低蛋白質(zhì)日糧補(bǔ)充賴氨酸、蛋氨酸對(duì)離乳期梅花鹿氮代謝的影響

黃健，張鐵濤，鮑坤，楊福合，李光玉，王凱英

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所 特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春130112）

隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，飼養(yǎng)規(guī)模不斷擴(kuò)大，畜牧業(yè)對(duì)環(huán)境的污染已經(jīng)成為繼工業(yè)污染和生活污染之后又一環(huán)境污染的重要源頭。氮排放是畜牧業(yè)環(huán)境污染的主要問(wèn)題，特別是尿素和尿囊素的排放，產(chǎn)生了包括NH3和N2O在內(nèi)的大量有害氣體，這些氣體和CO2成為溫室氣體的主要成分［1－2］，同時(shí)大量的氮排放導(dǎo)致土壤氮轉(zhuǎn)運(yùn)周期加長(zhǎng)，土壤及水體嚴(yán)重富營(yíng)養(yǎng)化［3－4］，要求我們?cè)谔岣邉?dòng)物生產(chǎn)性能的同時(shí)降低氮排放［5］。日糧組成是影響氮排放的重要因素［6－7］，降低日糧粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）水平是目前減少氮排放，尤其是尿氮排放的最主要方式。有研究表明，降低日糧 CP水平后會(huì)降低生產(chǎn)性能［8－10］，但添加蛋氨酸（methionine，Met）和賴氨酸（lysine，Lys）等限制性氨基酸能改善氨基酸平衡，可以維持甚至提高生產(chǎn)性能，提高氮利用率并減少尿氮的排放［5，11］。國(guó)內(nèi)外對(duì)梅花鹿低CP氨基酸平衡理論研究甚少，需要在梅花鹿養(yǎng)殖業(yè)中研究和探索。本試驗(yàn)通過(guò)低CP日糧中添加Lys和Met對(duì)仔鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化代謝、氮平衡及尿嘌呤衍生物（urine purine derivatives，PD）排出量影響的研究，篩選適宜添加水平，為低CP氨基酸平衡日糧技術(shù)在梅花鹿上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取4只、3月齡健康離乳雄性梅花鹿仔鹿，體重（30±0.12）kg（珚X±SD）。采用4×4完全拉丁方設(shè)計(jì)，Ⅰ組為高蛋白質(zhì)對(duì)照組，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為補(bǔ)充Lys和Met的低蛋白質(zhì)試驗(yàn)組。分4個(gè)階段進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，每個(gè)階段14d，預(yù)試期為9d，正試期為5d。

1.2 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

以玉米、豆粕、玉米纖維、酒糟蛋白、玉米胚芽、苜蓿草粉、糖蜜、食鹽、預(yù)混料等按不同比例配制成對(duì)照組日糧（CP 16.28%）和試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧（CP 13.40%），試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧添加Lys和Met配制Lys水平相同、Met水平不同的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組試驗(yàn)日糧。將原料混合均勻后，制成直徑0.4cm，長(zhǎng)度1.2～1.5cm的全混合日糧（TMR）顆粒料，配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1，基礎(chǔ)日糧和試驗(yàn)日糧中Lys和Met含量見表2。試驗(yàn)于2013年9月13日－11月7日在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所茸鹿實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行，試驗(yàn)動(dòng)物在特制代謝籠（長(zhǎng)×寬×高分別為2.0m×1.2m×2.0m）中單籠飼養(yǎng)，每日8：00和16：00兩次定量飼喂，自由飲水。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experiment diets（air－dry basis）

1.3 樣品采集與分析測(cè)定

1.3.1 糞樣采集與測(cè)定 采用全收糞法。連續(xù)收集5d，每天稱重并做記錄，準(zhǔn)確稱取10%糞樣在65℃烘箱中烘干至恒重，混合均勻，粉碎過(guò)0.425mm篩制成樣品。糞樣中的干物質(zhì)（dry matter，DM）、有機(jī)物（organic matter，OM）、粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）、粗脂肪（ether extract，EE）、中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）、酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）、鈣（calcium，Ca）、磷（phosphorus，P）含量，參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)（第2版）》［12］測(cè)定，氨基酸（amino acid，AA）采用日立L8900全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定。

1.3.2 尿樣采集與測(cè)定 采用全收尿法。在桶內(nèi)加入10%的濃硫酸20mL，保證pH＜3，準(zhǔn)確記錄總尿量，每天取總尿量的10%裝于塑料瓶中低溫保存，連續(xù)收集5d，以備尿樣CP測(cè)定。移取20mL尿樣稀釋至100mL制成次級(jí)尿樣，裝入塑料瓶?jī)?nèi)－20℃貯存，參照IAEA［13］分光光度計(jì)法進(jìn)行PD含量測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SAS 9.1.3的ANOVA進(jìn)程進(jìn)行單因素方差分析，用DUNCAN法進(jìn)行多重比較分析差異顯著性，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

表2 基礎(chǔ)與試驗(yàn)日糧中Lys和 Met含量（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Content of Lys and Met in basal diet and test diet（air dry basis） %

2 結(jié)果與分析

2.1 低CP日糧添加Lys、Met對(duì)仔鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

如表3所示，對(duì)照組CP消化率極顯著高于Ⅱ組（P＜0.01），顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組（P＜0.05），而低蛋白日糧添加Lys、Met提高仔鹿CP消化率趨勢(shì)明顯，隨Met添加量增加，Ⅱ組～Ⅳ組CP消化率不斷升高，但差異不顯著（P＞0.05）；處理組EE消化率均高于對(duì)照組，其中Ⅱ組極顯著地高于對(duì)照組（P＜0.01），其余組間差異不顯著（P＞0.05）；DM、OM、Ca、P、NDF、ADF表觀消化率差異不顯著（P＞0.05），Ⅱ組營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率均低于對(duì)照組（NDF除外），Ⅱ～Ⅳ營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率隨著Met水平提高而升高，Ⅳ組OM、NDF、ADF、P表觀消化率均優(yōu)于對(duì)照組。

表3 日糧添加Lys、Met對(duì)仔鹿?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消化代謝的影響Table 3 Effects of supplement Lys and Met in diet on nutrients apparent digestibility of deer %

2.2 低CP日糧添加Lys、Met對(duì)仔鹿氨基酸表觀消化率的影響

如表4所示，對(duì)照組和Ⅳ組Met消化率顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組（P＜0.05），對(duì)照組、Ⅳ組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；組間Lys、Cys消化率差異不顯著（P＞0.05）；其余氨基酸消化率對(duì)照組均顯著高于各試驗(yàn)組（P＜0.05）。各試驗(yàn)組間，與Met代謝相關(guān)的蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酸、胱氨酸4種氨基酸消化率均為Ⅱ組最低，Ⅳ組最高，隨日糧Met水平升高而升高，而酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸消化率隨日糧Met水平升高而降低，其余氨基酸消化率基本一致。

表4 日糧添加Lys、Met對(duì)仔鹿氨基酸消化率的影響Table 4 Effects of supplement Lys and Met in diet on amino acid apparent digestibility of deer %

2.3 低CP日糧中添加Lys、Met對(duì)仔鹿氮平衡的影響

如表5所示，對(duì)照組氮攝入量高于試驗(yàn)組，并且顯著高于Ⅱ組（P＜0.05），各組糞氮排放量差異不顯著（P＞0.05）；對(duì)照組吸收氮顯著高于Ⅱ組、Ⅲ組（P＜0.01）和Ⅳ組（P＜0.05），但對(duì)照組尿氮排放量卻顯著大于各試驗(yàn)組（P＜0.05）；對(duì)照組氮沉積略高于試驗(yàn)組，氮利用率和氮表觀生物學(xué)效價(jià)低于試驗(yàn)組（P＞0.05），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組氮表觀生物學(xué)效價(jià)分別比對(duì)照組高15.50%，15.17%和20.46%；組間氮沉積無(wú)顯著差異（P＞0.05）；氮利用率和表觀生物學(xué)效價(jià)普遍低于各試驗(yàn)組（P＞0.05），試驗(yàn)組間參數(shù)隨Met增長(zhǎng)而升高趨勢(shì)明顯。

表5 日糧中添加Lys、Met對(duì)仔鹿氮平衡的影響Table 5 Effects of supplement Lys and Met in diet on the nitrogen balance of deer

2.4 低CP日糧中添加Lys、Me對(duì)仔鹿尿嘌呤衍生物的影響

如表6所示，對(duì)照組PD總排放量顯著大于Ⅱ組（P＜0.01）和Ⅲ組（P＜0.05），與Ⅳ組差異不顯著（P＞0.05）；尿囊素排放量顯著大于Ⅱ組（P＜0.01）、Ⅲ組和Ⅳ組（P＜0.05），黃嘌呤和次黃嘌呤極顯著高于Ⅱ組（P＜0.01）；Ⅲ組、Ⅳ組黃嘌呤和次黃嘌呤極顯著高于Ⅱ組（P＜0.01），其余各項(xiàng)差異均不顯著，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組尿囊素和總PD排放量隨著Met水平的提高而提高。

表6 日糧中添加Lys、Met對(duì)仔鹿尿嘌呤衍生物的影響Table 6 Effects of supplement Lys and Met in diet on the purine derivatives of deer g/d

3 討論

適宜蛋白質(zhì)水平和氨基酸比例能夠發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)最大消化潛力［14］，營(yíng)養(yǎng)水平最適時(shí)消化率最高，偏離最適營(yíng)養(yǎng)水平就會(huì)降低其消化率，并影響其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用。于麗偉［15］研究表明日糧CP水平16.50%時(shí)仔鹿CP消化率最高，本試驗(yàn)對(duì)照組CP 16.28%與于麗偉試驗(yàn)水平接近。日糧CP水平降到13.40%日糧可降解蛋白水平相應(yīng)降低，直接導(dǎo)致瘤胃微生物活性減弱，瘤胃微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化能力降低，微生物蛋白（MCP，microbial crude protein）合成隨之降低，仔鹿CP消化率顯著降低，Lee等［16］和Russell等［17］同樣表明奶牛、肉牛CP消化率因日糧CP水平降低而顯著降低；DM和OM消化率同樣因日糧CP水平下降而下降，又隨著Met水平升高而升高，與多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率結(jié)果一致；NDF、ADF主要在瘤胃中消化，微生物含量是影響其消化率的關(guān)鍵因子，試驗(yàn)組消化率高于對(duì)照組可能是因?yàn)樘砑拥腖ys、Met為游離氨基酸，能被瘤胃微生物直接利用和瘤胃壁吸收，避免降解為氨的過(guò)程，從而促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，本試驗(yàn)NDF，ADF消化率有一定降低，但差異不顯著，與Lee等［16］和Russell等［17］研究結(jié)果不盡相同，可能是因?yàn)長(zhǎng)ee等［16］和 Russell等［17］是在自由采食條件下進(jìn)行的，蛋白質(zhì)下降導(dǎo)致適口性降低，引起采食量下降，影響了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化，而本試驗(yàn)采用定時(shí)、定量法飼喂，采食量基本未受影響。此外氨基酸作為蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，降低日糧CP水平直接導(dǎo)致氨基酸水平降低，氨基酸缺乏，氨基酸平衡性失當(dāng)，氨基酸消化率降低［18］，Met作為反芻動(dòng)物限制性氨基酸，是瘤胃微生物代謝的重要參與物，瘤胃微生物含有很高的Met水平［19］，日糧Met水平很難滿足瘤胃微生物的需要，影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的瘤胃代謝，日糧添加Met能滿足瘤胃微生物對(duì)Met的需求，平衡瘤胃氨基酸比例，提高瘤胃微生物活性［20］，促進(jìn)瘤胃微生物合成［21］，進(jìn)而提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，本研究多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率均隨日糧Met水平增加而增加，Schwab等［22］研究表明，犢牛日糧中添加Met會(huì)提高CP消化率，王建紅等［23］通過(guò)扣除日糧部分Met研究發(fā)現(xiàn)，扣除部分Met會(huì)降低犢牛常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，與本試驗(yàn)結(jié)果一致，云強(qiáng)等［11］研究認(rèn)為除粗脂肪外其他常規(guī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率隨氨基酸添加量有先增加后降低的趨勢(shì)，出現(xiàn)不同結(jié)果的原因很有可能本試驗(yàn)添加Met量沒(méi)有達(dá)到仔鹿最適Met水平，或者還沒(méi)有超過(guò)仔鹿對(duì)Met的耐受能力；同時(shí)，本試驗(yàn)研究表明試驗(yàn)組日糧中添加Lys與對(duì)照組相同后，獲得與對(duì)照組相似的Lys消化率，添加Met能顯著提高M(jìn)et消化率，與張鐵濤等［24］研究結(jié)果一致，且氨基酸的相互作用會(huì)在體內(nèi)重分配而保證機(jī)體的穩(wěn)定［25］，Met消化率提高會(huì)促進(jìn)體內(nèi)以Met為前體的反應(yīng)產(chǎn)物或中間體（如胱硫醚、谷胱甘肽等）含量增加，胱硫醚在瘤胃中往往需要Met才能合成［26］，是半胱氨酸和絲氨酸的結(jié)合物，日糧中Met增加會(huì)提高胱硫醚合成酶的活性［27］，需要大量的半胱氨酸、絲氨酸參與反應(yīng)，提高半胱氨酸、絲氨酸消化率，甘氨酸合成的中間產(chǎn)物和副產(chǎn)物可以接受蛋氨酸分離的甲基碳［28］，也是組成谷胱甘肽的氨基酸之一，日糧Met水平增加能促進(jìn)谷胱甘肽合成［29］，促進(jìn)甘氨酸代謝，提高甘氨酸消化率。

在采食量相同時(shí)，降低日糧CP水平顯著降低了氮攝入量，且對(duì)照組的CP消化率顯著高于試驗(yàn)組，導(dǎo)致吸收氮顯著高于試驗(yàn)組，糞氮差異不顯著，但動(dòng)物組織合成能力有限，氮沉積無(wú)明顯差異，多余的氮會(huì)從尿液排出，尿氮排放量顯著增加，進(jìn)而提高了試驗(yàn)組氮利用率和氮生物學(xué)效價(jià)，減少了大量的氮排放，有效緩解了環(huán)境污染。Varel等［30］研究發(fā)現(xiàn)奶牛日糧CP從18.4%降低到15.1%，尿氮排放量從35%降低到23%，本研究將仔鹿日糧CP從16.28%降低到13.4%，尿氮排放量45%降低到38%。董全民等［6］認(rèn)為，CP為16.1%的日糧中加入一定氨基酸與擁有18.8%CP日糧的奶牛有相同的生產(chǎn)性能，同時(shí)減少了氮損失，但并不影響尿氮或糞氮的排泄，與本研究結(jié)果相同。本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有添加非蛋白氮，蛋白氮是食入氮的唯一來(lái)源，被瘤胃微生物利用而合成微生物蛋白（MCP），在小腸中降解后被動(dòng)物吸收，并在體內(nèi)代謝最終轉(zhuǎn)化為尿嘌呤衍生物（PD），研究認(rèn)為反芻動(dòng)物尿中PD主要是由MCP轉(zhuǎn)化而來(lái)，只有極少部分轉(zhuǎn)換為體內(nèi)組織，剩余部分隨尿液排出體外［31］，其含量與MCP產(chǎn)量呈高度正相關(guān)，能直接反映MCP的產(chǎn)量［32］，PD也是尿中的主要含氮物質(zhì)之一，對(duì)照組尿囊素和總PD顯著高于試驗(yàn)組也是尿氮變化的間接表現(xiàn)。本試驗(yàn)表明仔鹿日糧添加Met能促進(jìn)尿囊素和總PD排放量增加，間接表明日糧補(bǔ)充Met可促進(jìn)瘤胃MCP產(chǎn)量的增加，White等［33］研究發(fā)現(xiàn)日糧添加Met能促進(jìn)總PD和尿囊素排放，提高M(jìn)CP的合成，燕磊［21］研究同樣表明日糧添加Met能增加瘤胃微生物對(duì)氨氮的利用率，MCP的合成增加、細(xì)菌氮濃度相應(yīng)增加、氨氮的濃度降低，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。同時(shí)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加Met能促進(jìn)仔鹿氮沉積、氮利用率及氮生物學(xué)效價(jià)，與王建紅等［23］、Abe等［34］認(rèn)為在日糧中添加 Met會(huì)促進(jìn)犢牛增重和提高氮沉積，Oke等［35］報(bào)道綿羊的氮沉積與日糧Met水平呈正相關(guān)結(jié)果是相同的。但Schwab等［22］報(bào)道，斷奶犢牛皺胃灌注L－Met的理想劑量約為0.06%，當(dāng)添加到0.12%時(shí)，氮沉積開始下降，而本實(shí)驗(yàn)添加到0.12%時(shí)仍繼續(xù)增加，出現(xiàn)不同結(jié)果的原因可能是Schwab等［22］使用的是L－Met，利用率高于本試驗(yàn)中的DL－Met，并且飼喂氨基酸會(huì)被瘤胃微生物部分降解，其利用率亦有可能低于直接灌注晶體氨基酸的利用效率?？梢娺m當(dāng)降低仔鹿日糧蛋白水平，添加Lys、Met對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用、降低氮排放量是有益的，仔鹿Met需要量有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

（1）仔鹿日糧CP水平從16.28%降低至13.40%會(huì)降低氮沉積，補(bǔ)充Lys、Met后氮沉積和氮利用率升高，氮排放減少、降低環(huán)境污染；（2）仔鹿日糧CP水平從16.28%降低至13.40%會(huì)造成CP、氨基酸消化率下降，補(bǔ)充Lys、Met能有效改善氮平衡，提高多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，促進(jìn)MCP合成；（3）仔鹿日糧CP水平從16.28%降低至13.40%補(bǔ)充0.23%Lys和0.12%Met是可行的。

［1］ Pakro N，Dillon P.Preferential flow，nitrogen transformations and15N balance under urine－affected areas of irrigated and nonirrigated clover－based pastures［J］.Journal of Contaminant Hydrology，1995，20（12）：329－347.

［2］ 張振威，王聰，劉強(qiáng)，等.異丁酸對(duì)西門塔爾牛增重、日糧養(yǎng)分消化和甲烷排放的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2014，23（1）：346－352.

［3］ Hyde B P，Carton O T，Toole P O，etal.A new inventory of ammonia emissions from Irish agriculture［J］.Atmospheric Environment，2003，37（1）：55－62.

［4］ US EPA（Environmental Protection Agency）.Reactive Nitrogen in the United States：An Analysis of Inputs，F(xiàn)lows，Consequences，and Management Options［R］.A Report of the EPA Science Advisory Board（EPA－SAB－11－013）.Washington，DC：EPA，2011.

［5］ Whelan S J，Mulligan F J，F(xiàn)lynn B.Effect of forage source and a supplementary methionine hydroxy analog on nitrogen balance in lactating dairy cows offered a low crude protein diet［J］.Journal of Dairy Science，2011，94（10）：5080－5089.

［6］ 董全民，趙新全，施建軍，等.日糧組成對(duì)牦犢牛消化和能量代謝的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2012，21（3）：281－286.

［7］ 陳曉琳，劉志科，孫娟，等.不同牧草在肉羊瘤胃中的降解特性研究［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2014，23（2）：268－276.

［8］ Broderick G A.Effects of varying dietary protein and energy levels on the production of lactating dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2003，86（4）：1370－1381.

［9］ Blome R M，Drackley J K，McKeith F K，etal.Growth nutrient utilization and body composition of dairy calves fed milk replacers containing different amounts of protein［J］.Journal of Animal Science，2003，81（6）：1641－1655.

［10］ Lee C，Hristov A N，Heyler K S，etal.Effects of dietary protein concentration and coconut oil supplementation on nitrogen utilization and production in dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2011，94（1）：5544－5557.

［11］ 云強(qiáng)，刁其玉，屠焰，等.日糧中賴氨酸和蛋氨酸比對(duì)斷奶犢牛生長(zhǎng)性能和消化代謝的影響［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（1）：133－142.

［12］ 張麗英.飼料分析與飼料質(zhì)量分析檢測(cè)技術(shù)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

［13］ International Atomic Energy Agency.Estimation of Rrumen Microbial Protein Production from Purine Derivatives in Urine［M］.IAEA－TECDOC－945，IAEA，Vienna，1997.

［14］ Hill T M，Bateman H G，Aldrich J M，etal.Optimal concentrations of lysine，methionine，and threonine in milk replacers for calves less than five weeks of age［J］.Journal of Dairy Science，2008，91（6）：2433－2442.

［15］ 于麗偉.斷乳仔鹿的蛋白質(zhì)維持需要及對(duì)蛋白質(zhì)和能量利用的研究［D］.長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

［16］ Lee C，Hristov A N，Heyler K S，etal.Effects of metabolizable protein supply and amino acid supplementation on nitrogen utilization，milk production，and ammonia emissions from manure in dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2012，95（9）：5253－5268.

［17］ Russell J B，O’Connor J D，F(xiàn)ox D G，etal.A net carbohydrate and protein system for evaluating cattle diets：I.Ruminal fermentation［J］.Journal of Animal Science，1992，70（11）：3551－3561.

［18］ Cabrita A R J，Dewhurst R J，Melo D S P，etal.Effects of dietary protein concentration and balance of absorbable amino acids on productive responses of dairy cows fed corn silage－based diets［J］.Journal of Dairy Science，2011，94（9）：4647－4656.

［19］ 王夢(mèng)芝，王洪榮，喻禮懷，等.蛋白質(zhì)源對(duì)山羊瘤胃微生物蛋白AA組成的影響［J］.飼料工業(yè)，2009，30（13）：30－33.

［20］ 李文華，王安，趙慶楓，等.瘤胃添加DL－蛋氨酸對(duì)槐山羊瘤胃消化代謝的影響研究［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2007，34（7）：21－25.

［21］ 燕磊.瘤胃保護(hù)性蛋氨酸對(duì)小尾寒羊氨基酸代謝影響的研究［D］.泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

［22］ Schwab C G，Muis S J，Hylton W E，etal.Response to abomasal infusion of methionine of weaned dairy calves fed acomplete pelleted starter ration based on byproduct feeds［J］.Journal of Dairy Science，1982，65（10）：1950－1961.

［23］ 王建紅，刁其玉，許先查，等.日糧Lys、Met和Thr添加模式對(duì)0～2月齡犢牛生長(zhǎng)性能、消化代謝與血清學(xué)生化指標(biāo)的影響［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（9）：1898－1907.

［24］ 張鐵濤，崔虎，高秀華，等.低蛋白質(zhì)飼糧中添加蛋氨酸對(duì)育成期藍(lán)狐生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25（9）：2036－2043.

［25］ 葉平生，姜雪元，張樹坤，等.高精料對(duì)泌乳期山羊肝臟氨基酸分配與重分配及乳蛋白的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2013，22（6）：182－189.

［26］ Or－Rashid M M，Onodera R，Wadud S.Biosynthesis of methionine from homocysteine，cystathionine and homoserine plus cysteine by mixed rumen microorganisms in vitro［J］.Applied Microbiology and Biotechnology，2001，55（6）：758－764.

［27］ Finkelstein J D，Martin J J.Methionine metabolism in mammals.Adaptation to methionine excess［J］.The Journal of Biological Chemistry，1986，261（5）：1582－1587.

［28］ Mitchell A D，Benevenga N J.Importance of sarcosine formation in methionine methyl carbon oxidation in the rat［J］.Journal of Nutrition，1976，106：1702－1713.

［29］ Benavides M A，Hagen K L，F(xiàn)ang W，etal.Suppression by L－methionine of cell cycle progression in LNCaP and MCF－7 cells but not benign cells［J］.Anticancer Research，2010，30（6）：1881－1885.

［30］ Varel V H，Nienaber J A，F(xiàn)reetly H C.Conservation of nitrogen in cattle feedlot waste with urease inhibitors［J］.Journal of Animal Science，1999，77（5）：1162－1168.

［31］ 陽(yáng)伏林，王虎成，郭旭生，等.用尿中嘌呤衍生物估測(cè)瘤胃微生物蛋白產(chǎn)量的研究進(jìn)展［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2008，17（1）：121－129.

［32］ Chen X B，Mayuszewski W，Kowalczyk J.Determination of allantoin in biological cosmetic and pharmaceutical samples［J］.Journal of AOAC International，1996，79（3）：628－635.

［33］ White C L，Young P，Phillips N，etal.The effect of dietary protein source and protected methionine（Lactet）on wool growth and microbial protein synthesis in Merino wethers［J］.Australian Journal of Agricultural Research，2000，51（2）：173－184.

［34］ Abe M，Iriki T，F(xiàn)unaba M，etal.Limiting amino acids for a corn and soybean meal diet in weaned calves less than three months of age［J］.Journal of Animal Science，1998，76（2）：628－636.

［35］ Oke B O，Loerch S C，Deetz L E.Effects of rumen－protected methionine and lysine on ruminant performance and nutrient metabolism［J］.Journal of Animal Science，1986，62（4）：1101－1112.