• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    豬源沙門菌流行病學(xué)調(diào)查與耐藥性分析

    2017-12-01 02:33:01焦連國楊貴燕蘇金輝朱要宏趙亞榮王安如王九峰
    中國獸醫(yī)雜志 2017年10期
    關(guān)鍵詞:豬源亞種沙門

    焦連國 , 楊貴燕 , 蘇金輝 , 朱要宏 , 趙亞榮 , 王安如 , 王九峰

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 , 北京 海淀 100193 ; 2.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心 ,北京 海淀 100195 ; 3.飼用微生物工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 , 北京 海淀 100192)

    豬源沙門菌流行病學(xué)調(diào)查與耐藥性分析

    焦連國1, 楊貴燕1, 蘇金輝1, 朱要宏1, 趙亞榮2, 王安如3, 王九峰1

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 , 北京 海淀 100193 ; 2.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心 ,北京 海淀 100195 ; 3.飼用微生物工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 , 北京 海淀 100192)

    沙門菌作為常見的食源性病原菌之一,同時(shí)是引起斷奶仔豬腹瀉的重要病原菌之一,我國每年因沙門菌感染所引起的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。沙門菌感染通常會導(dǎo)致豬副傷寒,主要特征是嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾病,并且可能會導(dǎo)致腸炎或腹瀉性疾病。本研究通過收集全國范圍內(nèi)仔豬腹瀉樣品,對沙門菌進(jìn)行分離鑒定,了解規(guī)?;i場沙門菌流行情況,同時(shí)對沙門菌抗生素敏感性進(jìn)行分析。從我國16個(gè)省份,84個(gè)豬場,571份樣品中分離得到的128株沙門菌中,發(fā)現(xiàn)最常見的血清型是鼠傷寒沙門菌,其次是德爾卑沙門菌、倫敦沙門菌、嬰兒沙門菌、韋太夫雷登沙門菌和阿貢納沙門菌。這些沙門菌的耐藥情況嚴(yán)重,尤其是復(fù)方新諾明,其耐藥率高達(dá)100%。

    沙門菌 ; 分離鑒定 ; 流行率 ; 耐藥性 ; 豬

    沙門菌是人和動(dòng)物常見的重要病原菌之一,目前呈全球性的分布。該菌寄居在人和動(dòng)物腸道內(nèi),是我國常見的細(xì)菌性人獸共患病。沙門菌可分為兩個(gè)種:腸道沙門菌和邦戈沙門菌;腸道沙門菌又可分為6個(gè)亞種:腸道亞種、薩拉姆亞種、雙亞利桑那亞種、亞利桑那亞種、豪頓亞種和英迪加亞種。亞種可以進(jìn)一步分血清型,它是基于體細(xì)胞(O)和鞭毛(H)抗原的存在而彼此分化。

    沙門菌病是豬最嚴(yán)重的腸道疾病之一,腸道沙門菌感染在育肥豬和斷奶仔豬的流行率比較高,鼠傷寒沙門菌是最常見的血清型之一[1]。各個(gè)年齡段的豬都可感染腸道沙門菌,但由于仔豬未成熟的腸道功能,并發(fā)其他病原菌以及周圍環(huán)境的改變,比較容易感染沙門菌,尤其是1~4月齡斷奶仔豬。沙門菌病是豬場提高仔豬存活率而重點(diǎn)防范的疫病之一。近幾年,我國規(guī)?;i場發(fā)展迅猛,養(yǎng)殖呈現(xiàn)集約化與規(guī)?;?,這對豬場沙門菌病的防控提出了更高要求,為更好防控我國豬場沙門菌病,迫切需要掌握沙門菌在豬場的流行狀況及藥物的耐藥信息,為此我們進(jìn)行了下面的研究工作。

    1 材料與方法

    1.1 沙門菌分離及初步鑒定 稱取樣品10 g稀釋于100 mL緩沖蛋白胨水(BPW)培養(yǎng)基中,在搖床中增菌18 h(37 ℃,80 r/min)。吸取300 μL前增菌液分3個(gè)位置滴加于改良MSRV半固體選擇性培養(yǎng)基中,42 ℃± 1℃培養(yǎng)18~24 h進(jìn)行選擇性增菌。用接種環(huán)從改良MSRV半固體培養(yǎng)基中灰白色區(qū)域周圍挑出一環(huán),三區(qū)劃線于XLT4培養(yǎng)基,36 ℃± 1 ℃培養(yǎng)18~24 h。XLT4平板上沙門菌菌落中間為黑色,周圍有透明暈環(huán)。

    1.2 沙門菌疑似菌落DNA提取 挑取疑似菌落于XLT4瓊脂平板上三區(qū)劃線純化3-4代后,挑取單菌落混勻于胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)中,37 ℃搖床中培養(yǎng)12 h。采用TIANGEN公司的細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(TIANamp Bacteria DNA Kit) 進(jìn)行沙門菌DNA提取,按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

    1.3 PCR根據(jù)參考文獻(xiàn)設(shè)計(jì)沙門菌的stn基因核苷酸序列為引物,見表1;本研究所使用PCR反應(yīng)體系及循環(huán)設(shè)置見表2、表3。

    表1 stn基因引物合成序列

    表2 PCR反應(yīng)體系

    表3 PCR反應(yīng)循環(huán)設(shè)置

    1.4 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳 配置1%瓊脂凝膠,用微波爐高火加熱煮沸讓瓊脂溶解,取出待其溫度降至55 ℃左右時(shí),加入核酸染料EB(5 μL/100 mL),混勻后倒板待其凝固后使用。每孔加入6 μL PCR產(chǎn)物。連接電源后,進(jìn)行瓊脂凝膠電泳 30 min。使用Alpha Imager 2000紫外凝膠成像儀進(jìn)行顯影。

    1.5 生化鑒定 采用法國梅里埃公司的腸桿菌和其他革蘭陰性桿菌鑒定試劑盒(API-20E) 進(jìn)行沙門菌生化鑒定,按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

    1.6 血清型鑒定 本次試驗(yàn)使用的是購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司沙門菌屬診斷血清試劑盒,參考GB 4789.4—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)—沙門菌檢驗(yàn)》標(biāo)準(zhǔn),采用玻片凝集法進(jìn)行鑒定。

    1.7 耐藥性分析 采用美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推薦的肉湯法對得到的沙門菌分離株進(jìn)行耐藥性檢測,共選用18種抗菌藥物,藥物選取原則為文獻(xiàn)中報(bào)道較多,在我國應(yīng)用也較普遍且CLSI所推薦的藥物。

    2 結(jié)果

    2.1 沙門菌分離結(jié)果 本次研究針對全國范圍內(nèi)16個(gè)省份84家豬場腸內(nèi)容物、糞便進(jìn)行采集,共采集571份樣品,經(jīng)過分離鑒定,共有66份陽性樣本,分離沙門菌128株,沙門菌分離陽性率為11.56%。

    2.2 選擇性培養(yǎng)基鑒定結(jié)果 XLT4培養(yǎng)基可以抑制非沙門菌的生長,提供肉眼可見的疑似沙門菌純菌落的識別。在XLT4瓊脂平板上菌落為中間黑色,周圍為透明暈環(huán)。見圖1。

    圖1 沙門菌在XLT4瓊脂平板的生長情況

    2.3 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果 將疑似沙門菌DNA樣品通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,隨后將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂凝膠電泳,通過紫外凝膠成像儀顯示結(jié)果。結(jié)果如圖2。

    圖2 沙門菌瓊脂凝膠電泳圖

    2.4 沙門菌生化鑒定結(jié)果 參照API-20生化試劑條操作說明書和判定標(biāo)準(zhǔn)對沙門菌分離株進(jìn)行生化鑒定。經(jīng)鑒定,128株疑似沙門菌均為沙門菌屬。整體來說生化譜可以分為3種:6 7 0 4 7 5 2、6 7 0 4 5 5 2和7 5 0 4 5 1 2。將所得的生化譜結(jié)果用APIWEB軟件進(jìn)行比對,3種生化譜結(jié)果并不能直接得出對應(yīng)的沙門菌菌種名稱,需配合血清型鑒定。結(jié)果如中插彩版圖3。

    2.5 血清型鑒定結(jié)果 本試驗(yàn)所分離的128株沙門菌經(jīng)血清型鑒定后有6種不同的血清型。數(shù)量最多的為鼠傷寒沙門菌,其次是德爾卑沙門菌、倫敦沙門菌、嬰兒沙門菌、韋太夫雷登沙門菌和阿貢納沙門菌。鼠傷寒沙門菌廣泛分布于各個(gè)省份,并且本次分離的鼠傷寒沙門菌有兩種血清型:1,4,[5],12∶i∶1,2和1,4,[5],12∶i∶-,而且鼠傷寒1,4,[5],12∶i∶-占絕大多數(shù)。結(jié)果如表4、表5。

    表4 各省份沙門菌血清型鑒定結(jié)果

    表5 沙門菌各血清型統(tǒng)計(jì)結(jié)果

    2.6 耐藥性分析結(jié)果 本試驗(yàn)中所用質(zhì)量控制菌株-大腸桿菌ATCC 25922對所選18種藥物的最小抑菌濃度均處于質(zhì)量控制允許范圍之內(nèi),結(jié)果真實(shí)可信。沙門菌的耐藥性結(jié)果具體見表6。總體來說,沙門菌的耐藥情況還是比較嚴(yán)重的,尤其是復(fù)方新諾明,其耐藥率高達(dá)100%。另外,氨芐西林、四環(huán)素、氯霉素和氟苯尼考的耐藥率也都在60%以上。幸運(yùn)的是,沙門菌分離株對阿米卡星都是敏感的。

    表6 沙門菌耐藥性檢測結(jié)果

    3 討論

    本試驗(yàn)共采集到全國16個(gè)省份,84家養(yǎng)殖場的571份樣本,其中陽性樣本66份,陽性率為11.56%,主要分布在河北、山東、湖南、湖北等省份。豬源沙門菌的流行率與其他研究結(jié)果相一致,山東省2009年豬源沙門菌分離率是10%[2],歐盟豬源沙門菌分離率是6.3%[3],美國豬源沙門菌分離率為10.34%[4]。但是本試驗(yàn)的豬源沙門菌分離率明顯低于四川省的16.4%分離率[5]。這表明區(qū)域不同、樣本類型、采集季節(jié)、培養(yǎng)方式、分離方式以及環(huán)境條件都有可能影響到分離率。所以我國建立一個(gè)規(guī)范的沙門菌長期監(jiān)測體系是非常必要的。本試驗(yàn)分離得到的128株沙門菌來自10個(gè)省份,分為6種血清型,數(shù)量最多的為鼠傷寒沙門菌,其次是德爾卑沙門菌、倫敦沙門菌、嬰兒沙門菌、韋太夫雷登沙門菌和阿貢納沙門菌。鼠傷寒沙門菌廣泛分布于我國豬場,而且鼠傷寒1,4,[5],12∶i∶-占絕大多數(shù)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織下屬的全球食源性感染網(wǎng)絡(luò)提供的數(shù)據(jù)表明,我國最常見的血清型是德爾卑沙門菌,而美國和日本流行率最高的血清型則分別是鼠傷寒沙門菌和嬰兒沙門菌。本試驗(yàn)的血清型結(jié)果與其他研究結(jié)果還是比較一致的。所有沙門菌分離株進(jìn)行18種抗生素耐藥性監(jiān)測發(fā)現(xiàn),分離株對復(fù)方新諾明高度耐藥,耐藥率達(dá)到100%,而對阿米卡星卻是敏感的。另外,沙門菌對氨芐西林、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氯霉素以及氟苯尼考的耐藥率都比較高。這個(gè)結(jié)果與我國其他地方的研究結(jié)果相一致[2,5-7]。耐藥結(jié)果與地域結(jié)合在一起分析,可以得出遼寧、吉林等地的抗生素耐藥比較樂觀,但山東、河南、湖南等省份,耐藥形勢比較嚴(yán)峻。造成各地區(qū)耐藥情況不一致的原因可能是各省份在使用抗生素方面有區(qū)別。另外,山東、河南、湖北、湖南等地作為我國生豬養(yǎng)殖大省,在疾病治療與預(yù)防方面更多的使用抗生素也是造成抗生素耐藥的重要因素。

    [1] Kumar T, Rajora V R, Arora N. Prevalence ofSalmonellain pigs and broilers in the Tarai region of Uttarakhand, India [J]. Indian J Med Microbiol, 2014, 32(1):99.

    [2] Lai J, Wu C, Wu C,etal. Serotype distribution and antibiotic resistance ofSalmonellain food-producing animals in Shandong province of China, 2009 and 2012[J]. Int J Food Microbiol, 2014, 180(3):30-38.

    [3] European Food Safety Authority. The European Union summary report on antimicrobial resistance in zoonotic and indicator bacteria from humans, animals and food in 2012[J]. 2014, 19(12):20748.

    [4] National Antimicrobial Resistance Monitoring System. Animal Arm Annual Report. Available Online:https://search.usa.gov/search?utf8=%E2%9C%93amp;affiliate=agriculturalresearchser vicearsamp;query=Animal+Arm+Annual+Reportamp;btnG[J].x=16amp;btnG.y=9.

    [5] Li R, Lai J, Wang Y,etal. Prevalence and characterization ofSalmonellaspecies isolated from pigs, ducks and chickens in Sichuan Province, China[J]. Int J Food Microbiol, 2013, 163(1):14-18.

    [6] Kuang X, Hao H, Dai M,etal. Serotypes and antimicrobial susceptibility ofSalmonellaspp. isolated from farm animals in China [ J]. Front Microbiol, 2014, 6:602.

    [7] Yang B, Qiao L, Zhang X,etal. Serotyping, antimicrobial susceptibility, pulse field gel electrophoresis analysis ofSalmonella, isolates from retail foods in Henan Province China [J]. Food Control, 2013, 32(1):228-235.

    PrevalenceandantimicrobialsusceptibilityofSalmonellaisolatesfrompigsinChina

    JIAO Lian-guo1, YANG Gui-yan1, SU Jin-hui1,ZHU Yao-hong1, ZHAO Ya-rong2, WANG An-ru3, WANG Jiu-feng1

    (1.College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China;2.Animal Medicine Research Center of DaBeiNong Group, Beijing 100195, China;3.State Key Laboratory of Direct-Fed Microbial Engineering, Beijing 100192, China)

    Salmonellaas one of the common foodborne pathogens is also one of the pathogens in causing diarrhea in weaned piglets. China is a great country in pig industry, and the economic loss due to salmonellosis in pigs is severe. The symptoms ofSalmonellainfection in pigs are usually typhoid, characterized by severe systemic disease, and intestinal inflammation and diarrheal disease. This study collected samples from pigs with diarrhea in different farms of China to investigate the prevalence and drug resistance ofSalmonella. From the 128Salmonellastrains isolated from 571 samples from 84 farms in 16 provinces of China, we found that the most prevalent serotype wasS. Typhimurium, thenS. Derby,S. London,S. Infantis,S. Weltevreden andS. Agona. The antibiotics resistance ofSalmonellaisolates was severe, and all of the isolates were resistant to trimethoprim/sulfamethoxazole.

    Salmonella; isolation and identification ; prevalence ; antimicrobial susceptibility ; pig

    WANG Jiu-feng

    S852.61

    A

    0529-6005(2017)10-0017-04

    2017-05-10

    國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2017YFD0502200);公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201403054);國家自然科學(xué)基金(21026089)

    焦連國(1978-),男,博士生,研究方向?yàn)榕R床獸醫(yī)學(xué),E-mail:26682488@qq.com

    王九峰,E-mail:jiufeng_wang@hotmail.com

    猜你喜歡
    豬源亞種沙門
    A comprehensive review on the chemical constituents,sesquiterpenoid biosynthesis and biological activities of Sarcandra glabra
    市場豬源緊張 豬價(jià)企穩(wěn)回升
    亞沉茶漬亞洲亞種Lecanora subimmersa subsp. asiatica Zahlbr.的訂正研究
    一株雞白痢沙門菌噬菌體的發(fā)酵及后處理工藝研究
    中國飼料(2022年5期)2022-04-26 13:42:36
    盤羊新亞種
    ——和田盤羊
    沙門菌噬菌體溶菌酶LysSHWT1的制備及抑菌活性分析
    豬源大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析
    2013-2017年北京市順義區(qū)腹瀉病例中沙門菌流行特征
    一株豬源A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)
    大西洋鮭殺鮭氣單胞菌無色亞種的分離鑒定和致病性研究
    国产精品久久久久久精品电影小说| 最新的欧美精品一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品久久久噜噜| 老司机影院毛片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久99热6这里只有精品| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 人成视频在线观看免费观看| 大片电影免费在线观看免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 丰满饥渴人妻一区二区三| h视频一区二区三区| av.在线天堂| 精品一区二区免费观看| 丰满少妇做爰视频| 涩涩av久久男人的天堂| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av.av天堂| 久久韩国三级中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 亚洲在久久综合| 91国产中文字幕| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇 在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 一级毛片电影观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 热re99久久精品国产66热6| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产 一区精品| 青春草亚洲视频在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 成人国产av品久久久| 看免费成人av毛片| 少妇人妻 视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看 | 免费大片黄手机在线观看| 街头女战士在线观看网站| 亚洲av.av天堂| 成人漫画全彩无遮挡| 97在线视频观看| 99热6这里只有精品| 热re99久久精品国产66热6| 最近2019中文字幕mv第一页| 一个人免费看片子| 熟女av电影| 欧美xxⅹ黑人| 日本wwww免费看| 日韩强制内射视频| 免费观看的影片在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 高清毛片免费看| 91成人精品电影| 成人综合一区亚洲| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 少妇高潮的动态图| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产免费一级a男人的天堂| 日韩av不卡免费在线播放| 最黄视频免费看| 一边亲一边摸免费视频| 一区二区三区四区激情视频| 久久国内精品自在自线图片| 日本黄色片子视频| 日本91视频免费播放| 人妻一区二区av| 国产精品久久久久久久电影| 超色免费av| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产片内射在线| 好男人视频免费观看在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产成人精品无人区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日本黄色日本黄色录像| av免费在线看不卡| 99热全是精品| 国产精品.久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| videossex国产| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲国产av影院在线观看| 99九九在线精品视频| videos熟女内射| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久国产一区二区| 久久精品夜色国产| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品日韩av片在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 国产在线一区二区三区精| 成年人免费黄色播放视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产亚洲最大av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久久精品免费免费高清| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产69精品久久久久777片| 十八禁网站网址无遮挡| 视频区图区小说| 美女内射精品一级片tv| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 人妻系列 视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 视频区图区小说| 美女cb高潮喷水在线观看| 丝袜喷水一区| 寂寞人妻少妇视频99o| 男女国产视频网站| a 毛片基地| 伦精品一区二区三区| 男人操女人黄网站| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久久久久久大尺度免费视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 黑人高潮一二区| 久久久久精品性色| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美日韩精品成人综合77777| 最后的刺客免费高清国语| 在线观看一区二区三区激情| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久ye,这里只有精品| 蜜桃国产av成人99| .国产精品久久| 精品午夜福利在线看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 一个人看视频在线观看www免费| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99久久精品国产国产毛片| 中国国产av一级| 青春草国产在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩大片免费观看网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产熟女午夜一区二区三区 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品国产露脸久久av麻豆| √禁漫天堂资源中文www| 美女视频免费永久观看网站| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲精品色激情综合| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美日本中文国产一区发布| 99久久中文字幕三级久久日本| 最近的中文字幕免费完整| 看免费成人av毛片| 国产一区亚洲一区在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 伦理电影大哥的女人| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 人妻系列 视频| 国产免费现黄频在线看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲成人av在线免费| 国产精品免费大片| 蜜桃国产av成人99| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中文字幕免费在线视频6| 制服丝袜香蕉在线| 中国国产av一级| 亚洲国产精品国产精品| 交换朋友夫妻互换小说| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 男的添女的下面高潮视频| av国产精品久久久久影院| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久久久久久精品精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日本与韩国留学比较| 午夜91福利影院| 精品人妻在线不人妻| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜老司机福利剧场| 考比视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本与韩国留学比较| 人妻人人澡人人爽人人| 尾随美女入室| 一本色道久久久久久精品综合| 一边摸一边做爽爽视频免费| 插逼视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 水蜜桃什么品种好| av有码第一页| 色哟哟·www| 中文字幕免费在线视频6| 男的添女的下面高潮视频| 美女福利国产在线| 久久这里有精品视频免费| 少妇人妻 视频| 亚洲精品第二区| 插逼视频在线观看| 国产成人av激情在线播放 | 亚洲美女视频黄频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 91精品三级在线观看| 亚洲综合色网址| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 在线观看免费高清a一片| 人妻 亚洲 视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美精品亚洲一区二区| 波野结衣二区三区在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 少妇人妻 视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 黑丝袜美女国产一区| 中国国产av一级| 亚洲第一av免费看| 视频区图区小说| 人妻系列 视频| 国产成人精品久久久久久| 久久青草综合色| 久久久国产欧美日韩av| 成人黄色视频免费在线看| 日韩亚洲欧美综合| 免费大片黄手机在线观看| 欧美另类一区| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 高清欧美精品videossex| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品免费大片| 国产乱人偷精品视频| 欧美精品一区二区免费开放| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲国产日韩一区二区| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩亚洲欧美综合| .国产精品久久| 综合色丁香网| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 久久午夜综合久久蜜桃| 免费少妇av软件| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 最近的中文字幕免费完整| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产av国产精品国产| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品一区二区免费观看| 国产精品久久久久久久久免| 日本黄大片高清| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产毛片在线视频| 日韩av免费高清视频| videos熟女内射| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产视频内射| 人成视频在线观看免费观看| 日韩免费高清中文字幕av| 精品酒店卫生间| 国产精品女同一区二区软件| 久久久精品免费免费高清| 久久久久视频综合| 成年av动漫网址| 制服诱惑二区| 99热6这里只有精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 嫩草影院入口| 久久久久久久久久成人| 国产亚洲最大av| 日韩电影二区| 亚洲欧洲国产日韩| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久国产精品麻豆| 视频中文字幕在线观看| 蜜桃在线观看..| 有码 亚洲区| 老女人水多毛片| 国产国语露脸激情在线看| 天堂俺去俺来也www色官网| 永久免费av网站大全| 99久久精品国产国产毛片| 99re6热这里在线精品视频| 国国产精品蜜臀av免费| 丁香六月天网| 亚洲国产av新网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品偷伦视频观看了| 国产成人aa在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久午夜福利片| 欧美日本中文国产一区发布| 国产综合精华液| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 中文字幕最新亚洲高清| av专区在线播放| 午夜激情久久久久久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久久久久国产电影| 欧美日韩视频精品一区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产黄色免费在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 中文天堂在线官网| 亚洲国产色片| 成人毛片60女人毛片免费| 2021少妇久久久久久久久久久| 最近中文字幕2019免费版| 99久久综合免费| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日本av手机在线免费观看| 国产精品不卡视频一区二区| 夫妻午夜视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 丝瓜视频免费看黄片| 少妇丰满av| 亚洲av不卡在线观看| 观看av在线不卡| 久热久热在线精品观看| 国产黄频视频在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| a级毛片黄视频| 成人毛片60女人毛片免费| 女性被躁到高潮视频| 欧美三级亚洲精品| 免费观看的影片在线观看| 全区人妻精品视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久国产精品大桥未久av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 女人久久www免费人成看片| 国产免费视频播放在线视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产在线免费精品| 久久韩国三级中文字幕| 久久女婷五月综合色啪小说| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 午夜福利视频精品| 亚洲成色77777| av卡一久久| .国产精品久久| 日韩欧美精品免费久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 能在线免费看毛片的网站| 久久国产精品大桥未久av| 午夜老司机福利剧场| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲四区av| 两个人的视频大全免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| freevideosex欧美| 啦啦啦啦在线视频资源| 美女主播在线视频| 国产一级毛片在线| 少妇丰满av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av.av天堂| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产成人精品婷婷| 成人午夜精彩视频在线观看| av一本久久久久| 久久av网站| 久久99热这里只频精品6学生| 国产在线免费精品| 精品国产国语对白av| 久久久久久久久久人人人人人人| 精品久久久精品久久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| a级毛色黄片| 国产 一区精品| 99热这里只有精品一区| 最黄视频免费看| 久久精品国产a三级三级三级| 中国三级夫妇交换| 天天影视国产精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 热99久久久久精品小说推荐| 青春草亚洲视频在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产免费视频播放在线视频| 国产av码专区亚洲av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩av不卡免费在线播放| 日本黄色片子视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久久视频综合| 午夜视频国产福利| 天美传媒精品一区二区| 少妇高潮的动态图| 婷婷色综合www| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99热6这里只有精品| 男人操女人黄网站| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲av福利一区| 久久毛片免费看一区二区三区| 天堂8中文在线网| videosex国产| 在现免费观看毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品久久久久久精品古装| 久久精品国产自在天天线| 亚洲av在线观看美女高潮| 一本色道久久久久久精品综合| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 最近手机中文字幕大全| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 日本午夜av视频| a级毛色黄片| 国产国语露脸激情在线看| 少妇精品久久久久久久| 色哟哟·www| 欧美+日韩+精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 一级黄片播放器| 一区在线观看完整版| 国产日韩欧美亚洲二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲在久久综合| 午夜91福利影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 少妇 在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 一本久久精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产成人精品福利久久| 国产男人的电影天堂91| 国产高清三级在线| www.色视频.com| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美日韩视频精品一区| 99热这里只有是精品在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 成年人午夜在线观看视频| 99国产综合亚洲精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 九草在线视频观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久av网站| 亚洲情色 制服丝袜| 国产不卡av网站在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| av一本久久久久| 久久久欧美国产精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品人妻在线不人妻| 黑人猛操日本美女一级片| 精品人妻在线不人妻| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲综合色惰| 热99久久久久精品小说推荐| 热re99久久国产66热| 天天操日日干夜夜撸| 如何舔出高潮| 国产一区亚洲一区在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 丰满少妇做爰视频| 超色免费av| 国产乱人偷精品视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 日日啪夜夜爽| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 飞空精品影院首页| 美女主播在线视频| 久久久久久久国产电影| 少妇丰满av| 日日啪夜夜爽| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品色激情综合| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人精品婷婷| 精品一品国产午夜福利视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久精品94久久精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 两个人看的免费小视频| 91精品三级在线观看| 久久 成人 亚洲| 大陆偷拍与自拍| 在线 av 中文字幕| 久久久久国内视频| 精品国产亚洲在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 午夜免费成人在线视频| 精品久久蜜臀av无| 国产不卡一卡二| 成人影院久久| 欧美日本中文国产一区发布| 窝窝影院91人妻| 国产av精品麻豆| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产av又大| 日本欧美视频一区| 久久99热这里只频精品6学生| 国产成人精品久久二区二区91| 悠悠久久av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 操美女的视频在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 香蕉久久夜色| 欧美日韩视频精品一区| 国产不卡一卡二| 成人精品一区二区免费| 最新的欧美精品一区二区| 在线观看人妻少妇| xxxhd国产人妻xxx| 男女下面插进去视频免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| svipshipincom国产片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 色在线成人网| 免费在线观看日本一区| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲九九香蕉| 老汉色∧v一级毛片| 久久久久视频综合| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品福利观看| 日本wwww免费看| 日韩欧美三级三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产成人av教育| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 色婷婷久久久亚洲欧美| 三级毛片av免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 美女主播在线视频| 另类亚洲欧美激情| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日本av免费视频播放| 久久亚洲精品不卡| 一区二区三区乱码不卡18| 成人黄色视频免费在线看| 日韩欧美一区视频在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久九九热精品免费| 成年动漫av网址| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日本av免费视频播放| 欧美黑人精品巨大| 日韩免费高清中文字幕av| 99香蕉大伊视频| av视频免费观看在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 国产极品粉嫩免费观看在线| a级片在线免费高清观看视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲精品一二三| 欧美性长视频在线观看| 99热国产这里只有精品6| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 五月天丁香电影| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品1区2区在线观看. |