淺析水產(chǎn)品中氯霉素殘留能力驗證關(guān)鍵控制點(diǎn)

李素棉

摘 要：本文通過對參與農(nóng)業(yè)部組織的水產(chǎn)品中氯霉素殘留能力驗證整個過程的操作與分析，分享了實驗室氯霉素殘留檢測的方法與技巧，強(qiáng)調(diào)前處理及檢測關(guān)鍵控制點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：能力驗證；氯霉素；水產(chǎn)品

能力驗證是通過實驗室間測試結(jié)果的比對來判定實驗室能力的合格評定活動。通過發(fā)送統(tǒng)一制作的測試樣品至各個實驗室進(jìn)行實際測試（測量），再將實驗室的測試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，最后以各個實驗室結(jié)果的一致性來判定實驗室對特定項目的檢測能力。能力驗證作為實驗室認(rèn)可的重要內(nèi)容之一，被國際組織、實驗室認(rèn)可機(jī)構(gòu)和實驗室管理部門所重視；而參與能力驗證，更可使檢測機(jī)構(gòu)提高業(yè)務(wù)能力水平，優(yōu)化組織管理，全面提升檢測機(jī)構(gòu)整體素質(zhì)。筆者通過參與2017年農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測能力驗證整個過程的操作與分析，總結(jié)能力驗證的方法和技巧，分享相關(guān)收獲，以供參考。

一、材料

1.樣品。本次能力驗證發(fā)放的考核樣品為制備好的草魚樣品，包括1個空白樣品和3個空白基質(zhì)添加的平行樣品，每個樣品均為5.0 g。

2.實驗儀器。液質(zhì)聯(lián)用儀島津LCMS-8050；高速勻漿機(jī)、氮吹儀、混勻儀。

3.試劑。乙酸乙酯、正己烷、甲醇（色譜純）、氫氧化銨（25%-28%）、無水硫酸鈉（經(jīng)650℃灼燒4h，置于干燥器中備用）、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度99.5%）、氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)溶液（100ug/mL）。

4.檢測方法。本次能力驗證可由實驗室根據(jù)實際情況在表1中推薦的檢測方法中自行選擇。

二、試驗過程

1.準(zhǔn)備工作。（1）人員配置：檢測過程需采用雙人負(fù)責(zé)制的模式。即需要按照 1 人主檢，1 人復(fù)核的模式操作，雙人負(fù)責(zé)可以避免偶然誤差的發(fā)生。檢測人員應(yīng)熟練掌握標(biāo)準(zhǔn)方法中的相關(guān)要求，準(zhǔn)確控制檢測關(guān)鍵點(diǎn)，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行檢測，更應(yīng)具有對結(jié)果進(jìn)行正確判斷的能力及經(jīng)驗。檢測人員應(yīng)在能力驗證前通過多次加標(biāo)回收預(yù)實驗，保證操作的穩(wěn)定性和一致性，達(dá)到方法要求的靈敏度、準(zhǔn)確度及加標(biāo)回收率。

（2）方法選擇：實驗室應(yīng)依據(jù)自身實際儀器、設(shè)備及方法認(rèn)證、應(yīng)用掌握情況選擇適合的標(biāo)準(zhǔn)方法開展能力驗證活動。對比1.4中建議的五種檢測方法，《GB/T 20756-2006 可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定，該儀器選擇性好、靈敏度高，檢出限低（0.1ug/kg）；該方法前處理簡單快捷，操作步驟少，目標(biāo)物損失小，回收率高；該法通過添加同位素內(nèi)標(biāo)物降低基質(zhì)效同時可校正前處理過程目標(biāo)物的損失；此方法更是本實驗室認(rèn)證過且熟練應(yīng)用的方法，因此本次能力驗證采用此法進(jìn)行檢測。

（3）物料準(zhǔn)備：實驗過程中用到的容量瓶、吸量管、移液器等計量器具均應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)或檢定，確保定量的準(zhǔn)確性。

標(biāo)準(zhǔn)溶液使用有證且保質(zhì)期的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配置，最好為近期開封的。制備氯霉素0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10 ng/mL基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，結(jié)果經(jīng)線性回歸，線性相關(guān)系數(shù)至少應(yīng)大于0.995。注意低溫冷藏后的標(biāo)準(zhǔn)溶液，恢復(fù)到室溫后應(yīng)觀察是否有結(jié)晶析出，若有析出需重新?lián)u勻溶解后使用。

篩選與能力驗證樣品相同基質(zhì)的空白樣品做好質(zhì)量控制，按照《GB/T 20756-2006可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》方法篩選出草魚陰性空白樣品。

（4）儀器狀態(tài)確認(rèn)：液質(zhì)聯(lián)用儀的靈敏度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性都直接影響檢測分析結(jié)果，考核前對儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，例如清洗離子源、調(diào)諧校準(zhǔn)儀器、優(yōu)化流動相?？己饲翱赏ㄟ^選取檢出限添加濃度0.1ug/kg的陰性空白添加樣品平行測定6次或以上，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，確認(rèn)儀器靈敏度及穩(wěn)定性符合方法要求，確保儀器運(yùn)行狀態(tài)正常且處于最佳狀態(tài)是能力驗證重要準(zhǔn)備之一。

2.同步質(zhì)控。為確認(rèn)在檢測過程中應(yīng)用的物料是否存在干擾或污染，或存在干擾應(yīng)如何有效計算扣除，須進(jìn)行質(zhì)控，質(zhì)控樣至少包括試劑空白、樣品空白、0.1ug/kg、0.3 ug/kg、0.5ug/kg濃度的空白基質(zhì)加標(biāo)樣品。

此次氯霉素能力驗證樣品是空白基質(zhì)加標(biāo)方式制備，從組織單位制樣到實驗室領(lǐng)樣回單位進(jìn)行檢測間隔了較長一段時間，為保持考核樣與質(zhì)控樣兩者的一致性，實驗室質(zhì)控加標(biāo)回收樣也應(yīng)提前加入氯霉素后冷藏?？己藰悠返竭_(dá)實驗室后，與質(zhì)控樣同時自然解凍到室溫，添加內(nèi)標(biāo)物后避光冷藏放置一段時間，再依據(jù)方法開展實驗，以保持內(nèi)標(biāo)物和目標(biāo)物的狀況一致。

3.實驗過程關(guān)鍵點(diǎn)控制。按照《GB/T 20756-2006 可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》標(biāo)準(zhǔn)方法對考核樣品及質(zhì)控樣品進(jìn)行提取凈化并上機(jī)檢測，實驗過程中重點(diǎn)把握方法的關(guān)鍵控制點(diǎn)，確保試驗的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性。

（1）提取：加入乙酸乙酯和氫氧化銨溶液后，增加渦旋30s的操作，更好的避免樣品結(jié)塊造成的氯霉素?fù)p失；加入無水硫酸鈉后進(jìn)行均質(zhì)應(yīng)盡可能充分，減少刀頭上樣品的附著，同時避免交叉污染；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)提取液時應(yīng)控制水浴溫度及蒸發(fā)速度，避免發(fā)生爆沸現(xiàn)象造成目標(biāo)物損失或者交叉污染。

（2）凈化：使用正己烷液液萃取脫脂，若樣品油脂含量過高，一至兩次無法凈化完全，可增加正己烷用量或除脂次數(shù)，又或利用低溫冷凍離心提高除脂效率。

（3）質(zhì)譜測定：由于正己烷除脂凈化樣品仍有較大干擾應(yīng)使用梯度洗脫進(jìn)行樣品測定，并適當(dāng)延長氯霉素出峰后的運(yùn)行時間，以此減輕雜質(zhì)對下一樣品的干擾；樣品檢測應(yīng)依據(jù)先試劑空白后樣品空白，先考核樣后質(zhì)控樣，先低濃度最后高濃度的順序進(jìn)行測定，避免高濃度樣品對色譜柱及儀器造成污染，影響后續(xù)樣品測定的準(zhǔn)確度；每個樣品需測定三次以上，降低儀器造成的數(shù)據(jù)誤差。

（4）結(jié)果計算：3個供試樣品結(jié)果若出現(xiàn)平行性不好的情況，忌諱人為剔除可疑結(jié)果，應(yīng)取數(shù)據(jù)的平均值以避免偶然誤差提高可行度，同時參考加標(biāo)回收率結(jié)果分析考核樣品數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

（5）數(shù)據(jù)及報告提交：確保樣品譜圖、原始記錄及報告符合規(guī)定，涵蓋所有必要信息，實現(xiàn)可追溯，單位使用法定計量單位；嚴(yán)格按照能力驗證時間節(jié)點(diǎn)及要求提交數(shù)據(jù)及原始記錄、譜圖等。

三、結(jié)語

能力驗證過程關(guān)鍵控制點(diǎn)如內(nèi)標(biāo)的添加、同步質(zhì)控、提取結(jié)塊的避免、質(zhì)譜檢測定性定量的準(zhǔn)確性等尤為重要，而能力驗證過后的得失分析、經(jīng)驗總結(jié)更為重要。能力驗證結(jié)果是實驗室管理水平和檢驗技術(shù)能力的綜合表現(xiàn)，參加能力驗證對實驗室技術(shù)能力的提升，檢測人員技術(shù)水平的提高，及滿足社會需求都是非常必要的。每一個參與能力驗證的實驗人員及實驗室都應(yīng)系統(tǒng)回顧整個考核工作的過程，總結(jié)優(yōu)勢，分析不足，找出技術(shù)與管理的漏洞，以此為契機(jī)努力提高檢測人員的技術(shù)水平及實驗室綜合能力。當(dāng)然，利用能力驗證進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制及提高，實現(xiàn)實驗室整體能力提升，保證實驗室體系持續(xù)改進(jìn)，這是一項長期持續(xù)的工作，沒有終點(diǎn)，只有連續(xù)不斷的新起點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 田娟娟，李晉成等. 國內(nèi)外水產(chǎn)品藥物殘留檢測能力驗證比對分析與發(fā)展建議[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2017，33（17）：134-140.

[2] 黃冬梅，劉歡等.水產(chǎn)品中藥物殘留檢測能力驗證實驗的技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)[J].中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2017.07（2） ：19-23.

[3] 文龍，郭棟. 加強(qiáng)能力驗證體系建設(shè)，促進(jìn)檢測機(jī)構(gòu)水平提高[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理，2010（ 1） ： 38-40.