治療組均將相應(yīng)藥物按照20ml/Kg體重灌胃，空白組及模型組予等量生理鹽水。

2.3 觀察指標(biāo)

治療12周后，停食停水12h，次日清晨腹主動(dòng)脈取血，測(cè)血清FT3、FT4、TSH、TNF-α，IFN-γ水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 給藥前各組大鼠甲功水平（見(jiàn)表1），與空白組相較，各組FT3、FT4水平均低于空白組（P＜0.05），TSH＞10uIV/ml且高于空白組（P＜0.05）。除空白組外其余各組之間，甲功水平的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示造模成功。

表1 給藥前各組大鼠甲功水平（±s）

表1 給藥前各組大鼠甲功水平（±s）

注：與空白組比較＊P＜0.05

組別 N FT3（pmol/L） FT4（pmol/L） TSH（uIU/ml）空白組 10 5.46±1.71 25.64±5.13 2.64±0.73模型組 10 2.24±0.68＊ 2.16±0.86＊ 10.94±1.13＊西藥組 10 2.32±0.73＊ 2.51±0.85＊ 11.60±1.02＊中藥低劑量組 10 2.13±0.82＊ 2.33±0.57＊ 12.18±1.39＊中藥中劑量組 10 2.17±0.76＊ 2.25±0.84＊ 11.87±1.32＊中藥高劑量組 10 2.34±0.96＊ 2.36±0.71＊ 12.52±1.51＊

3.2 給藥后各組大鼠甲功水平（見(jiàn)表2）

表2 .給藥后各組大鼠甲功水平（±s）

表2 .給藥后各組大鼠甲功水平（±s）

注：與空白組比較＊P＜0.05,△與模型組比較P＜0.05

組別 N FT3（pmol/L） FT4（pmol/L） TSH（uIU/ml）空白組 10 5.62±1.37 26.73±4.84 2.78±1.14模型組 10 2.04±0.64＊ 2.24±0.67＊ 11.05±1.74＊西藥組 9 4.12±0.85△ 12.57±1.70△ 3.24±0.92△中藥低劑量組 8 3.89±1.63△ 10.65±1.72△ 3.18±0.78△中藥中劑量組 10 4.24±1.02△ 11.62±1.74△ 2.95±1.12△中藥高劑量組 9 4.35±1.21△ 12.15±1.63△ 2.54±1.18△

治療12周后，模型組FT3、FT4水平低于空白組（P＜0.05），TSH水平高于空白組（P＜0.05），提示甲減模型穩(wěn)定。各治療組FT3、FT4水平高于模型組（P＜0.05），TSH水平低于模型組（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示西藥及中藥各劑量組對(duì)于甲減模型大鼠甲功有改善作用。

3.3 給藥后各組大鼠TNF-α、IFN-γ水平（見(jiàn)表3）

模型組TNF-α、IFN-γ水平高于空白組（P＜0.05），提示甲減狀態(tài)下兩細(xì)胞因子水平升高。西藥組、中藥低劑量組與模型組相比，TNF-α水平的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,中藥中劑量組、中藥高劑量組TNF-α水平低于模型組、西藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示西藥優(yōu)甲樂(lè)對(duì)于甲減大鼠TNF-α水平?jīng)]有改善作用，中藥可以改善TNF-α水平，但需要較高劑量。IFN-γ水平西藥組、中藥各劑量組均低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但中藥中、高劑量組較西藥組更低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明西藥及中藥都可以改善升高的IFN-γ水平，但中藥中、高劑量組的改善作用更加明顯。

表3 給藥后各組大鼠TNF-α、IFN-γ水平（±s）

表3 給藥后各組大鼠TNF-α、IFN-γ水平（±s）

注：與空白組比較＊P＜0.05，與模型組比較△P＜0.05，與西藥組比較·P＜0.05

組別 N TNF-α（ng/L） IFN-γ（ng/L）空白組 10 30.63±5.30 723.26±80.37模型組 10 66.13±5.17＊ 1268.24±76.47＊西藥組 9 57.62±4.68 1024.36±82.74△中藥低劑量組 8 56.92±4.72 1013.56±98.72△中藥中劑量組 10 42.63±4.10△· 842.30±87.45△·中藥高劑量組 9 41.24±4.75△· 800.52±90.96△·

4 討論

予0.1%PTU生理鹽水溶液灌胃后，各造模組大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少、聚堆、進(jìn)食進(jìn)水減少、皮毛失去光澤、反應(yīng)減慢等低代謝的表現(xiàn)，并且在造模過(guò)程中逐漸加重，與臨床上脾腎陽(yáng)虛患者畏寒肢冷、食欲減退、困倦乏力、皮膚干燥的臨床癥狀相符。針對(duì)甲減脾腎兩臟陽(yáng)氣虛衰的病機(jī)，采用益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法組中藥自擬方芪桂顆粒，方中以黃芪為君，健脾補(bǔ)氣，利水消腫，黨參、白術(shù)為臣，助黃芪益氣升陽(yáng)，黨參兼有生津補(bǔ)血之功效，白術(shù)兼有健脾燥濕之用；肉桂、巴戟天、干姜、菟絲子加強(qiáng)全方補(bǔ)益陽(yáng)氣之力；佐以熟地、川芎、當(dāng)歸、丹參，養(yǎng)血活血，加強(qiáng)活血祛瘀的作用，龍骨、牡蠣重鎮(zhèn)安神。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“腎，主骨生髓通于腦”，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的功能相似，全方在補(bǔ)益一身陽(yáng)氣的同時(shí)，從整體上改善下丘腦-垂體-甲狀腺軸的功能，同時(shí)注重活血化瘀，消除病理產(chǎn)物。

在甲狀腺上皮細(xì)胞合成并釋放甲狀腺激素的過(guò)程中，細(xì)胞因子的過(guò)度增殖對(duì)其產(chǎn)生負(fù)面的影響。TNF-α、IFN-γ及多種白細(xì)胞介素可與甲狀腺濾泡細(xì)胞及上皮細(xì)胞結(jié)合，抑制甲狀腺激素的產(chǎn)生，并進(jìn)一步影響細(xì)胞形態(tài)，甚至影響其mRNA的表達(dá)[3]，TNF-α、IFN-γ還可以通過(guò)抑制TSH對(duì)于甲狀腺上皮細(xì)胞的刺激作用，降低其攝碘率，抑制甲狀腺激素的合成[4]實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)中藥治療后，甲減模型大鼠TNF-α、IFN-γ水平降低，甲狀腺功能恢復(fù)，益氣溫陽(yáng)補(bǔ)腎法對(duì)于甲功的改善效果優(yōu)于單純使用西藥，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制細(xì)胞因子的水平達(dá)到的。

[1] 莫崇念,康曉燕,鄧麗莎,謝春光.謝春光教授治療甲狀腺功能減退癥經(jīng)驗(yàn)[J].湖南中醫(yī)雜志,2012,01:27-2.

[2] 賈紹燕.甲狀腺功能減退中醫(yī)病機(jī)分析[J].中醫(yī)雜志,2010,51(2):26-27.

[3] Papanas N,Papazoglou D, Papatheodorou K,Antonoglou C,Kotsiou S,Maltezos E.Thyroxine replacement dose in patients with Hashimoto disease:a potencial role for interleukin-6.Cytokine.2006;35:166-170.

[4] Caturegli P,Hejazi M,Suzuki K,et al.Hypothyroidism in transgenic mice expressing IFN-gamma in the thyroid.Proc Natl Acad Sci USA. 2000;97:1719–1724.

* 黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目：項(xiàng)目名稱(chēng)：芪柱顆粒對(duì)大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸影響的代謝組學(xué)研究.項(xiàng)目編號(hào)：H201458.

** 通訊作者