山西省部分牛場(chǎng)牛病毒性腹瀉和牛傳染性鼻氣管炎血清抗體檢測(cè)與分析

李 穎,顧盼盼,梁 睿,寧 艷,孫 杰,雷宇平,馬海利

(1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山西太谷 030801;2. 山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,山西太原 030027)

山西省部分牛場(chǎng)牛病毒性腹瀉和牛傳染性鼻氣管炎血清抗體檢測(cè)與分析

李 穎1,顧盼盼1,梁 睿1,寧 艷2,孫 杰2,雷宇平2,馬海利1

(1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山西太谷 030801;2. 山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,山西太原 030027)

為了解牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和牛傳染性鼻氣管炎病毒(BHV-1)在山西省的感染及分布情況,采用ELISA方法,對(duì)2014-2016年采自山西省11個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的900份牛血清樣品進(jìn)行了BVDV及BHV-1抗體檢測(cè).結(jié)果顯示:采集血清養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV、BHV-1血清抗體陽性率分別為56.57%、40.33%,群陽性率分別為71.21%、59.09%;quot;BVDV+ BHV-1quot;血清抗體陽性率為31.56%,群陽性率為46.97%;大同、朔州、忻州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治和臨汾7個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,大同、忻州、太原、陽泉和臨汾5個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%,而運(yùn)城市的BVDV和BHV-1血清抗體均為陰性.結(jié)果表明,除運(yùn)城市外,山西省其他市均存在BVDV和BHV-1感染的養(yǎng)殖場(chǎng)(戶).

牛病毒性腹瀉;牛傳染性鼻氣管炎;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);抗體;檢測(cè)

牛病毒性腹瀉(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrheavirus,BVDV)引起的一種牛高度接觸性傳染病,以腹瀉、流產(chǎn)、黏膜潰爛等為主要特征[1],1946年首次在美國奶牛中被發(fā)現(xiàn)和報(bào)道,現(xiàn)已廣泛分布于世界各地.隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展、國外品種的引入[2],我國養(yǎng)牛業(yè)較發(fā)達(dá)地區(qū)均存在BVDV感染,且感染率有不斷上升趨勢(shì).

牛傳染性鼻氣管炎(Infective bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛皰疹病毒I型(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)引發(fā)的一種牛接觸性傳染病,以鼻氣管炎、結(jié)膜炎、生殖道炎、腦膜炎、乳房炎等為特征[3],1955年在美國首次被報(bào)道.目前,本病除在澳大利亞、丹麥、芬蘭、挪威、瑞典、瑞士已被根除外[4],在全球其他國家均有不同程度流行,且感染率較高.1980年我國首次從新西蘭進(jìn)口的奶牛中發(fā)現(xiàn)該病[5].隨后血清學(xué)調(diào)查顯示,我國大部分省市的各種牛群中均存在BHV-1感染,且感染率有逐年上升趨勢(shì)[6].

隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的不斷發(fā)展,BVDV和BHV-1感染率不斷增高,且兩種病毒的混合感染率亦在增加.BVDV和BHV-1感染給我國養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失.為了掌握BVD和IBR在山西省的存在、分布及流行情況,利用ELISA方法,對(duì)山西省11個(gè)市的牛血清樣品進(jìn)行了BVD及IBR抗體檢測(cè),從而為山西省制定BVD和IBR防控措施提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢牛血清.2014-2016年在大同、朔州、忻州、呂梁、太原、晉中、陽泉、長(zhǎng)治、晉城、臨汾、運(yùn)城11個(gè)市的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)(戶),每年每市采集2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)(戶),共采集900份牛血清.采血牛均未接種過BVD和IBR疫苗.

1.1.2 ELISA檢測(cè)試劑盒.牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)試劑盒和牛傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒:均購自北京愛德士元亨生物科技有限公司.

1.1.3 主要儀器及設(shè)備.酶標(biāo)儀:購自美國伯騰儀器有限公司;恒溫培養(yǎng)箱:購自哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司;其他器材和試劑:由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供.

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測(cè).按照牛傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒和牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)試劑盒說明書檢測(cè).

1.2.2 結(jié)果判定與標(biāo)準(zhǔn).BVDV血清抗體結(jié)果判定與標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)及0.150時(shí),說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效,計(jì)算S/P值.S/P=(樣品S/Plt;0.20為陰性,0.20≤S/Plt;0.30為可疑,S/P≥0.3為陽性.BHV-1血清抗體結(jié)果判定與標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)≥0.500及阻斷率gt;80%時(shí),說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效,計(jì)算阻斷率.阻斷率樣品A450)阻斷率lt;45%為陰性,45%≤阻斷率lt;55%為可疑,阻斷率≥55%為陽性.

2 結(jié)果

2.1 血清抗體總體檢測(cè)

2014-2016年采集牛血清養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV與BHV-1抗體陽性率分別為56.67%、40.33%,且quot;BVDV+ BHV-1quot;血清抗體均為陽性的占31.56% ;除運(yùn)城市外,其他10個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的牛血清中均有BVDV、BHV-1陽性抗體被檢出,其中大同、朔州、忻州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治和臨汾7個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,大同、忻州、太原、陽泉和臨汾5個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%(表1). 2014-2016年采集牛血清養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV、BHV-1血清抗體群陽性率分別為71.21%、59.09%,且quot;BVDV+ BHV-1quot;血清抗體群陽性率為46.97%(表2).檢測(cè)結(jié)果表明,除運(yùn)城市外,山西省其他市被調(diào)查牛群中均有不同程度的BVDV和BHV-1感染.

2.2 2014年血清抗體檢測(cè)

2014年山西省大同、朔州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治、臨汾和晉城7個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,且大同、長(zhǎng)治、臨汾3個(gè)市的BVDV血清抗體陽性率均為100%,而運(yùn)城市和太原市的BVDV血清抗體為陰性;大同、朔州、陽泉和臨汾4個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%,且臨汾市的quot;BVDV+BHV-1quot;血清抗體陽性率達(dá)100%,而運(yùn)城市和長(zhǎng)治市的BHV-1血清抗體均為陰性(表3).

表1 2014-2016年山西省11個(gè)市牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV與BHV-1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 2014-2016年山西省11個(gè)市牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV與BHV-1血清抗體陽性群統(tǒng)計(jì)

表3 2014年山西省11個(gè)市牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV與BHV-1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 2015年血清抗體檢測(cè)

2015年忻州、太原、陽泉和臨汾4個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,且忻州市的陽性率為100%,而運(yùn)城市的為陰性;忻州、太原和陽泉3個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%,且太原市的陽性率達(dá)100%;忻州市和太原市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的quot;BVDV+BHV-1quot;血清抗體陽性率均大于50%,而大同、晉中、臨汾和運(yùn)城4個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體均為陰性(表4).

表4 2015年山西省11個(gè)市牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV與BHV-1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 2016年血清抗體檢測(cè)

2016年大同、朔州、忻州、陽泉、晉中、呂梁、長(zhǎng)治、臨汾和晉城9個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,且晉中、長(zhǎng)治、臨汾3個(gè)市的陽性率均為100%,而運(yùn)城市的為陰性;大同、忻州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治和臨汾6個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%,且長(zhǎng)治市的陽性率達(dá)100%;忻州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治和臨汾5個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的quot;BVDV+ BHV-1quot;血清抗體陽性率均大于50%,而太原、晉城和運(yùn)城3個(gè)市的BHV-1血清抗體均為陰性(表5).

表5 2016年山西省11個(gè)市牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV與BHV-1血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

近年來,隨著山西省養(yǎng)殖業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和養(yǎng)牛業(yè)不斷發(fā)展,奶牛和黃牛的養(yǎng)殖數(shù)量不斷增加,牛傳染性疾病也在不斷增多,對(duì)山西省養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展構(gòu)成的威脅不斷加大.本次調(diào)查發(fā)現(xiàn),2014-2016年山西省11個(gè)市所調(diào)查養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV和BHV-1血清抗體平均陽性率分別為56.67%和40.33%.該結(jié)果低于山西省之前的報(bào)道.如:2013年張改文等[7]報(bào)道太原市460頭奶牛BVD抗體平均陽性率為63.5%;2010年王永艷等[8]調(diào)查的山西省雁門關(guān)地區(qū)IBR血清抗體平均陽性檢出率為49.60%.但與山西省省周邊省份的報(bào)道結(jié)果差異不明顯.如:1998年邱昌慶等[9]報(bào)道山東、河北和河南等省份牛場(chǎng)BVD血清平均陽性率為46%～65%;2013年童欽等[10]報(bào)道內(nèi)蒙古3個(gè)地區(qū)BVD血清陽性率為58.35%.2011年鄒世穎等[11]調(diào)查的BHV-1血清陽性率為山東省46%、河北省28%、河南省86%、內(nèi)蒙古自治區(qū)58%、新疆自治區(qū)68%、北京市40%.由于每年采集的養(yǎng)殖場(chǎng)數(shù)量及血清樣品數(shù)量有限,也未進(jìn)行采樣設(shè)計(jì),因此檢測(cè)結(jié)果并不能真實(shí)反映該地區(qū)的實(shí)際情況,導(dǎo)致出現(xiàn)與其他報(bào)道結(jié)果的差異.

除運(yùn)城市外,山西省其他10個(gè)市均有BVDV、BHV-1抗體陽性牛和陽性群被檢出.這表明山西省大多數(shù)市存在BVDV和BHV-1感染的養(yǎng)殖場(chǎng)(戶).其中,大同、朔州、忻州、陽泉、晉中、長(zhǎng)治和臨汾7個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均大于50%,大同、忻州、太原、陽泉和臨汾5個(gè)市的BHV-1血清抗體陽性率均大于50%.造成山西省各市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)BVDV和BHV-1感染率差異的主要原因可能有3個(gè)方面:第一,山西省養(yǎng)牛業(yè)大部分為規(guī)?；B(yǎng)殖,且BVDV和BHV-1多呈隱性感染如果有1頭牛被感染,就可能波及整個(gè)牛群.第二,山西省各市的氣候狀況存在差異.氣候環(huán)境和飼養(yǎng)管理水平不同,牛的抗病能力就會(huì)有差異.第三,持續(xù)感染牛(Persistently infected,PI)呈帶毒狀態(tài),會(huì)不斷向外排毒[12].這是造成牛群內(nèi)BVDV和BHV-1難以根除的重要原因.

2014、2015和2016年山西省11個(gè)市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV抗體平均陽性率分別為61.33%、41.00%和67.67%,BHV-1抗體平均陽性率分別為42.67%、31.67%和46.67%,且每年各市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)陽性率的變化趨勢(shì)也不同.這可能與每年的牛血清來源不同有關(guān).雖然每年采血的市區(qū)相同,但采樣牛場(chǎng)有所不同.

每年各市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV血清抗體陽性率均比BHV-1血清抗體陽性率高,且BVDV和 BHV-1血清抗體均為陽性的占31.56%.這說明所調(diào)查養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的BVDV和BHV-1混合或繼發(fā)感染率較高.其原因可能是牛感染BVDV后機(jī)體抵抗力下降,從而引起B(yǎng)HV-1的混合或繼發(fā)感染[13].

4 結(jié)論

綜上所述,山西省大部分市存在BVDV和BHV-1感染的牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶),且不同市養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的感染率也不相同.因此,要保障養(yǎng)牛業(yè)的健康和持續(xù)發(fā)展,需要通過檢疫來防止引進(jìn)隱性感染牛,通過監(jiān)測(cè)來清除持續(xù)感染牛,通過疫苗免疫來降低牛易感性,通過消毒來防止疫病傳播.

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(責(zé)任編輯:朱迪國)

Serum Antibody Detection and Analysis on BVD and IBR in Some Farms of Shanxi Province

Li Ying1,Gu Panpan1,Liang Rui1,Ning Yan2,Sun Jie2,Lei Yuping2,Ma Haili1
(1. College of Animal Science Technology,Shanxi Agricultural University,Taigu,Shanxi 030801;2. Shanxi Animal Disease Prevention and Control Center,Taiyuan,Shanxi 030027)

To investigate the infection and distribution of Bovine viral diarrhea virus(BVDV)and Bovine herpesvirus-1(BHV-1)in Shanxi Province,the antibody of BVDV and BHV-1 was detected by ELISA towards 900 bovine serum samples collected from the large-scaled farms (households)in 11 cities of Shanxi Province from 2014 to 2016. Results showed that the positive rates of serum antibody of BVDV and BHV-1 were 56.57% and 40.33%,the group positive rates were 71.21% and 59.09%,respectively. The positive rates of serum antibody against quot;BVDV+BHV-1quot;was 31.56%,and the positive rate of herd level was 46.97%. The positive percentage of serum antibody against BVDV was over 50% in the farms(households)in 7 cities of Datong,Shuozhou,Xinzhou,Yangquan,Jinzhong,Changzhi and Linfen. The positive percentage of serum antibody against BHV-1 was over 50% in the farms(households)in 5 cities of Datong,Xinzhou,Taiyuan,Yangquan and Linfen,while the serum antibodies against BVDV and BHV-1 were both negative in Yuncheng city. The results showed that there were farms(households)with BVDV and BHV-1 infections in all of the cities of Shanxi Procince,except for Yuncheng City.

BVD;IBR;ELISA;antibody;detection

S851.3

A

1005-944X(2017)12-0015-06

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.12.004

山西省科技攻關(guān)資助項(xiàng)目(20130311028-1)

馬海利