中藥微生態(tài)制劑對奶牛隱性乳房炎乳汁相關指標的影響

文/寨鴻瑞 郭 慶

中藥微生態(tài)制劑對奶牛隱性乳房炎乳汁相關指標的影響

文/寨鴻瑞1郭 慶2*

（1 河南省開封市動物疫病預防控制中心；2 安徽科寶生物工程有限公司）

用乙醇溶液提取中藥有效成分，接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌，制備中藥微生態(tài)制劑，選取某奶牛場經CMT法檢測患有隱性乳房炎的泌乳奶牛，隨機分成中藥微生態(tài)治療組、陽性對照組（不進行治療）、健康對照組，治療后第7天再用CMT檢測乳汁，評價中藥微生態(tài)制劑對乳汁相關指標的影響。結果顯示：中藥微生態(tài)制劑在試驗0 天時，患隱性乳房炎奶牛與陰性對照組比，乳汁中體細胞數和電導率都極顯著升高（P＜0.01），乳清中的白蛋白（ALB）、谷丙轉氨酶（ALT）和乳酸脫氫酶（LDH）含量都極顯著升高（P＜0.01）。通過7 天中藥治療后，中藥治療組與陽性對照組比，體細胞數、電導率、ALB、LDH和ALT含量差異顯著（P ＜0.05），與陰性對照組比，體細胞數、電導率、ALB、LDH和ALT含量差異不顯著（P＞0.05），結果表明：中藥微生態(tài)制劑對奶牛隱性乳房炎有良好的治療效果，其主要是能夠使乳汁中的ALB、LDH和ALT含量降至正常值。

隱性乳房炎；中藥；微生態(tài)制劑；乳汁；乳清

乳房炎是奶牛乳腺發(fā)生的一種炎癥，是危害奶牛場最大、最常見、經濟損失最嚴重的疾病之一，尤其是奶牛隱性乳房炎，由于其發(fā)病率高，無明顯的臨床癥狀，乳汁雖有變化但肉眼很難察覺，且隨著病情的發(fā)展可能會變成臨床型乳房炎[1，2]。近年來用中草藥治療奶牛乳房炎已成為熱門的研究課題，并且已有中草藥復方制劑、散劑、湯劑和中草藥提取物制成注射劑，在奶牛乳房炎的防治方面發(fā)揮了重要作用[3～5]，目前，也有采用微生態(tài)制劑治療奶牛隱性乳房炎的報道[6，7]，但都是單純的采用益生菌制成微生態(tài)制劑。為了探索療效顯著、簡單易行、經濟實用的中藥療法，以克服其它療法的弊端。本試驗以中獸醫(yī)理論為基礎，篩選出對奶牛乳房炎有效的中藥，經過科學組方，提取有效成分，接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌，發(fā)酵后制成中藥微生態(tài)制劑，直接給奶牛飲用，通過測定用藥前后乳汁中體細胞數、電導率、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LDH）相關指標的影響，以評價其對奶牛隱性乳房炎治療效果。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

杜仲葉、銀杏葉、紫蘇、白頭翁、紫錐菊、葎草、蝦殼、黃芪、甘草購于淮北市養(yǎng)生堂大藥房；CMT診斷液購于西安麥得法藥業(yè)有限公司；乳酸桿菌、紅茶菌和酵母菌購于徐州市獻華生物科技有限公司；ALB、ALT、和LDH試劑盒均購于上海士鋒生物科技有限公司；乙醇等化學試劑均為分析純。

1.2 儀器

HH-4數顯恒溫水浴鍋、恒溫磁力攪拌器、RE-5001旋轉蒸發(fā)儀、DL-360B超聲波清洗器、邁瑞B(yǎng)A-90半自動生化分析儀、高速冷凍離心機、CONscan40型數顯電導率儀。

1.3 中藥微生態(tài)制劑的制備工藝

將杜仲葉、銀杏葉、紫蘇、白頭翁、紫錐菊、葎草、蝦殼、黃芪、甘草等按比例準確稱取，用80%乙醇浸泡30 min（料液比1:10），然后超聲15 min，回流提取，第一次2 h，用16 層紗布過濾倒出藥液。藥渣再加60%乙醇（料液比1:8），第二次1 h，倒出藥液，合并2 次濾液，旋轉蒸發(fā)至無醇味，向濃縮液中加純化水至1 g/mL生藥。以1 000 g濃縮液加15 g的白糖加熱煮沸5 min，降至常溫無菌室內接種乳酸桿菌、紅茶菌和酵母30 g，37 ℃發(fā)酵72 h，即得中藥微生態(tài)制劑，4 ℃保存?zhèn)溆肹8]。

1.4 乳汁中體細胞數和電導率的測定

參照《奶牛病學》[9]中的方法檢測體細胞數，用CONscan40型數顯電導率儀測定乳汁的電導率。

1.5 乳 清 中 ALB、ALT和LDH含量的測定

3 000 r/min離心乳汁除去乳脂，然后12 000 r/min離心，取上清液4 ℃保存，備用。采用邁瑞B(yǎng)A-90半自動生化分析儀測定乳清中ALB、ALT和LDH含量，按試劑盒說明書進行測定。

1.6 試驗動物的分組與采樣

選取某奶牛場的泌乳奶牛若干頭。嚴格消毒，棄去前三把乳汁，應用CMT診斷液進行診斷，根據付秀花、王恬的方法[10]判定患有隱性乳房炎的泌乳奶牛。經CMT檢測患有隱性乳房炎的奶牛30 頭，隨機分成中藥治療組（Ⅰ組，20 頭65 個乳區(qū)）與陽性對照組（Ⅱ組，10 頭26 個乳區(qū)）；另選10 頭健康奶牛作為陰性對照組（Ⅲ組，40 個乳區(qū)）。中藥治療組奶牛自由飲用中藥微生態(tài)制劑，3 次／天，陽性對照組不用藥，健康對照組飲用5 倍稀釋后的中藥微生態(tài)制劑，用藥7 天后，采取乳樣進行分析。同時比較用藥第0天和用藥后第7天的各組乳汁指標的變化。

1.7 數據處理

應用SPSS 18.0統計軟件，對試驗數據進行分析。

2 結果

2.1 中藥微生態(tài)劑乳汁中體細胞數和電導率的影響

由表1可以知，在治療前，Ⅰ、Ⅱ組奶牛乳汁中的體細胞數、電導率與Ⅲ組相比差異極顯著（P＜0.01）。通過中藥微生態(tài)制劑治療7 天后，Ⅰ組奶牛乳汁中的體細胞數、電導率與Ⅱ組相比差異極顯著（P＜ 0.01），與Ⅲ組相比差異不顯著（P＞ 0.05）；Ⅱ組奶牛乳汁中的體細胞數、電導率與Ⅲ組相比差異極顯著（P＜ 0.01）（表1）。

表1 中藥微生態(tài)制劑對奶牛隱性乳房炎體細胞數和電導率的影響

表2 中藥微生態(tài)制劑對隱性乳房炎患牛乳清中ALB、LDH、ALT含量的影響

2.2 中藥微生態(tài)制劑對隱性乳房炎患牛乳清中ALB、ALT和LDH含量的影響

由表2可知，在治療前，Ⅰ、Ⅱ組奶牛乳清中ALB、ALT和LDH含量與Ⅲ組相比差異極顯著（P ﹤0.01）。通過中藥微生態(tài)制劑治療7 天后，Ⅰ組奶牛乳清中ALB、LDH、ALT與Ⅱ組相比差異顯著（P﹤0.05），與Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞0.05）；Ⅱ組奶牛乳清中的ALB、LDH、ALT與Ⅲ組相比差異極顯著（P ﹤0.01）（表2）。

3 討論

由試驗結果可以看出，讓患有隱性乳房炎的奶牛連續(xù)飲用7 天中藥微生態(tài)制劑后，乳汁體細胞數下降比較明顯，治療組由153.58 萬個/mL降到48.13 萬個/mL，降低乳汁體細胞數明顯，而陽性對照組變化不大，陰性對照組體細胞數下降，說明中藥微生態(tài)制劑對奶牛隱性乳房炎具有較好的預防作用。中藥微生態(tài)制劑防治隱性乳房炎的途徑，可能是乳酸菌與腸道菌群建立有益菌的生長，減少有害菌群的產生，促進營養(yǎng)物質的吸收，加強機體防御能力，也可能是中藥中的有效成分能夠清除氧自由基，修復被損傷的乳腺細胞等。將中藥和有益菌放在一起進行發(fā)酵制成微生態(tài)制劑，能夠起到協同作用。但其作用機理還有待深入研究。

在中藥微生態(tài)制劑配方中，紫蘇、白頭翁、杜仲葉、銀杏葉等均有清熱解毒、活血化瘀的功能，黃芪、甘草等均具有增強機體免疫力的作用[11]，乳酸菌是良好的免疫激活劑，能夠增強奶牛免疫功能，激活巨噬細胞活性，提高奶牛抗體水平和免疫球蛋白水平，提高抗病力和抗應激能力，有效預防金黃色葡萄球菌等有害菌的感染，降低乳房炎發(fā)病率[12，13]。本試驗結果表明，中藥微生態(tài)制劑對患有隱性乳房炎奶牛有良好的治療效果，ALB、ALT和LDH含量達到正常的水平，與陰性對照組相當。這為臨床應用提供了試驗數據，但其具體作用機制有待進一步探討。C

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寨鴻瑞（1982-），女，河南開封人，碩士，獸醫(yī)師，從事動物衛(wèi)生與產品質量監(jiān)督。

*通信作者：郭慶（1980-），男，安徽淮北人，碩士，副研究員，從事中藥微生態(tài)制劑的研究與開發(fā)。

2017-09-08）