丁香不同極性部位抑制低密度脂蛋白脂質(zhì)氧化修飾的研究

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(1.九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西九江 332000;2.九江安德和生物科技有限公司,江西九江 332000;3.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,江蘇省農(nóng)產(chǎn)品物理加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇鎮(zhèn)江 212013;4.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,江西省天然產(chǎn)物與功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330045)

丁香不同極性部位抑制低密度脂蛋白脂質(zhì)氧化修飾的研究

劉龍秀1,2,張小霞1,2,曲文娟1,3,李佳臻1,2,謝麗琴1,郝澍1,2,金洪光1,2,沈勇根1,4,張良慧1,2,江慎華1,2,3,4,*

(1.九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西九江 332000;2.九江安德和生物科技有限公司,江西九江 332000;3.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,江蘇省農(nóng)產(chǎn)品物理加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇鎮(zhèn)江 212013;4.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,江西省天然產(chǎn)物與功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330045)

為研究丁香提取物對(duì)LDL中脂質(zhì)氧化修飾的抑制作用,采用生物活性追蹤法對(duì)該提取物抑制LDL弱氧化及完全氧化過(guò)程中共軛二烯(CD)產(chǎn)生、總膽固醇降解及脂褐素產(chǎn)生的效果進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明,在LDL弱氧化過(guò)程中,丁香不同極性部位對(duì)CD產(chǎn)生、總膽固醇降解均有顯著抑制作用(p<0.05),抑制作用強(qiáng)弱順序?yàn)檎和橄?乙酸乙酯相>正丁醇相>水相。在LDL完全氧化過(guò)程中,不同極性部位對(duì)CD產(chǎn)生、總膽固醇降解及脂褐素產(chǎn)生均有顯著抑制作用(p<0.05),抑制作用強(qiáng)弱順序與上述相同?？偠喾?、總黃酮含量高低是各極性相對(duì)LDL脂質(zhì)氧化修飾抑制效果產(chǎn)生差異的原因。本文為后續(xù)研發(fā)丁香抑制LDL氧化功能食品提供參考。

丁香,生物活性追蹤法,低密度脂蛋白,氧化修飾,不同極性部位

低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)在體內(nèi)的主要功能是在肝臟和外周組織之間運(yùn)輸甘油三酯和膽固醇[1]。LDL的脂質(zhì)含量高達(dá)76.1%～78.9%,在氧化修飾過(guò)程中,脂質(zhì)核心所含的多元不飽和脂肪酸(poly-unsaturated fatty acids,PUFA)極易發(fā)生氧化產(chǎn)生共軛二烯(conjugated diene,CD),CD可使膽固醇降解[2]。總膽固醇包括膽固醇及其膽固醇酯,占LDL比重達(dá)47.3%～50.9%,是LDL的主要組成部分,該物質(zhì)的降解可反映LDL氧化修飾情況[3]。此外,脂質(zhì)過(guò)氧化物與蛋白、磷脂等反應(yīng)形成的復(fù)合產(chǎn)物脂褐素在體內(nèi)的沉積量可反映機(jī)體衰老及細(xì)胞受自由基損傷程度[4-5]。

LDL氧化修飾過(guò)程分為弱氧化和完全氧化兩個(gè)階段。在氧化初期,僅LDL所含脂質(zhì)發(fā)生氧化修飾,而載脂蛋白-B100(apoB-100)不發(fā)生或僅發(fā)生溫和修飾,修飾后的LDL被稱(chēng)為弱氧化修飾低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein,mm-LDL),該階段即為L(zhǎng)DL弱氧化修飾階段[6]。在氧化后期,主要是apoB-100及其相關(guān)氨基酸殘基發(fā)生氧化修飾,在此過(guò)程中,脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物也會(huì)參與蛋白的修飾作用并最終形成完全氧化LDL(oxidazed low density lipoprotein,ox-LDL)[3]。研究表明,mm-LDL和ox-LDL在動(dòng)脈粥樣硬化(ather-osclerosis,AS)的發(fā)病機(jī)制中均起重要作用,是引起AS的關(guān)鍵因素[7]。

丁香為桃金娘科植物丁香(EugeniacaryophyllataThunb.)的干燥花蕾,又名公丁香,具有抗氧化、抗病毒、抗血栓、抗炎、抗糖尿病、抑菌等功效,被國(guó)家列入第一批藥食同源名單[8-10]。丁香主要含多酚、鞣質(zhì)、黃酮及精油等[11]。已有研究表明,丁香水提物對(duì)LDL氧化修飾具有抑制作用[12]。實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn),丁香在國(guó)家公布的87種藥食兩用物品原料中抗氧化活性最強(qiáng);對(duì)其抗氧化活性展開(kāi)研究[13-14],發(fā)現(xiàn)丁香各極性部位對(duì)LDL氧化修飾也具有很強(qiáng)的抑制效果,乙酸乙酯相為抑制LDL氧化修飾的有效部位[13-14]。因LDL中脂類(lèi)物質(zhì)含量高,且極易被氧化[2]。丁香各極性部位對(duì)LDL所含脂類(lèi)氧化修飾的抑制效果和在弱氧化及完全氧化這兩個(gè)階段中的抑制效果，尚不清楚,從而限制了功能食品研發(fā)進(jìn)程。

因此,本文在實(shí)驗(yàn)室前期工作基礎(chǔ)上采用生物活性追蹤法,依據(jù)極性大小將丁香粗提物依次劃分為正己烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相,對(duì)這些極性部位抑制LDL脂類(lèi)在弱氧化及完全氧化過(guò)程中的抑制效果進(jìn)行研究,以期為后續(xù)研發(fā)丁香抑制LDL氧化功能食品提供參考。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

丁香 黃慶仁棧華氏大藥房,毫州市中信中藥飲片廠分裝,產(chǎn)自廣東,產(chǎn)品批號(hào)1409001,生產(chǎn)日期2014年9月24日,機(jī)械粉碎、過(guò)40目篩后置冰箱備用;新鮮血漿 自健康人血液中分離得到;肝素鈉 上海阿拉丁試劑有限公司;總膽固醇測(cè)定試劑盒 浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司;牛血清白蛋白(Albumin from Bovine Serum,BSA) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司;其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純或優(yōu)級(jí)純。

LS-55熒光/磷光/發(fā)光分光光度計(jì) 美國(guó)Perkin Elmer公司;TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司;UNIC 7200可見(jiàn)分光光度計(jì) 尤尼柯(上海)公司;PB-10 pH計(jì) Sartorius儀器設(shè)備有限公司;DFY-C高速粉碎機(jī) 溫嶺林大機(jī)械公司;LJL10冷凍干燥機(jī) 鞏義市予華儀器有限公司;CT15RT型高速冷凍離心機(jī) 上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 生物活性追蹤法制備丁香不同極性部位 采用江慎華等[14]方法,稍加修改。稱(chēng)取粉碎過(guò)40目篩的丁香粉300.00 g,采用甲醇按料液比1∶7 g/mL、溫度25 ℃、180 r/min水浴振蕩提取120 min,重復(fù)2次,3次提取液合并、混勻、定容。提取液濃縮后加入適量蒸餾水混懸,分別采用極性逐漸增大的溶劑正己烷、乙酸乙酯和正丁醇依次分別萃取10次,連同最后剩余水相共四個(gè)極性相分別濃縮,濃縮液凍干后獲得干粉,置真空干燥器中保存?zhèn)溆谩０匆韵鹿接?jì)算得率:

得率(%)=提取物質(zhì)量(g)/提取所用丁香的質(zhì)量(g)×100

1.2.2 低密度脂蛋白的提取 采用Yang等[3]方法進(jìn)行制備,以牛血清白蛋白(Albumin from Bovine Serum,BSA)為標(biāo)準(zhǔn)品,采用Lowry’s法測(cè)蛋白濃度以計(jì)量LDL濃度。

1.2.3 丁香不同極性部位對(duì)LDL氧化修飾的影響 組別設(shè)置如下,空白組:以等體積甲醇代替樣液,以等體積去離子水代替氧化劑CuSO4·5H2O或FeSO4·7H2O,其它操作均相同;促氧組:以等體積甲醇代替樣液,其它操作均相同;各極性部位組及陽(yáng)性對(duì)照2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)組:添加相同體積的對(duì)應(yīng)溶液(各極性相及BHT均用甲醇溶解,以下統(tǒng)稱(chēng)為樣液),其它操作均相同。

本文LDL及各試劑濃度均為其在混合體系中的終濃度。

1.2.3.1 對(duì)LDL弱氧化的影響 共軛二烯(CD)含量測(cè)定:采用Bagheri等[16]的方法,稍加修改。在pH4.5環(huán)境中,取9.8 mL LDL溶液(250 μg/mL),加100 μL FeSO4(45 μmol/L)或去離子水,然后加100 μL樣液(12.5 μg/mL),混勻,37 ℃水浴60 min后在37 ℃恒溫條件下測(cè)定234 nm處吸光度值。

總膽固醇含量測(cè)定:采用Yang等[3]的方法,稍加修改。在pH4.5環(huán)境中,取980 μL LDL溶液(8.0 mg/mL),加入10 μL FeSO4(0.5 μmol/L)或去離子水,加10 μL樣液(10 μg/mL),37 ℃恒溫孵育氧化24 h。取20 μL孵育氧化后的混合液與2 mL工作液(膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過(guò)氧化酶)(混合液∶工作液=1∶100)混合,37 ℃放置10 min,待其形成醌亞胺后在546 nm處測(cè)定吸光度值。

1.2.3.2 對(duì)LDL完全氧化的測(cè)定 共軛二烯(CD)含量測(cè)定:采用Bagheri等[16]的方法,稍加修改。在pH7.4環(huán)境中,取9.8 mL LDL溶液(250 μg/mL),加100 μL CuSO4(50 μmol/L)或去離子水,然后加100 μL、1 μg/mL的樣液(丁香不同極性相及陽(yáng)性對(duì)照),混勻,37 ℃水浴120 min后在37 ℃恒溫條件下測(cè)定234 nm處吸光度值。其中,正己烷、乙酸乙酯、BHT及促氧均采用甲醇為溶劑,正丁醇相及水相分別采用50%及20%甲醇溶解。

總膽固醇含量測(cè)定:采用Yang 等[3]的方法,稍加修改。在pH7.4環(huán)境中,按其方法加樣并于37 ℃恒溫孵育氧化96 h。取20 μL孵育氧化后的混合液與2 mL工作液(膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過(guò)氧化酶)(混合液∶工作液=1∶100)混合,37 ℃放置10 min,待其形成醌亞胺后在546 nm處測(cè)定吸光度值。

脂褐素含量測(cè)定:采用王麗麗等[5]方法,稍加修改。在pH7.4環(huán)境中,取4.9 mL LDL溶液(500 μg/mL)加50 μL CuSO4(1.25 μmol/L)或去離子水,加50 μL樣液(5 μg/mL),37 ℃恒溫孵育氧化72 h后在Ex350/Em460處測(cè)定脂褐素?zé)晒鈴?qiáng)度。

1.2.4 各極性相中總多酚和總黃酮含量的測(cè)定

1.2.4.1 總黃酮含量的測(cè)定 采用沈勇根等[17]及劉仁綠等[18]方法,稍作修改。加2.25 mL去離子水于試管中,取0.5 mL濃度為4000 μg/mL的樣液(做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)為不同濃度的蘆丁溶液)加入試管,加入0.15 mL 5% NaNO2振蕩均勻后靜置6 min(每次均以第一根試管計(jì)時(shí)),然后加入0.3 mL 10%的AlCl3·6H2O,振蕩均勻后靜置5 min,加入1.0 mL的1 mol/L NaOH,振蕩均勻后于510 nm比色測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=0.0011x+0.007,R2=0.9996。

1.2.4.2 總多酚含量的測(cè)定 采用沈勇根等[17]及劉仁綠等[18]方法,稍作修改。將Folin試劑原液取出一定體積用蒸餾水稀釋10倍,取稀釋10倍的溶液2.25 mL加入到0.5 mL濃度為100 μg/mL的樣液(做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)為不同濃度的沒(méi)食子酸溶液)中,然后加入2.25 mL 6%的無(wú)水碳酸鈉溶液,振蕩均勻35 ℃水浴鍋中靜置90 min后在765 nm處測(cè)定吸光度值。作出測(cè)定總多酚含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線,以溶解樣品的溶劑代替樣液執(zhí)行相同的操作獲得的混合液調(diào)零。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=0.0108x+0.0121,R2=0.9987。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用DPS進(jìn)行顯著性差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1生物活性追蹤法提取丁香各極性相

采用生物活性追蹤法對(duì)丁香各極性相進(jìn)行提取,得率如表1所示。正己烷相得率最高,乙酸乙酯相次之,正丁醇相與水相相似。造成各極性相得率不同的原因可能是各極性相中的物質(zhì)在丁香中含量不一。正己烷相的得率遠(yuǎn)高于其余各相的可能原因一是由于丁香中揮發(fā)性油的含量同比與其它各相的物質(zhì)較高[11],而正己烷相中的主要成分正是揮發(fā)性油;二是在提取工藝上,正己烷相是液態(tài),在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)可能還殘留部分有機(jī)溶劑,而其余各相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后經(jīng)過(guò)了冷凍干燥,有機(jī)溶劑去除的較徹底。

表1 生物活性追蹤法提取丁香各極性相的得率

2.2丁香不同極性部位對(duì)LDL弱氧化修飾的抑制效果

2.2.1 對(duì)共軛二烯產(chǎn)生的抑制效果 脂質(zhì)氧化分三個(gè)階段:延遲階段、增殖階段和降解階段[19]。LDL氧化早期,活性氧與PUFA雙鍵發(fā)生奪氫氧化,使雙鍵斷裂形成脂自由基,該自由基自發(fā)進(jìn)行分子重排形成更穩(wěn)定的CD,在230～235 nm有特征吸收。在LDL氧化過(guò)程中,隨著LDL中內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)(如VE等)逐漸消耗,LDL從溫和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的延遲階段過(guò)渡到增殖階段,CD含量先緩慢上升,待內(nèi)源物質(zhì)被消耗后急劇增加、最后減少[2]。丁香有效部位具有抗氧化作用,可抑制LDL氧化修飾[14],因此,本實(shí)驗(yàn)在孵育60 min時(shí)測(cè)定CD產(chǎn)生量來(lái)評(píng)價(jià)丁香不同部位抑制LDL所含脂質(zhì)組分氧化修飾作用。結(jié)果如圖1所示。

圖1 丁香不同極性部位抑制弱氧化中共軛二烯產(chǎn)生

由圖1可看出,孵育60 min后,促氧組CD產(chǎn)生量最多,吸光值達(dá)0.426,比空白組高出0.419。與促氧組相比,濃度12.5 μg/mL丁香不同極性相樣液的 CD產(chǎn)生量極顯著下降(p<0.01),其中正己烷相CD產(chǎn)生量在各相樣液中最低,僅比空白高出0.126。各極性相吸光值由高到低排序?yàn)?水相>正丁醇相>乙酸乙酯相>正己烷相,表明丁香不同極性部位對(duì)LDL弱氧化過(guò)程中CD產(chǎn)生均有極顯著抑制作用(p<0.01),且正己烷相抑制效果最好,強(qiáng)于乙酸乙酯相,僅次于同濃度的陽(yáng)性對(duì)照BHT?？赡艿脑蚴?在LDL內(nèi)源抗氧化劑被消耗后,丁香中大量抗氧化活性成分繼續(xù)阻止LDL被氧化,從而抑制CD產(chǎn)生。而四個(gè)部位抑制效果不同可能是其所含的抗氧化活性物質(zhì)含量不同造成。Moon等[20]人發(fā)現(xiàn)黑藻由于富含多酚類(lèi)物質(zhì)也對(duì)LDL氧化修飾過(guò)程中CD的產(chǎn)生具有抑制效果。

表2 丁香不同極性部位抑制LDL弱氧化中膽固醇降解

注:不同字母表示各樣品之間存在顯著性差異(p<0.05),表3同。

表3 丁香不同極性部位抑制LDL完全氧化中膽固醇降解

2.2.2 對(duì)總膽固醇降解的抑制效果 脂質(zhì)過(guò)氧化作用是氧化致使細(xì)胞損傷的重要分子機(jī)制,脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中會(huì)導(dǎo)致自由基分子重排產(chǎn)生CD,CD致使膽固醇降解[2],測(cè)定總膽固醇含量可衡量丁香對(duì)LDL氧化修飾的抑制效果。為進(jìn)一步探究丁香對(duì)LDL弱氧化抑制作用,對(duì)丁香各極性部位抑制LDL弱氧化修飾過(guò)程中總膽固醇降解進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如表2所示。

由表2可知,在丁香不同極性部位中,正己烷相、乙酸乙酯相及正丁醇相膽固醇含量分別為(87.20±1.14)、(80.18±0.31)、(78.27±0.83) mg/dL,均顯著(p<0.05)高于促氧組(74.03±0.62) mg/dL,均能顯著抑制LDL膽固醇降解,而水相無(wú)抑制效果。正己烷相的抑制效果最強(qiáng),僅次于同濃度的BHT,乙酸乙酯相次之。這可能是由于丁香不同極性部位富含多酚,具有很強(qiáng)的抗氧化活性[13,17],可保護(hù)LDL免受氧化修飾。此外,Hseu等[21]發(fā)現(xiàn)富含多酚的牛樟芝也能抑制LDL膽固醇降解。

2.3丁香不同極性部位對(duì)LDL完全氧化的抑制效果

2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果已證明,除水相外的其它不同極性相對(duì)LDL弱氧化均有一定程度的抑制效果,正己烷相抑制效果最強(qiáng)。為進(jìn)一步研究丁香不同極性部位對(duì)LDL完全氧化修飾的抑制效果，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了相關(guān)測(cè)定，結(jié)果如下(圖2、表3、圖3)。

2.3.1 對(duì)共軛二烯產(chǎn)生的抑制效果 由圖2可看出,氧化體系孵育120 min后,促氧組產(chǎn)生的CD最多,吸光值高達(dá)1.32,比空白組高1.08。與促氧組相比,丁香不同極性相樣液組CD產(chǎn)生量極顯著下降(p<0.01),正己烷相最低、乙酸乙酯相次之,僅比空白高出0.07、0.09,水相最高,與2.2.1結(jié)果類(lèi)似。

圖2 丁香不同極性部位抑制完全氧化中共軛二烯產(chǎn)生效果

2.3.2 對(duì)總膽固醇降解的抑制效果 由表3可知,丁香不同極性部位中,正己烷相和乙酸乙酯相膽固醇含量分別為(82.87±5.08) mg/dL和(68.08±2.38) mg/dL,顯著高于促氧組(63.35±0.51) mg/dL(p<0.05)。正己烷相抑制效果最強(qiáng),并與同濃度陽(yáng)性對(duì)照BHT無(wú)顯著差異,乙酸乙酯相次之。正己烷相和乙酸乙酯相能顯著(p<0.05)抑制LDL膽固醇降解,而其余兩相無(wú)抑制效果。與2.2.2結(jié)果相互印證。

2.3.3 對(duì)脂褐素產(chǎn)生的抑制效果 LDL氧化修飾后期,脂質(zhì)過(guò)氧化物與蛋白、磷脂等反應(yīng)形成復(fù)合產(chǎn)物脂褐素,在Ex350/Em 460處有熒光吸收[4-5],脂褐素含量能反映LDL完全氧化修飾程度。從圖3可看出,正己烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的熒光強(qiáng)度分別59.34、90.78、105.16和105.23,均極顯著低于促氧組(116.59)(p<0.01)。表明丁香不同極性部位對(duì)LDL氧化過(guò)程中脂褐素的產(chǎn)生有不同程度抑制作用,且正己烷相和乙酸乙酯相的抑制作用極為顯著(p<0.01),進(jìn)一步證明丁香正己烷相及乙酸乙酯相能有效抑制LDL完全氧化。王麗麗等[5]發(fā)現(xiàn)紫丁香葉提取物也能抑制脂褐素生成。

圖3 丁香不同極性部位抑制脂褐素生成結(jié)果

2.4丁香各極性相總多酚和總黃酮含量的測(cè)定結(jié)果

黃酮和多酚類(lèi)化合物被認(rèn)為是植物抗氧化活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[17]。

表4 丁香各極性相中總多酚、總黃酮含量

注:相同行不同字母代表極顯著性差異(p<0.01)。

為分析不同極性相對(duì)LDL脂質(zhì)氧化修飾的抑制效果具有差別的原因,對(duì)這些極性相中總黃酮和總多酚含量進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果如表4所示。

從表4可看出,相同濃度的各極性相溶液中總黃酮、總多酚含量均明顯不同(p<0.01),尤其是總多酚含量。正己烷相中總多酚含量分別是乙酸乙酯相的1.87倍、正丁醇的3.43倍和水相的9.9倍?？傸S酮含量由高到低排序依次為正己烷相>乙酸乙酯相>正丁醇相>水相。表明各極性相溶液對(duì)LDL脂質(zhì)氧化修飾抑制效果產(chǎn)生的差異,是由各極性相總多酚及總黃酮含量不同而引起的,含量越高抗氧化性越強(qiáng)。

3 結(jié)論

丁香四個(gè)不同極性部位均能有效抑制LDL脂質(zhì)弱氧化修飾過(guò)程中CD產(chǎn)生、總膽固醇降解,抑制效果從強(qiáng)到弱排列順序依次為:正己烷相>乙酸乙酯相>正丁醇相>水相;丁香四個(gè)不同極性部位均能有效抑制LDL脂質(zhì)完全氧化中修飾過(guò)程中CD產(chǎn)生、總膽固醇降解及脂褐素生成,抑制效果從強(qiáng)到弱排列順序依次為:正己烷相>乙酸乙酯相>正丁醇相>水相;總多酚、總黃酮含量高低是各極性相對(duì)LDL脂質(zhì)氧化修飾抑制效果產(chǎn)生差異的原因,含量越高抑制效果越強(qiáng)。

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Inhibitoryeffectofdifferentfractionsfromcloveonlipidoxidativemodificationinlowdensitylipoprotein

LIULong-xiu1,2,ZHANGXiao-xia1,2,QUWen-juan1,3,LIJia-zhen1,2,XIELi-qin1,HAOShu1,2,JINHong-guang1,2,SHENYong-gen1,4,ZHANGLiang-hui1,2,JIANGShen-hua1,2,3,4,*

(1.School of Pharmacy and Life Science,Jiujiang University,Jiujiang 332000,China;2.Jiujiang Andehe Biotechnology Co.,Ltd,Jiujiang 332000,China;3.School of Food and Biological Engineering,Jiangsu University,Jiangsu Provincal Key Laboratory ofPhysical Processing of Agricultural Products,Zhenjiang 212013,China;4.College of Food Science and Engineering,Jiangxi Agricultural University,Jiangxi Key Laboratory of Natural Products and Functional Foods,Nanchang 330045,China)

To study the inhibitory effect of clove on lipid oxidative modification in LDL.The inhibition of conjugated diene(CD)generated,total cholesterol degradation,and lipofuscin generated were determined by bioassay-guided in the course of minimally oxidation and complete oxidation of LDL. The results showed that the formation of CD and degradation of total cholesterol were significantly inhibited in the different polar parts of clove(p<0.05)during mild oxidation of LDL. The order of inhibitory effect was as follows:n-hexane fraction>ethyl acetate fraction>n-butanol fraction>water fraction. The formation of conjugated diene(CD),degradation of total cholesterol and formation of lipofuscin were significantly inhibited in the different polar parts of clove(p<0.05)during complete oxidation of LDL. The order of inhibition was the same as above. The difference contents of the total polyphenols and total flavonoids results in the difference of the inhibitory effect of the different polar fractions on LDL lipid oxidation. This study provided a reference for the further research and development of functional food that clove inhibits LDL from oxidation .

clove;bioassay-guided;low density lipoprotein(LDL);oxidative modification;different polar fraction

2017-02-23

劉龍秀(1996-)，女，本科，主要從事天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)方面的工作，E-mail：460324755@qq.com。

*

江慎華(1973-)，男，博士，教授，研究方向：食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)，E-mail：jiangshenhua66@163.com。

國(guó)家自然科學(xué)基金(31360371，31560308，31301423，31660104)；江西省科技支撐計(jì)劃(20171BBF60049，20151BBF60026)；江西省教育廳項(xiàng)目(GJJ161081)；江蘇省農(nóng)產(chǎn)品物理加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(JAPP2010-5)；江西省天然產(chǎn)物與功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金；九江學(xué)院人才啟動(dòng)基金；九江學(xué)院教改課題(2015-04)。

TS201.4

A

1002-0306(2017)22-0071-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.22.015