miRNA在頂復(fù)門原蟲(chóng)感染中的作用機(jī)制

王臣榮 ， 許瑞勤 ， 王榮軍 ， 張龍現(xiàn)

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院 ， 河南 鄭州 450002)

miRNA在頂復(fù)門原蟲(chóng)感染中的作用機(jī)制

王臣榮 ， 許瑞勤 ， 王榮軍 ， 張龍現(xiàn)

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院 ， 河南 鄭州 450002)

頂復(fù)門原蟲(chóng)是一類專一性的細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，如瘧原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)，嚴(yán)重危害人類和動(dòng)物的健康，而且給全球公共衛(wèi)生和畜牧業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。宿主通過(guò)啟動(dòng)免疫反應(yīng)、凋亡及自噬等一系列細(xì)胞反應(yīng)清除體內(nèi)寄生原蟲(chóng)，而頂復(fù)門原蟲(chóng)也形成了多種機(jī)制逃避宿主的識(shí)別和清除，如干擾宿主一些重要信號(hào)通路、調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞凋亡、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、細(xì)胞周期及脂代謝等。宿主清除胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)和頂復(fù)門原蟲(chóng)逃避機(jī)制的能力主要是通過(guò)改變基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，研究表明，微小RNA(microRNA, miRNA)可以調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA最早是在秀麗隱桿線蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)，隨后越來(lái)越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)。miRNA是一種長(zhǎng)度為18～25個(gè)核苷酸(nt)的非編碼RNA分子，通過(guò)與靶基因mRNA的3′端非編碼區(qū)(3′untranslate region，3′UTR)結(jié)合，在翻譯水平上抑制靶基因的表達(dá)。miRNA廣泛存在于各種細(xì)胞質(zhì)中且參與細(xì)胞的凋亡、炎癥因子釋放、細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)和疾病的發(fā)生發(fā)展等。隨著對(duì)miRNA研究的深入，miRNA被認(rèn)為是宿主-病原體相互作用的關(guān)鍵調(diào)控者。因此本文對(duì)宿主/頂復(fù)門原蟲(chóng)miRNA在頂復(fù)門原蟲(chóng)(重點(diǎn)介紹瘧原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng))感染中的作用機(jī)制做一綜述。

1 宿主miRNA在頂復(fù)門原蟲(chóng)感染中的作用機(jī)制

研究表明，頂復(fù)門原蟲(chóng)(如瘧原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng))感染會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞miRNA的改變[1-3]，然而宿主細(xì)胞miRNA的改變一方面由原蟲(chóng)為了更好的繁殖而引起[4-6]，另一方面是由宿主為了清除胞內(nèi)的原蟲(chóng)引起[1,7-9]，然而宿主miRNA的這些作用機(jī)制尚未完全被揭示，因此本文從宿主miRNA調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)、凋亡反應(yīng)、改變宿主細(xì)胞特性和細(xì)胞周期及靶向蟲(chóng)體mRNA做一討論。

1.1 宿主miRNA調(diào)節(jié)宿主對(duì)頂復(fù)門原蟲(chóng)的免疫反應(yīng) 弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)都是機(jī)會(huì)性致病原蟲(chóng)，瘧原蟲(chóng)雖然不是機(jī)會(huì)性致病原蟲(chóng)，但是機(jī)體免疫對(duì)瘧原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)的清除至關(guān)重要。當(dāng)機(jī)體免疫低下或者缺失時(shí)，弓形蟲(chóng)緩殖子變?yōu)樗僦匙?，即由慢性感染到急性感染，而隱孢子蟲(chóng)會(huì)導(dǎo)致宿主出現(xiàn)致死性水瀉，而且寄生部位可能由小腸擴(kuò)大到膽管及肺部。研究表明，隱孢子蟲(chóng)感染的小腸上皮細(xì)胞分泌CXCL10和IL-18(IFN-γ誘導(dǎo)因子)，而IFN-γ在固有免疫和特異性免疫反應(yīng)中都起著重要的作用。也有研究報(bào)道，小腸上皮細(xì)胞會(huì)分泌IFN-γ，分泌的IFN-γ會(huì)刺激巨噬細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生NO抵抗隱孢子蟲(chóng)的感染。IFN-γ也可以激活NF-κB促進(jìn)TNF-α的轉(zhuǎn)錄。在感染微小隱孢子蟲(chóng)的艾滋病人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了高水平的特異性的IgG/IgA，表明B細(xì)胞產(chǎn)生的特異性抗體在抗隱孢子蟲(chóng)感染中可能不是必需的。綜上，表明機(jī)體的固有免疫和特異免疫對(duì)抗隱孢子蟲(chóng)的感染非常重要。

研究發(fā)現(xiàn)，微小隱孢子蟲(chóng)感染導(dǎo)致人膽管上皮細(xì)胞let-7家族miRNA下調(diào)，引起其靶基因SNAP3、TLR4及SIRT1上調(diào)。微小隱孢子蟲(chóng)感染導(dǎo)致TLR4信號(hào)通路激活，進(jìn)一步激活I(lǐng)KK2，然后使SNAP3磷酸化，而SNAP3磷酸化會(huì)導(dǎo)致含抗菌肽的外泌體釋放，這些外泌體與微小隱孢子蟲(chóng)子孢子結(jié)合降低子孢子的生存能力和感染能力，SIRT1上調(diào)會(huì)抑制NF-κB的激活[8,10-11]，因此let-7家族的下調(diào)在調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞免疫方面具有雙向性。Zhou等[7]發(fā)現(xiàn)，微小隱孢子蟲(chóng)感染導(dǎo)致人膽管上皮細(xì)胞的miR-27b上調(diào)，引起其靶基因?yàn)镵SRP下調(diào)，進(jìn)而增加NO的產(chǎn)生來(lái)抵制隱孢子蟲(chóng)的感染，后又發(fā)現(xiàn)，人膽管上皮細(xì)胞miR-424和miR-503下調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致其靶基因CX3CL1的上調(diào)來(lái)抵抗微小隱孢子蟲(chóng)的感染[12]。Gong等[13]發(fā)現(xiàn)，微小隱孢子蟲(chóng)感染導(dǎo)致人膽管上皮細(xì)胞的miR-221下調(diào)，導(dǎo)致其靶基因ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1)上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)小腸上皮細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞的相互作用。Cannella等[14]發(fā)現(xiàn)，小鼠的腦組織中發(fā)現(xiàn)由弓形蟲(chóng)分泌的ROP16引起miR-146a上調(diào)，而miR-146a會(huì)抑制IFN-γ的產(chǎn)生，進(jìn)而有利于弓形蟲(chóng)的繁殖。Cai等[6]發(fā)現(xiàn)，弓形蟲(chóng)感染導(dǎo)致人巨噬細(xì)胞miR-17-92上調(diào)，而miR-17-92是調(diào)節(jié)Th1型反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控者，其中包括促進(jìn)增殖、抑制凋亡、IFN-γ的產(chǎn)生和抑制T細(xì)胞分化[15]。

綜上，表明宿主miRNA主要通過(guò)直接或間接調(diào)控抗菌分子、細(xì)胞因子、趨化因子、粘附分子和細(xì)胞外泌體等一系列分子來(lái)調(diào)節(jié)宿主對(duì)頂復(fù)門原蟲(chóng)的免疫反應(yīng)，或者有利于宿主清除寄生原蟲(chóng)，或者有利于原蟲(chóng)的繁殖。

1.2 宿主miRNA調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞的凋亡反應(yīng) 研究表明，宿主細(xì)胞凋亡反應(yīng)是抗寄生蟲(chóng)感染的一種經(jīng)典策略，然而頂復(fù)亞門原蟲(chóng)也可以調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞的凋亡，有利于自身的繁殖。通過(guò)微陣列技術(shù)分析微小隱孢子蟲(chóng)和人隱孢子蟲(chóng)感染HCT-8細(xì)胞早期的基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)由NF-κB調(diào)控的基因OPG(骨保護(hù)素)的上調(diào)，OPG阻止TRAIL(腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡配體)的促凋亡機(jī)制，抑制細(xì)胞凋亡有利于隱孢子蟲(chóng)早期的繁殖。Liu等[16]利用微小隱孢子蟲(chóng)感染HCT-8細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞核形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)，發(fā)現(xiàn)微小隱孢子蟲(chóng)感染早期HCT-8細(xì)胞的凋亡被抑制，感染后期促進(jìn)細(xì)胞凋亡，可能前期抑制凋亡有利于微小隱孢子蟲(chóng)的繁殖，后期促進(jìn)細(xì)胞凋亡有利于微小隱孢子蟲(chóng)的釋放。

研究表明，不同感染階段的原蟲(chóng)通過(guò)調(diào)控宿主miRNA間接調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡[6,17-19]。微小隱孢子蟲(chóng)早期感染導(dǎo)致人膽管上皮細(xì)胞miR-513下調(diào)，其靶基因B7-H1上調(diào)，進(jìn)而抑制感染的細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)未感染的細(xì)胞凋亡[17]，這可能是微小隱孢子蟲(chóng)躲避免疫清除的一個(gè)策略。弓形蟲(chóng)感染導(dǎo)致人巨噬細(xì)胞STAT3磷酸化進(jìn)而引起miR-17-92的上調(diào)，導(dǎo)致其靶基因Bim的下調(diào)，進(jìn)而抑制細(xì)胞的凋亡，有利于弓形蟲(chóng)的繁殖[6,18-19]。

1.3 宿主miRNA可能改變宿主細(xì)胞特性及細(xì)胞周期 研究表明，宿主細(xì)胞特性和細(xì)胞周期在頂復(fù)門原蟲(chóng)感染中也起著重要的調(diào)控作用。宿主為抵抗紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng)，正常的紅細(xì)胞突變?yōu)殓牭缎渭t細(xì)胞，第一可以增強(qiáng)單核細(xì)胞的吞噬能力，第二可以導(dǎo)致宿主肌動(dòng)蛋白重構(gòu)。通過(guò)改變紅細(xì)胞的表面特性，如紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng)分泌惡性瘧原蟲(chóng)紅細(xì)胞表面蛋白-1(pfEMP-1)到紅細(xì)胞表面，進(jìn)而導(dǎo)致感染的紅細(xì)胞特異的和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，進(jìn)而導(dǎo)致微循環(huán)局部堵塞導(dǎo)致炎癥及缺氧等一系列病理現(xiàn)象。紅細(xì)胞脫水或細(xì)胞密度的增加和紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng)的入侵有關(guān)。

研究表明，宿主miRNA可能改變宿主細(xì)胞周期。弓形蟲(chóng)感染L6細(xì)胞導(dǎo)致含有miRNA的外泌體釋放，生物信息學(xué)分析這些外泌體miRNA參與細(xì)胞的繁殖和細(xì)胞周期，推測(cè)可能是由于這些外泌體miRNA抑制感染的細(xì)胞繁殖，增強(qiáng)未感染的細(xì)胞處在S期，而處在S期的細(xì)胞更有利于弓形蟲(chóng)的入侵[20]，可能S期的細(xì)胞可以更好地提供弓形蟲(chóng)的合成DNA所需的材料。

1.4 宿主miRNA靶向頂復(fù)門原蟲(chóng)mRNA 研究表明，宿主miRNA可以靶向病毒mRNA。宿主細(xì)胞miR-323，miR-491和miR-654能靶向A型流感病毒PB1基因進(jìn)而抑制H1N1流感病毒在MDCK細(xì)胞中的復(fù)制。let-7c可靶向A型流感病毒M基因，進(jìn)而抑制流感病毒在A549細(xì)胞內(nèi)的增殖。

受到宿主miRNA可以靶向病毒的mRNA的啟示，宿主miRNA或許可以靶向頂復(fù)門原蟲(chóng)的mRNA，進(jìn)而抑制頂復(fù)門原蟲(chóng)的繁殖。瘧原蟲(chóng)感染致紅細(xì)胞let-7i、miR-451及miR-223上調(diào)，進(jìn)而靶向抑制瘧原蟲(chóng)PKA-R的表達(dá)，進(jìn)而來(lái)抵抗瘧原蟲(chóng)的感染[9]，這也說(shuō)明了宿主細(xì)胞內(nèi)的miRNA來(lái)源不局限于細(xì)胞核。病毒和頂復(fù)門原蟲(chóng)的入侵過(guò)程不一樣，病毒將核酸注入細(xì)胞內(nèi)，因此宿主細(xì)胞miRNA可以很容易靶向病毒的mRNA，而頂復(fù)門原蟲(chóng)會(huì)形成納蟲(chóng)空泡并且原蟲(chóng)以二分裂方式繁殖，因此宿主miRNA進(jìn)入頂復(fù)門原蟲(chóng)子孢子中非常困難，或許外泌體非編碼RNA比較容易。因此須進(jìn)一步驗(yàn)證宿主miRNA是否可以靶向頂復(fù)門原蟲(chóng)mRNA。

除上述作用機(jī)制外，宿主miRNA可能參與宿主細(xì)胞/頂復(fù)門原蟲(chóng)的自噬過(guò)程。研究表明，弓形蟲(chóng)和瘧原蟲(chóng)體內(nèi)存在自噬現(xiàn)象，當(dāng)子孢子成功入侵宿主細(xì)胞后，不再需要參與子孢子粘附和入侵的細(xì)胞器，如微線體和棒狀體，因此蟲(chóng)體會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞自噬途徑清除這些細(xì)胞器，以便獲取的能量更多的用于裂殖生殖。非頂復(fù)門利什曼原蟲(chóng)感染引起宿主細(xì)胞miRNA表達(dá)譜改變，而一些miRNA調(diào)控宿主細(xì)胞抗利什曼原蟲(chóng)感染的自噬過(guò)程[21-22]。宿主細(xì)胞miRNA是否也可以介導(dǎo)細(xì)胞抗頂復(fù)門原蟲(chóng)感染的自噬過(guò)程，需要進(jìn)一步研究。

2 頂復(fù)門原蟲(chóng)miRNA在頂復(fù)門原蟲(chóng)感染中的作用機(jī)制

研究表明，瘧原蟲(chóng)自身基因組中不含miRNA，而且缺乏Dicer和Argonaute核心酶[23]。隱孢子蟲(chóng)全基因組分析無(wú)編碼Dicer和Argonaute蛋白的序列，也無(wú)發(fā)現(xiàn)同系物[24]，即隱孢子蟲(chóng)中無(wú)產(chǎn)生miRNA所必須的酶，因此隱孢子蟲(chóng)體不表達(dá)miRNA，而國(guó)內(nèi)研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)了微小隱孢子蟲(chóng)miRNA[25-26]，因此文獻(xiàn)報(bào)道微小隱孢子蟲(chóng)表達(dá)miRNA值得商榷。弓形蟲(chóng)體內(nèi)檢測(cè)到miRNA[27-29]。

研究表明，頂復(fù)門原蟲(chóng)miRNA靶向宿主細(xì)胞mRNA。病毒miRNA也可以靶向宿主mRNA，如HCMV miR-UL112可能靶向MICB，導(dǎo)致MICB特異性下調(diào)最終導(dǎo)致NK細(xì)胞的殺傷作用下降。受到病毒的啟示，是否弓形蟲(chóng)miRNA也可以靶向宿主mRNA？Sa?ar等[30]利用生物信息學(xué)分析弓形蟲(chóng)miRNA很有可能進(jìn)入宿主細(xì)胞并調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。因此頂復(fù)原蟲(chóng)miRNA直接或間接影響宿主基因的表達(dá)還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

3 小結(jié)與展望

綜上，頂復(fù)門原蟲(chóng)感染會(huì)引起宿主miRNA改變，而這些改變的miRNA并不完全是由頂復(fù)門原蟲(chóng)特異引起的；宿主miRNA的改變可以調(diào)控宿主對(duì)頂復(fù)門原蟲(chóng)的免疫反應(yīng)、凋亡反應(yīng)、細(xì)胞周期及頂復(fù)門原蟲(chóng)基因，而頂復(fù)門原蟲(chóng)miRNA也可以調(diào)控宿主基因。在miRNA水平上，國(guó)外關(guān)于頂復(fù)門原蟲(chóng)尤其為瘧原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)與宿主之間相互作用機(jī)制的研究并不多，并且主要是關(guān)于miRNA對(duì)宿主免疫反應(yīng)的研究，而在miRNA水平上，國(guó)內(nèi)對(duì)頂復(fù)門原蟲(chóng)-宿主相互作用機(jī)制的研究更少，并且主要是頂復(fù)門原蟲(chóng)感染對(duì)宿主miRNA的影響[2,6,18,25-26,31]和不同基因型/不同生殖階段頂復(fù)門原蟲(chóng)miRNA的改變[32-33]，只是初步研究。

目前關(guān)于研究宿主/頂復(fù)門原蟲(chóng)非編碼RNA的研究存在著一些問(wèn)題，(1)哪些宿主細(xì)胞非編碼RNA是由特定寄生蟲(chóng)引起的？(2)同一屬不同種原蟲(chóng)甚至同一種不同亞型的原蟲(chóng)導(dǎo)致宿主非編碼RNA表達(dá)譜是否完全一樣？(3)頂復(fù)門感染不同宿主細(xì)胞引起的宿主/頂復(fù)門原蟲(chóng)非編碼RNA的變化是否完全不一樣？(4)不同感染階段對(duì)宿主/頂復(fù)門原蟲(chóng)非編碼RNA的影響，不同感染劑量對(duì)宿主非編碼RNA的影響的研究太少；(5)過(guò)多的關(guān)注宿主非編碼RNA引起的下游反應(yīng)，而是什么原因造成宿主非編碼RNA的改變知之甚少，可能由于頂復(fù)門原蟲(chóng)分泌的蛋白造成，也可能宿主細(xì)胞通過(guò)模式識(shí)別受體，如TLR的識(shí)別引起宿主非編碼RNA的改變；(6)其他非編碼RNA，如lncRNA和circRNA，及l(fā)ncRNA和circRNA與miRNA的相互關(guān)系的研究太少；(7)目前大多數(shù)研究宿主細(xì)胞-頂復(fù)門原蟲(chóng)相互作用機(jī)制都是通過(guò)體外試驗(yàn)，不能真正的表現(xiàn)機(jī)體內(nèi)宿主細(xì)胞-頂復(fù)門原蟲(chóng)相互作用機(jī)制。

相信隨著對(duì)頂復(fù)門原蟲(chóng)及感染宿主細(xì)胞miRNA研究的不斷深入，我們可以更清楚哪些miRNA是特異的頂復(fù)門原蟲(chóng)引起的，為頂復(fù)門原蟲(chóng)病提供診斷標(biāo)記；哪些miRNA有利于頂復(fù)門原蟲(chóng)的入侵；哪些miRNA有利于宿主清除頂復(fù)門原蟲(chóng)；哪些miRNA是平衡頂復(fù)門原蟲(chóng)寄生與宿主細(xì)胞抗寄生，為研發(fā)抗頂復(fù)門原蟲(chóng)藥物及疫苗提供新靶標(biāo)。

[1] Zhou R, Hu G, Liu J,etal. NF-kappaB p65-Dependent Transactivation of miRNA Genes followingCryptosporidiumparvumInfection Stimulates Epithelial Cell Immune Responses[J]. Plos Pathogens, 2009, 5(12): 12 651-12 655.

[2] 金洪濤, 商立民, 劉全. 弓形蟲(chóng)感染鼠脾細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)分析[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2012, 32(2): 252-257.

[4] Hu G, Zhou R, Liu J,etal. MicroRNA-98 and let-7 Regulate Expression of Suppressor of Cytokine Signaling 4 in Biliary Epithelial Cells in Response toCryptosporidiumparvumInfection[J]. Journal of Infectious Diseases, 2010, 202(1): 125-135.

[5] Kim M J, Jung B K, Cho J,etal. Exosomes Secreted byToxoplasmagondii-Infected L6 Cells: Their Effects on Host Cell Proliferation and Cell Cycle Changes[J]. Korean J Parasitol, 2016, 54(2): 147-154.

[6] Cai Y, Chen H, Jin L,etal. STAT3-dependent transactivation of miRNA genes followingToxoplasmagondiiinfection in macrophage[J]. Parasit Vectors, 2013, 6: 356.

[7] Zhou R, Gong A Y, Alex N,etal. miR-27b Targets KSRP to Coordinate TLR4-MediatedEpithelial Defense againstCryptosporidiumparvumInfection[J]. Plos Pathogens, 2012, 8(5): e1002702.

[8] Hu G, Gong A Y, Amanda L,etal. Release of Luminal Exosomes Contributes to TLR4-Mediated Epithelial Antimicrobial Defense[J]. Plos Pathogens, 2013, 9(4): 259-263.

[9] LaMonte G, Philip N, Reardon J,etal. Translocation of Sickle Cell Erythrocyte MicroRNAs intoPlasmodiumfalciparumInhibits Parasite Translation and Contributes to Malaria Resistance[J]. Cell Host Microbe, 2012, 12(2): 187-199.

[10] Chen X M, Splinter P L, O′Hara S P,etal. Cellular Micro-RNA, let-7i, Regulates Toll-like Receptor 4 Expression and Contributes to Cholangiocyte Immune Responses againstCryptosporidiumparvumInfection[J]. J Biol Chem, 2007, 282(39): 28 929-28 938.

[11] Xie H, Lei N, Gong A Y,etal.Cryptosporidiumparvuminduces SIRT1 expression in host epithelial cells through downregulating let-7i[J]. Hum Immunol, 2014, 75(8): 760-765.

[12] Zhou R, Gong A Y, Chen D,etal. Histone Deacetylases and NF-kB Signaling Coordinate Expression of CX3CL1 in Epithelial Cells in Response to Microbial Challenge by Suppressing miR-424 and miR-503[J]. PLoS One, 2013, 8(5): e65153.

[13] Gong A Y, Hu G, Zhou R,etal. MicroRNA-221 controls expression of intercellular adhesion molecule-1 in epithelial cells in response toCryptosporidiumparvuminfection[J]. Int J Parasitol, 2011, 41(3-4): 397-403.

[14] Cannella D, Brenier-Pinchart M P, Braun L,etal. miR-146a and miR-155 Delineate a MicroRNA Fingerprint Associated with Toxoplasma Persistence in the Host Brain[J]. Cell Rep, 2014, 6(5): 928-937.

[15] Jiang S, Li C, Olive V,etal. Molecular dissection of the miR-17-92 cluster′s critical dual roles in promoting Th1 responses and preventing inducible Treg differentiation[J]. Blood, 2011, 118(20): 5 487-5 497.

[16] Liu J, Deng M, Lancto C A,etal. Biphasic Modulation of Apoptotic Pathways inCryptosporidiumparvumInfected Human Intestinal Epithelial Cells[J]. Infect Immun, 2009, 77(2): 837-849.

[17] Gong A Y, Zhou R, Hu G,etal.Cryptosporidiumparvuminduces B7-H1 expression in cholangiocytes by down-regulating microRNA-513[J]. J Infect Dis, 2010, 201(1): 160-169.

[18] Cai Y, Chen H, Mo X,etal.Toxoplasmagondiiinhibits apoptosis via a novel STAT3-miR-17-92-Bim pathway in macrophages[J]. Cell Signal, 2014, 26(6): 1 204-1 212.

[19] Xiao C, Srinivasan L, Calado D P,etal. Lymphoproliferative disease and autoimmunity in mice with increased miR-17-92 expression in lymphocytes[J]. Nat Immunol, 2008, 9(4): 405-414.

[20] Kim M J, Jung B K, Cho J,etal. Exosomes Secreted byToxoplasmagondii-Infected L6 Cells: Their Effects on Host Cell Proliferation and Cell Cycle Changes[J]. Korean J Parasitol, 2016, 54(2): 147-154.

[21] Frank B, Marcu A, de Oliveira,etal. Autophagic digestion of Leishmania major by host macrophages is associated with differential expression of BNIP3, CTSE, and the miRNAs miR-101c, miR-129, and miR-210[J]. Parasit Vectors, 2015, 8: 404.

[22] Singh A K, Pandey R K, Shaha C,etal. MicroRNA expression profiling of Leishmania donovani-infected host cells uncovers the regulatory role of MIR30A-3p in host autophagy[J]. Autophagy, 2016, 12(10): 1 817-1 831.

[23] Xue X, Zhang Q, Huang Y,etal. No miRNA were found in Plasmodium and the ones identified in erythrocytes could not be correlated with infection[J]. Malar J, 2008, 7:47.

[24] Militello K T, Refour P, Comeaux C A,etal. Antisense RNA and RNAi in protozoan parasites: working hard or hardly working?[J]. Mol Biochem Parasitol, 2008, 157(2): 117-126.

[25] 呼高偉, 程天印, 米榮升, 等. 微小隱孢子蟲(chóng)miR-2980真核表達(dá)載體的構(gòu)建及初步鑒定 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(13): 7 739-7 741.

[26] 陳兆國(guó). 上海地區(qū)動(dòng)物隱孢子蟲(chóng)分子流行病學(xué)調(diào)查及微小隱孢子蟲(chóng)miRNA的初步鑒定[D]. 上海: 上海獸醫(yī)研究所, 2011..

[27] Al Riyahi A, Al-Anouti F, Al-Rayes M,etal. Single argonaute protein fromToxoplasmagondiiis involved in the double-stranded RNA induced gene silencing[J]. Int J Parasitol, 2006, 36(9): 1 003-1 014.

[28] Ananvoranich S, A l Rayes M, A l Riyahi A,etal. RNA silencing of glycolysis pathway inToxoplasmagondii[J]. J Eukaryot Microbiol, 2006, 53 Suppl 1: S162-S163.

[29] Wang J, Liu X, Jia B,etal. A comparative study of small RNAs inToxoplasmagondiiof distinct genotypes[J]. Parasit Vectors, 2012, 5: 186.

[31] 劉剛. 犬新孢子蟲(chóng)速殖子microRNA的鑒定與分析[D]. 吉林: 吉林大學(xué), 2016.

[32] 姚云英. 研究Prugniaud株弓形蟲(chóng)速殖子和緩殖子中microRNA的表達(dá)[D]. 廣州: 南方醫(yī)科大學(xué), 2013.

[33] Wang J, Liu X, Jia B,etal. A comparative study of small RNAs inToxoplasmagondiiof distinct genotypes[J]. Parasit Vectors, 2012, 5: 186.

S855.9+9

A

0529-6005(2017)10-0073-04

2017-05-14.

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31672548)和重點(diǎn)項(xiàng)目(30600603)

王臣榮(1985-)，男，碩士生，主要從事人獸共患寄生蟲(chóng)學(xué)研究，E-mail: 1203431811@qq.com

張龍現(xiàn)，E-mail：zhanglx8999@henau.edu.cn