抑癌基因P16和FHIT在宮頸病變組織中的表達(dá)及意義

林翠波，林 安，何海新，李 玲

(福建省腫瘤醫(yī)院婦科，福建 福州 350014)

抑癌基因P16和FHIT在宮頸病變組織中的表達(dá)及意義

林翠波，林 安，何海新，李 玲

(福建省腫瘤醫(yī)院婦科，福建 福州 350014)

目的探究抑癌基因P16、脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)在宮頸病變組織中的表達(dá)及意義。方法選取福建省腫瘤醫(yī)院自2015年5月至2017年5月收治的40名宮頸癌患者作為宮頸癌組，另選擇同時(shí)期收治的40名宮頸上皮內(nèi)瘤病變(CIN)患者和40名健康成年人分別作為CIN組、對(duì)照組，采用免疫組化的方法對(duì)三組人員的抑癌基因P16、FHIT的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果宮頸癌組與CIN組、對(duì)照組比較，抑癌基因P16、FHIT的陽(yáng)性率均較低，CIN組與對(duì)照組比較抑癌基因P16、FHIT的陽(yáng)性率均較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.36～6.12，均Plt;0.05)。宮頸癌組織中臨床分期Ⅰ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅱ期、Ⅲ期，Ⅱ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅲ期，病理分級(jí)中高分化的P16陽(yáng)性率明顯高于中分化、低分化，中分化P16陽(yáng)性率明顯高于低分化，宮頸癌組織中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的P16陽(yáng)性率、FHIT陽(yáng)性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.23～5.36，均Plt;0.05)。結(jié)論抑癌基因P16、FHIT的表達(dá)水平與宮頸病變的進(jìn)展有一定的關(guān)系，同時(shí)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

抑癌基因P16；脆性組氨酸三聯(lián)體；表達(dá)；宮頸癌變

宮頸癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的女性生殖道惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌，對(duì)女性患者的生命健康造成了較大的威脅，因此，對(duì)于該病發(fā)病原因及作用機(jī)制進(jìn)行有效的探討至關(guān)重要[1]。盡管宮頸癌的發(fā)生發(fā)展存在基因改變的復(fù)發(fā)性及多因素性，但其中也存在細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡調(diào)控等因素的作用。有研究報(bào)道指出，抑癌基因功能的喪失與表達(dá)均會(huì)導(dǎo)致宮頸組織發(fā)生一系列的病理性改變，引起細(xì)胞的異常增殖與表達(dá)，最終引起宮頸癌組織的病變[2]?，F(xiàn)針對(duì)福建省腫瘤醫(yī)院收治的宮頸癌患者、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)患者及健康成年人宮頸組織中抑癌基因P16(p16 gene)、脆性組氨酸三聯(lián)體(fragile histidine traid,FHIT)的表達(dá)水平進(jìn)行研究，結(jié)果總結(jié)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取福建省腫瘤醫(yī)院自2015年5月至2017年5月收治的40名宮頸癌患者作為宮頸癌組，另選擇同時(shí)期收治的40名CIN患者和40名健康成年人分別作為CIN組、對(duì)照組。宮頸癌組年齡為45～58歲，平均年齡為(52.36±2.78)歲；CIN組年齡為47～60歲，平均年齡為(53.29±2.45)歲；對(duì)照組年齡為49～60歲，平均年齡為(53.78±2.95)歲。三組一般資料比較無(wú)明顯差異(均Pgt;0.05)，具有可比性。全部研究對(duì)象均簽署了關(guān)于本次研究的知情權(quán)同意書，試驗(yàn)符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)審查。

1.2方法

收集上述三組患者的宮頸組織標(biāo)本，宮頸癌組織標(biāo)本收集于手術(shù)切除過(guò)程用于病理檢查的宮頸組織，CIN及正常宮頸組織是行子宮肌瘤子宮全切除術(shù)獲得。所有宮頸組織予以10%的福爾馬林溶液固定，石蠟包埋后，切片厚度約為4μm，采用免疫組化的方法對(duì)三組研究對(duì)象的抑癌基因P16、FHIT的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)量，選擇的試劑包括兔抗人FHIT多克隆抗體、鼠抗人單克隆P16抗體，采用PBS作為陰性對(duì)照，試劑均購(gòu)自福州邁新公司。免疫組化的方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。宮頸癌的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)(2009年)宮頸癌分期[3]：Ⅰ期，腫瘤僅局限在宮頸部位，尚未考慮向?qū)m體方面侵犯；Ⅱ期，宮頸癌的侵犯已經(jīng)超出了子宮的范圍，但仍未累及骨盆壁或陰道下方1/3的部位；Ⅲ期，腫瘤已經(jīng)對(duì)盆腔壁造成侵犯，行直腸檢查可見宮頸腫瘤與盆腔壁之間未存在間隙，或腫瘤已經(jīng)累及陰道的1/3以下部位。根據(jù)取得宮頸癌組織標(biāo)本后在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行分類，宮頸癌的病理分級(jí)包括高分化、中分化及低分化三類。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

在光鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)完整且不重疊的高倍視野進(jìn)行觀察，共500個(gè)細(xì)胞，觀察并判斷是否著色：0分，切片中無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或僅有5%以下的細(xì)胞著色；1分，切片中有5%～50%的細(xì)胞呈現(xiàn)炎性表達(dá)；2分，可見至少50%的細(xì)胞呈現(xiàn)陽(yáng)性的表達(dá)，見圖1。將≥1分判斷為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 P16、FHIT細(xì)胞漿染色陽(yáng)性(免疫組化ABC×100)

Fig.1 P16 and FHIT cell pulp staining was positive (immunohistochemistry ABC×100)

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，Plt;0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1抑癌基因P16和FHIT在不同宮頸組織中的表達(dá)

與CIN組、對(duì)照組比較，宮頸癌組抑癌基因P16、FHIT陽(yáng)性率均較低，CIN組較對(duì)照組抑癌基因P16、FHIT陽(yáng)性率低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.36～6.12，均Plt;0.05)，見表1。

表1 抑癌基因P16、FHIT在不同宮頸組織中的表達(dá)[n(%)]

2.2抑癌基因P16、FHIT在宮頸癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

宮頸癌組織中臨床分期Ⅰ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅱ期、Ⅲ期，Ⅱ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅲ期，病理分級(jí)中高分化的P16陽(yáng)性率明顯高于中分化、低分化，中分化P16陽(yáng)性率明顯高于低分化，宮頸癌組織中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的P16陽(yáng)性率、FHIT陽(yáng)性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.23～5.36，均Plt;0.05)。宮頸癌組織中不同臨床分期、病理分級(jí)中FHIT陽(yáng)性率相比無(wú)明顯差異(Pgt;0.05)，見表2。

表2 抑癌基因P16、FHIT在宮頸癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

3討論

3.1 FHIT基因在宮頸癌中的作用機(jī)制

FHIT基因是近年來(lái)在臨床工作中發(fā)現(xiàn)的一類新型候選抑癌基因，其作用機(jī)制為通過(guò)其編碼的蛋白質(zhì)參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)過(guò)程。有研究報(bào)道指出，F(xiàn)HIT蛋白在良性的上皮細(xì)胞組織中具有較高的表達(dá)水平，但當(dāng)其水平降低時(shí)，即表現(xiàn)出失活的情況時(shí)，惡性上皮腫瘤的發(fā)生率則會(huì)同時(shí)明顯升高，最終引起腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4]。另有資料顯示，在絕大多數(shù)的惡性腫瘤組織及細(xì)胞中能夠發(fā)現(xiàn)FHIT基因的高頻率缺失及異常表達(dá)的情況[5]。本次研究結(jié)果顯示，宮頸癌組與CIN組、對(duì)照組分別相比抑癌基因FHIT的陽(yáng)性率均較低，CIN組與對(duì)照組相比FHIT的陽(yáng)性率均較低，宮頸癌組織中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者FHIT陽(yáng)性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。但宮頸癌組織中不同臨床分期、病理分級(jí)的FHIT陽(yáng)性率相比無(wú)明顯差異(Pgt;0.05)。結(jié)果提示，抑癌基因FHIT可能參與了宮頸癌變，且雖然其在宮頸癌的不同臨床分期及病理分級(jí)之間無(wú)明顯差異，但與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移相關(guān)，認(rèn)為抑癌基因FHIT可作為預(yù)測(cè)及判斷宮頸癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的可靠指標(biāo)[6]。

3.2 P16基因在宮頸癌中的作用機(jī)制

通常情況下，哺乳動(dòng)物細(xì)胞周期調(diào)控過(guò)程中的G1～S期之間的調(diào)控點(diǎn)可作為細(xì)胞增殖等一系列變化的調(diào)控關(guān)鍵點(diǎn)，一旦該調(diào)控點(diǎn)發(fā)生異常的改變，則可能引起腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。尤其是有P16所參與的調(diào)控途徑，一旦發(fā)生改變，例如出現(xiàn)P16失活或異常等情況，則可能導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法正常增殖而出現(xiàn)失控，另外，伴隨發(fā)生錯(cuò)誤的細(xì)胞周期進(jìn)展紊亂的情況，這就在一定程度上增加了細(xì)胞癌變的發(fā)生可能，引起腫瘤細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)展[8-9]。結(jié)合本次研究結(jié)果，宮頸癌組與CIN組、對(duì)照組分別相比抑癌基因P16陽(yáng)性率均較低，CIN組與對(duì)照組相比抑癌基因P16陽(yáng)性率均較低，宮頸癌組織中臨床分期Ⅰ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅱ期、Ⅲ期，Ⅱ期P16陽(yáng)性率明顯高于Ⅲ期，病理分級(jí)中高分化的P16陽(yáng)性率明顯高于中分化、低分化，中分化P16陽(yáng)性率明顯高于低分化，宮頸癌組織中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16陽(yáng)性率明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。提示P16與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系，當(dāng)P16表達(dá)降低或缺失時(shí)能夠加重病情，證實(shí)了P16的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞的分化及轉(zhuǎn)移起到了調(diào)控的作用，需引起臨床工作者的重視[10-11]。

綜上所述，抑癌基因P16、FHIT的表達(dá)水平與宮頸病變的進(jìn)展有一定的關(guān)系，同時(shí)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但由于本次研究樣本量有限，在收集數(shù)據(jù)方面可能存在缺陷，通過(guò)進(jìn)一步深入分析可獲得精確的結(jié)論。

[1]張麗,楊文婷,鄭鵬生.ALDH1在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼健康研究,2016,27(1):45-48,69.

[2]Xiao W D,Ao J,Huang Z,etal.The effects of up-regulation of miR-148a on the expression of anti-oncogene ppENK, p16 and RASSF1A in pancreatic carcinoma AsPC-1 cells[J].Pancreatology,2016,16(Suppl 1):S15.

[3]李新敏,古雅麗,王香芝,等. p16、DAPK和ESRβ基因啟動(dòng)子甲基化與宮頸癌的關(guān)系[J].診斷病理學(xué)雜志,2015,22(2):78-81.

[4]Badiga S,Chambers M M,Huh W,etal.Expression of p16INK4A in cervical precancerous lesions is unlikely to be preventable by human papillomavirus vaccines[J].Cancer,2016,122(23):3615-3617.

[5]李碧嵐,萬(wàn)小平.表觀遺傳學(xué)調(diào)控與婦科腫瘤發(fā)生、演進(jìn)及治療的研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2012,17(1):74-80.

[6]高晨菲,康慧杰,白麗霞,等.葉酸對(duì)脆性組氨酸三聯(lián)體基因表達(dá)的影響及對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖凋亡的作用[J].中華流行病學(xué)雜志,2014,35(5):569-572.

[7]王會(huì)娟,劉玉玲,湯福想,等.Survivin、FHIT及bFGF在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2012,28(5):384-386.

[8]Pathak S,Bajpai D,Banerjee A,etal.Serum one-carbon metabolites and risk of cervical cancer[J].Nutr Cancer,2014,66(5):818-824.

[9]Heijkoop S T,Franckena M,Thomeer M G,etal.Neoadjuvant chemotherapy followed by radiotherapy and concurrent hyperthermia in patients with advanced-stage cervical cancer:a retrospective study[J].Int J Hyperthermia,2012,28(6):554-561.

[10]Jha A K, Nikbakht M, Jain V,etal.p16(INK4a) and p15(INK4b) gene promoter methylation in cervical cancer patients[J].Oncol Lett,2012,3(6):1331-1335.

[11]Siegel E M,Riggs B M,Delmas A L,etal.Quantitative DNA methylation analysis of candidate genes in cervical cancer[J].PLoS One,2015,10(3):e0122495.

[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

ExpressionsoftumorsuppressorgeneP16andFHITincervicallesionsandtheirsignificance

LIN Cui-bo, LIN An, HE Hai-xin, LI Ling

(DepartmentofGynecology,FujianTumorHospital,FujianFuzhou350014,China)

ObjectiveTo explore the expressions of tumor suppressor gene P16 and fragile histidine triad (FHIT) in cervical lesions and their significance.MethodsForty patients with cervical cancer admitted in Fujian Tumor Hospital from May 2015 to May 2017 were selected in cervical cancer group, and at the same period 40 patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) were selected in CIN group and 40 healthy adults in control group. Expression levels of tumor suppressor gene P16 and FHIT in three groups were measured by using immunohistochemical method.ResultsPositive rate of tumor suppressor gene P16 and FHIT in cervical cancer group was lower than that in CIN group and the control group, and that in CIN group was lower than that in the control group with significant differences (χ2value ranged 5.36-6.12, allPlt;0.05). Positive rate of P16 in cervical cancer tissue in stage Ⅰ was significantly higher than that in stage Ⅱ and Ⅲ, and that in stage Ⅱ was much higher than that in stage Ⅲ. Positive rate of P16 in well differentiated cervical cancer tissue was obviously higher than that in moderately and poorly differentiated cancer tissues, and that in moderately differentiated cancer tissue was significantly higher than in poorly differentiated cancer tissue. Positive rate of P16 and FHIT in cervical cancer tissue without lymph node metastasis was much higher than that in cancer tissue with lymph node metastasis. All differences had statistical significance (χ2value ranged 5.23-5.36, allPlt;0.05).ConclusionExpression levels of tumor suppressor gene P16 and FHIT are associated with progress of cervical lesions, and they may be related to occurrence and development of cervical cancer.

tumor suppressor gene P16; fragile histidine triad (FHIT); expression; cervical cancer

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.015

R737.3

A

1673-5293(2017)11-1362-02

2017-07-10

林翠波(1979—)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦科臨床醫(yī)療工作。

李 玲，副主任醫(yī)師。