高敏感度酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測分泌蛋白MPB64對于活動性肺結(jié)核診斷的價(jià)值

趙冰 侯萍 黃靜 賀文從 歐喜超 劉東鑫 趙雁林

·論著

高敏感度酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測分泌蛋白
MPB64對于活動性肺結(jié)核診斷的價(jià)值

趙冰 侯萍 黃靜 賀文從 歐喜超 劉東鑫 趙雁林

目的評價(jià)以結(jié)核分枝桿菌(MTB)分泌蛋白MPB64為檢測抗原的高敏感度酶聯(lián)免疫吸附測定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA)用于檢測痰液中MTB的價(jià)值。方法選取97份儲存的疑似肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本，分別進(jìn)行BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)(簡稱“MGIT 960培養(yǎng)”)、MTB/利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)(Gene Xpert MTB/RIF，簡稱“Xpert檢測”)和HI-ELISA檢測，通過與MGIT 960培養(yǎng)比較來評價(jià)HI-ELISA的診斷效能。結(jié)果本研究97份痰標(biāo)本中，MGIT 960培養(yǎng)、HI-ELISA檢測MTB的陽性率分別為36.08%(35/97)、32.99%(32/97)；與MGIT 960培養(yǎng)比較，HI-ELISA的檢測敏感度、特異度、總體符合率分別為88.57%(31/35)、98.39%(61/62)、94.85%(92/97)。在Xpert檢測陽性的66份痰標(biāo)本中，MGIT 960培養(yǎng)、HI-ELISA檢測MTB的陽性率分別為51.51%(34/66)、48.48%(32/66)；與MGIT 960培養(yǎng)相比，HI-ELISA 的檢測敏感度、特異度、總體符合率分別為91.18%(31/34)、96.88%(31/32)、93.93%(62/66)。Xpert檢測MTB為陰性的31份痰標(biāo)本中，僅有1份標(biāo)本的MGIT 960培養(yǎng)陽性而HI-ELISA未能檢測到MTB，其他30份標(biāo)本檢測結(jié)果全部相符，符合率為96.77%(30/31)。結(jié)論HI-ELISA可以特異性檢測MTB活菌，對活動性肺結(jié)核的診斷及治療評價(jià)有很高的應(yīng)用價(jià)值。

分枝桿菌，結(jié)核； 分泌蛋白，MPB64； 酶聯(lián)免疫吸附測定； 敏感性與特異性； 診斷

結(jié)核病(tuberculosis, TB)是一種嚴(yán)重危害人類健康的呼吸道傳染性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道僅2015年全球就有1040萬例新發(fā)肺結(jié)核患者，180萬例因肺結(jié)核死亡[1]。結(jié)核病的發(fā)病率一直呈現(xiàn)上升態(tài)勢，已成為一個(gè)嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問題。快速而準(zhǔn)確地檢測患者體內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌(MTB)，對于結(jié)核病的防控、降低肺結(jié)核的發(fā)病率和死亡率有著重大意義。

目前，臨床診斷結(jié)核病主要依靠痰涂片、抗酸染色鏡檢及液體培養(yǎng)的方法，而上述方法存在敏感度低或耗時(shí)長等缺陷，不利于結(jié)核病的快速診斷和治療[2-4]。MTB分泌蛋白MPB64是結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中致病菌(結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌)所分泌的特異性蛋白，能夠用來區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌[5]。以MPB64為檢測抗原的高敏感度酶聯(lián)免疫吸附測定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay，HI-ELISA)是由TAUNS公司(日本)開發(fā)，無需培養(yǎng)，通過酶循環(huán)反應(yīng)來積累大量的被檢測物質(zhì)硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸 (thio-nicotinamide adenine dinucleotide，Thio-NADH)，最終可以高效檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，診斷結(jié)核感染，對結(jié)核病的快速診斷具有一定的意義。本研究通過對國家參比實(shí)驗(yàn)室儲存的97份疑似肺結(jié)核患者痰標(biāo)本進(jìn)行BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)(簡稱“MGIT 960培養(yǎng)”)、MTB/利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)(GeneXpert MTB/RIF，簡稱“Xpert檢測”)和HI-ELISA實(shí)驗(yàn)，來評價(jià)HI-ELISA方法診斷活動性肺結(jié)核的效能。

材料和方法

一、研究材料

1．標(biāo)本來源：97份儲存痰標(biāo)本來自2015年4月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院就診的部分疑似肺結(jié)核患者，且所有患者均簽署知情同意書。

2. 試劑：用于痰液處理的NaOH和枸櫞酸鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，N-乙酸-L-半胱氨酸(N-acetyl L-cysteine，NALC)購自美國Sigma公司；Xpert檢測試劑盒購自美國Cepheid公司；HI-ELISA試劑盒由日本TAUNS公司贈送。

3.引物：用于菌種鑒定的正向引物5′-GGCCTAACCCTCGGGAGGGAG-3′和反向引物5′-CCCGAGGCATATCGCAGCCTC-3′由北京擎科生物科技公司合成。

二、研究方法

將儲存的所有痰標(biāo)本在室溫下放置至充分融化后取3 ml痰標(biāo)本，然后平均分為3份，進(jìn)行以下3種檢測。

1. MGIT 960培養(yǎng)檢測：MGIT 960培養(yǎng)操作按《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[6]進(jìn)行。將標(biāo)本經(jīng)過NALC-4%NaOH處理后，靜置15 min，然后加入0.067 mol/L pH 6.8的磷酸鹽緩沖液(PBS)行3000×g低溫離心15 min，棄上清。最后將所得菌懸液加入到BACTEC MGIT 960培養(yǎng)管中進(jìn)行培養(yǎng)，孵育42 d，實(shí)時(shí)監(jiān)測并讀取結(jié)果。

2. Xpert檢測：具體實(shí)驗(yàn)操作按照《現(xiàn)代結(jié)核病診斷技術(shù)》[7]進(jìn)行。將Xpert試劑盒配套的處理液加入含有標(biāo)本的離心管中，震蕩后靜置15 min，將處理后樣品由加樣孔緩慢加入到反應(yīng)盒內(nèi)。然后上機(jī)，反應(yīng)2 h后讀取結(jié)果。

3.HI-ELISA檢測：具體實(shí)驗(yàn)操作按照HI-ELISA試劑盒說明書進(jìn)行，檢測實(shí)驗(yàn)的操作程序見圖1。

4.菌種鑒定：采用16S～23S rDNA間隔區(qū)序列分析來鑒定菌株是否為MTB[8]。將MGIT 960培養(yǎng)陽性的菌株離心收集，100 ℃加熱20 min后提取DNA，以提取的細(xì)菌DNA作為模板，按照如下配制50 μl反應(yīng)體系：5 μl 10×PCR緩沖液、200 μmol dNTP、上下游引物(0.2 μmol)各1 μl，1 U HotStarTaq DNA聚合酶(Qiagen)，適量模板DNA，去離子水補(bǔ)齊反應(yīng)體系。將配置好的體系置于PCR儀，擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性1 min，58 ℃復(fù)性1 min，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物送上海生工生物技術(shù)有限公司測序，測序結(jié)果與美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)中的序列進(jìn)行比對，進(jìn)行菌種鑒定。

三、結(jié)果判定

1. MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果判定：判斷標(biāo)準(zhǔn)參考《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[9]。根據(jù)儀器報(bào)告結(jié)果及菌種鑒定結(jié)果來判定。當(dāng)儀器報(bào)告有陽性結(jié)果并且菌種鑒定為MTB，則該標(biāo)本為陽性。當(dāng)?shù)?2 天培養(yǎng)結(jié)果儀器報(bào)告培養(yǎng)管為陰性結(jié)果或報(bào)告為陽性結(jié)果而菌種鑒定不是MTB時(shí)，則該份標(biāo)本為陰性。

圖1 HI-ELISA操作程序

2. Xpert檢測結(jié)果判定：判斷標(biāo)準(zhǔn)參照Xpert MTB/RIF試劑盒說明書[10]。根據(jù)儀器報(bào)告結(jié)果，當(dāng)結(jié)果顯示為MTB檢出(檢出量高、中、低、極低均視為檢出)，則認(rèn)為該份標(biāo)本為陽性；當(dāng)結(jié)果顯示為MTB未檢出，則該份標(biāo)本為陰性。

3. HI-ELISA結(jié)果判定：判斷標(biāo)準(zhǔn)參照HI-ELISA試劑盒說明書。與空白對照相比，待測樣本與空白對照吸光度的差≥0.05A(吸光度值)，即為陽性，否則為陰性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件對結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用四格表的形式計(jì)算敏感度、特異度和符合率。經(jīng)配對卡方檢驗(yàn)(McNemar test)，比較HI-ELISA與MGIT 960培養(yǎng)(金標(biāo)準(zhǔn))MTB陽性檢出率差異。采用Excel 2010繪制Venn Diagram(韋恩圖)。敏感度=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陰性數(shù))×100%；特異度=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陽性數(shù))×100%；陽性預(yù)測值=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陽性數(shù))×100%；陰性預(yù)測值=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陰性數(shù))×100%；陽性似然比=敏感度/(1-特異度)；陰性似然比=(1-敏感度)/特異度；符合率=(真陽性數(shù)+真陰性數(shù))/所有檢測患者例數(shù)。

結(jié) 果

1.MGIT 960培養(yǎng)及菌種鑒定：97份痰標(biāo)本經(jīng)MGIT 960培養(yǎng)，有36份(37.11%)標(biāo)本陽性，將培養(yǎng)陽性菌株提取核酸后進(jìn)行16S～23S rDNA間隔區(qū)序列分析；除1株為非結(jié)核分枝桿菌(NTM)外，其余35株為MTB，陽性檢出率為36.08%(35/97)。

2.HI-ELISA的檢測結(jié)果：97份痰標(biāo)本經(jīng)HI-ELISA 檢測，有32份標(biāo)本為陽性，陽性率為32.99%(32/97)，65份標(biāo)本為陰性。HI-ELISA和MGIT 960培養(yǎng)(金標(biāo)準(zhǔn))檢測MTB的陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.80，P=0.375)。與MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果相比，HI-ELISA的敏感度為88.57%(31/35)，特異度為98.39%(61/62)，符合率達(dá)94.85%(92/97)(表1)。

3.Xpert檢測結(jié)果：經(jīng)Xpert檢測，97份標(biāo)本中有66份標(biāo)本MTB檢測結(jié)果為陽性，根據(jù)Xpert結(jié)果，檢出含有MTB的痰標(biāo)本66份，但僅有34份標(biāo)本培養(yǎng)陽性，陽性檢出率為51.51%(34/66)。在66份陽性標(biāo)本中，經(jīng)HI-ELISA檢測有32份陽性，陽性檢出率為48.48%(32/66)，HI-ELISA和MGIT 960培養(yǎng)(金標(biāo)準(zhǔn))檢測MTB的陽性檢出率差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.25，P=0.625)；與MGIT 960培養(yǎng)相比較，HI-ELISA的敏感度是91.18%(31/34)，特異度是96.88%(31/32)，符合率達(dá)到93.93%(62/66)(表2)。Xpert未檢出MTB的31份標(biāo)本中，僅有1份標(biāo)本MGIT 960培養(yǎng)陽性而HI-ELISA未能檢出MTB，其他30份標(biāo)本檢測結(jié)果全部相符，符合率高達(dá)96.77%(30/31)(表3)。在GeneXpert檢測陰性的31份痰標(biāo)本中，由于四格表2項(xiàng)結(jié)果為0，敏感度、特異度結(jié)果不可信。

4.Xpert和HI-ELISA檢測結(jié)果均為陽性的31例樣本的檢測情況：韋恩圖比較直觀地顯示出Xpert和HI-ELISA共同檢測的31例陽性樣本中，MGIT 960培養(yǎng)也是陽性，詳見圖2。

討 論

自1976年Naussau建立了以ELISA方法檢測結(jié)核病患者血清中抗結(jié)核分枝桿菌抗體的方法以來[11]，ELISA方法在診斷結(jié)核病方面得到了越來越多的應(yīng)用，但是目前諸如結(jié)核分枝桿菌抗體快速免疫色譜檢測法(rapid immunochromatographic assay of TB，ICT-TB)，以及常規(guī)ELISA等方法大多是血清學(xué)檢測，不能直接檢測痰液中MTB抗原，且敏感度

表1 HI-ELISA檢測97份痰標(biāo)本的結(jié)果

注敏感度=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，即a/(a+c)×100%；特異度=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陽性數(shù))×100%，即d/(b+d)×100%；符合率=(真陽性數(shù)+真陰性數(shù))/(真陽性數(shù)+真陰性數(shù)+假陽性數(shù)+假陰性數(shù))，即(a+d)/(a+b+c+d)；陽性預(yù)測值=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陽性數(shù))×100%，即a/(a+b)×100%；陰性預(yù)測值=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，即d/(c+d)×100%；陽性似然比=敏感度/(1-特異度)；陰性似然比=(1-敏感度)/特異度

表2 66例Xpert檢測陽性標(biāo)本的HI-ELISA與MGIT 960培養(yǎng)的檢測結(jié)果

注敏感度=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，即a/(a+c)×100%；特異度=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陽性數(shù))×100%，即d/(b+d)×100%；符合率=(真陽性數(shù)+真陰性數(shù))/(真陽性數(shù)+真陰性數(shù)+假陽性數(shù)+假陰性數(shù))，即(a+d)/(a+b+c+d)；陽性預(yù)測值=真陽性數(shù)/(真陽性數(shù)+假陽性數(shù))×100%，即a/(a+b)×100%；陰性預(yù)測值=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，即d/(c+d)×100%；陽性似然比=敏感度/(1-特異度)；陰性似然比=(1-敏感度)/特異度和特異度均不理想[12]，在臨床檢測中存在一定的局限性。賈文青和劉瑩[13]以及張梅等[14]研究表明，在免疫力低下且并發(fā)結(jié)核性胸膜炎的患者中結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)檢測的敏感度只有79.63%；李偉霞等[15]研究表明，MTB抗體快速免疫色譜檢測法和常規(guī)ELISA檢測法的敏感度分別為51.14%和70.45%，由此可見血清學(xué)檢測方法的敏感度較低。

表3 HI-ELISA檢測與MGIT 960培養(yǎng)在Xpert檢測陰性結(jié)果標(biāo)本中的符合情況

注符合率=(真陽性數(shù)+真陰性數(shù))/(真陽性數(shù)+真陰性數(shù)+假陽性數(shù)+假陰性數(shù))×100%，即 (a+d)/(a+b+c+d)×100%

31a表示67份標(biāo)本中，有31份標(biāo)本僅Gene Xpert檢測結(jié)果為陽性，而HI-ELISA與MGIT 960培養(yǎng)檢測結(jié)果為陰性；1b表示有1份標(biāo)本GeneXpert和HI-ELISA檢測結(jié)果為陽性，MGIT 960培養(yǎng)檢測結(jié)果為陰性；3c表示3份標(biāo)本GeneXpert和MGIT 960培養(yǎng)檢測結(jié)果為陽性，而HI-ELISA檢測結(jié)果為陰性；31d表示31份標(biāo)本以上3種檢測方法檢測結(jié)果均為陽性；0e表示GeneXpert或MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果為陽性的標(biāo)本，其HI-ELISA檢測結(jié)果也為陽性；0f表示HI-ELISA或MGIT 960培養(yǎng)檢測結(jié)果為陽性的標(biāo)本，其GeneXpert檢測結(jié)果也為陽性；1g表示僅1份標(biāo)本MGIT 960培養(yǎng)檢測結(jié)果為陽性，而GeneXpert和HI-ELISA檢測的結(jié)果為陰性圖2 3種檢測方法檢測結(jié)果的韋恩圖

MPB64是MTB早期分泌蛋白的主要成分，由Rv1980c基因編碼，含有228個(gè)氨基酸，是結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌特有的分泌蛋白[16-17]。本研究中采用TAUNS公司自主研發(fā)的高敏感度ELISA試劑盒，以檢測疑似肺結(jié)核患者痰液中MTB分泌的MPB64蛋白為基礎(chǔ)，無需培養(yǎng)，通過高敏感度的酶循環(huán)顯色試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)孔中吸光度值來判斷標(biāo)本中是否存在活的MTB，從而達(dá)到快速診斷活動性肺結(jié)核的目的。但因HI-ELISA為新研制用于快速診斷結(jié)核的試劑盒，并沒有對其進(jìn)行相應(yīng)研究和評估的相關(guān)文獻(xiàn)可供參考。本研究結(jié)果顯示，與MGIT 960培養(yǎng)相比較，HI-ELISA操作簡單、耗時(shí)短，對MTB的檢出率差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.375)，且檢測MTB的敏感度為88.57%(31/35)，特異度為98.39%(61/62)，與MGIT 960培養(yǎng)的總體符合率為94.85%(92/97)，說明HI-ELISA具有快速準(zhǔn)確診斷結(jié)核病的效能；且敏感度明顯高于痰涂片(20%～60%)[18]，分析原因一方面可能與痰涂片抗酸染色鏡檢原理和MTB排出規(guī)律有關(guān)：一般來說，痰液中至少含有5000個(gè)細(xì)菌/ml才得出陽性結(jié)果，同時(shí)MTB屬于間歇性排菌，從而導(dǎo)致痰涂片檢測的敏感度低[19]；另一方面可能受周圍環(huán)境和操作人員水平的影響，導(dǎo)致痰涂片檢測的敏感度明顯低于HI-ELISA。

Xpert檢測是世界衛(wèi)生組織推薦的MTB的分子學(xué)檢測方法。有大量研究表明，Xpert檢測可以非常準(zhǔn)確地高敏感度地檢測出標(biāo)本中是否存在MTB[20]，但Xpert檢測技術(shù)僅能檢測MTB的DNA，不能區(qū)分樣本中所含MTB是死菌還是活菌。本研究引入Xpert檢測方法的主要目的是根據(jù)Xpert檢測及液體培養(yǎng)結(jié)果將樣本分為死菌(Xpert檢測陽性，培養(yǎng)陰性結(jié)果)和活菌(Xpert檢測陽性，培養(yǎng)陽性結(jié)果)兩類，然后采用HI-ELISA檢測兩類樣本，檢測結(jié)果與MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果比較，意在說明HI-ELISA不僅對于不含MTB的樣本呈現(xiàn)陰性結(jié)果，對于含有MTB但為死菌的樣本也會呈現(xiàn)陰性結(jié)果，充分體現(xiàn)了HI-ELISA只可以檢測活的MTB的優(yōu)勢。本研究Xpert檢測出66份痰標(biāo)本為陽性，可認(rèn)為這66份標(biāo)本都含有MTB，但僅有34份標(biāo)本的MGIT 960培養(yǎng)結(jié)果為陽性，提示34份標(biāo)本含有可培養(yǎng)的活菌。32份標(biāo)本培養(yǎng)陰性的原因可能一是樣本中含有死菌或者培養(yǎng)管中的一些物質(zhì)抑制了細(xì)菌的生長，但本研究由于所用的BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)管為同一批次，保證了樣本處理和培養(yǎng)條件完全相同，且觀察時(shí)間均定為42 d，即使細(xì)菌代謝緩慢也足以達(dá)到可檢測的水平，可排除抑菌物質(zhì)的影響；其二是Xpert檢測的下限為131菌落形成單位(CFU)/ml，而MGIT 960培養(yǎng)的檢測下限為10～100 CFU/ml，理論上如果Xpert檢測結(jié)果為陽性，則液體培養(yǎng)的檢測結(jié)果也必為陽性，由此判定32份陰性標(biāo)本中MTB為死菌。在這66份標(biāo)本中HI-ELSIA檢測結(jié)果與MGIT 960培養(yǎng)相比，敏感度、特異度、符合率分別為91.18%(31/34)、96.88%(31/32)、93.93%(62/66)，說明HI-ELISA可以有效地區(qū)分MTB是死菌還是活菌，可有效評價(jià)患者的治療效果。此外有1份痰標(biāo)本MGIT 960培養(yǎng)陽性但菌種鑒定結(jié)果為非結(jié)核分枝桿菌，經(jīng)HI-ELISA檢測結(jié)果為陰性；由于本研究中僅分離到1株非結(jié)核分枝桿菌菌株，對于確定HI-ELISA檢測是否可以區(qū)分非結(jié)核分枝桿菌還是MTB，以及是否對非結(jié)核分枝桿菌具有診斷效果，還需要更大量含有非結(jié)核分枝桿菌的樣本來驗(yàn)證。

總之，基于檢測分泌型蛋白MPB64和酶循環(huán)反應(yīng)的HI-ELISA是一種敏感度能夠與MGIT 960培養(yǎng)法相媲美的快速診斷活動性肺結(jié)核的方法，將HI-ELISA應(yīng)用于肺結(jié)核的臨床檢測，不僅可以對活動性肺結(jié)核的診斷有幫助，更對肺結(jié)核治療方法及其療效的評價(jià)有著重要意義。

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2017-08-02)

(本文編輯：孟莉 薛愛華)

Diagnosticvalueofhigh-sensitivityELISAinactivetuberculosisthroughdetectingthesecretionproteinMPB64

ZHAOBing*,HOUPing,HUANGJing,HEWen-cong,OUXi-chao,LIUDong-xin,ZHAOYan-lin.

*NationalTuberculosisReferenceLaboratory,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China

ZHAOYan-lin,Email:zhaoyanlin@chinatb.org

ObjectiveThe aim of this study was to evaluate the value of high-sensitivity-ELISA test (HI-ELISA) in detectingMycobacteriumtuberculosis(MTB) in sputum, which is based on detecting the secretory protein MPB64.MethodsNinety-seven stored sputum specimens from suspected tuberculosis patients were subjected to cultivation in BACTEC MGIT 960 tubes, Xpert MTB/RIF test and HI-ELISA test, respectively, the results of HI-ELISA test and 960-liquid-culture test were compared to evaluate the diagnostic efficacy of HI-ELISA method.ResultsAmong the 97 sputum specimens collected in this study, the positive rates of detecting MTB of 960-liquid-culture method and HI-ELISA method were 36.08% (35/97) and 32.99% (32/97) respectively. When compared with liquid-culture, the sensitivity of HI-ELISA was 88.57% (31/35), the specificity of HI-ELISA was 98.39% (61/62) and the overall coincidence rate was 94.85% (92/97). Of the 66 positives putum specimens using Xpert MTB/RIF, the positive rate of 960-liquid-culture method and HI-ELISA method in detecting MTB were 51.51% (34/66) and 48.48% (32/66), respectively; furthermore, compared with 960-liquid-culture,the sensitivity of HI-ELISA was 91.18% (31/34), the specificity was 96.88% (31/32) and the coincidence rate was 93.93% (62/66). Among the 31 negative sample stested by Xpert MTB/RIF, MTB was detected in only one sample by 960-liquid-culture method but HI-ELISA method failed to detect it, however, in the other 30 sputum samples, the results of HI-ELISA method were entirely consistent with the results of 960-liquid-culture method and the coincidence rate was 96.77% (30/31).ConclusionHI-ELISA assay was able to detecting viable MTB with high sensitivity and specificity, it was of high evaluate in diagnosis and treatment of active tuberculosis.

Mycobacteriumtuberculosis; Secretory protein, MPB64; Enzyme-linked immunosorbentassay; Sensitivity and specificity; Diagnosis

10.3969/j.issn.1000-6621.2017.12.010

國家科技重大專項(xiàng)(2014ZX10003002)

102206 北京，中國疾病預(yù)防控制中心國家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室(趙冰、歐喜超、趙雁林)；哈爾濱市結(jié)核病防治所檢驗(yàn)科(侯萍)；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師152團(tuán)醫(yī)院(黃靜)；中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所結(jié)核室(賀文從、劉東鑫)

趙雁林，Email：zhaoyanlin@chinatb.org

注：趙冰和侯萍對本研究具有同等貢獻(xiàn)，為并列第一作者