中華絨螯蟹水癟子病不同發(fā)病階段的病理變化特點

陸宏達 田全全 賈相相 張小俊 任芳芳

(上海海洋大學(xué)水產(chǎn)動物遺傳育種中心, 上海市協(xié)同創(chuàng)新中心, 上海海洋大學(xué)國家水生動物病原庫, 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心, 上海 201306)

中華絨螯蟹水癟子病不同發(fā)病階段的病理變化特點

陸宏達 田全全 賈相相 張小俊 任芳芳

(上海海洋大學(xué)水產(chǎn)動物遺傳育種中心, 上海市協(xié)同創(chuàng)新中心, 上海海洋大學(xué)國家水生動物病原庫, 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心, 上海 201306)

為了解中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)“水癟子”病發(fā)生發(fā)展的過程, 揭示疾病的本質(zhì), 對病蟹進行了較全面的病理特點分析研究。根據(jù)病蟹肝胰腺顏色, 將病蟹劃分為淺黃、淺粉、乳白和灰白4個發(fā)病階段。研究結(jié)果表明, 隨著病情的發(fā)展, 病蟹肝胰腺與蟹重比逐漸減少, 腔液與蟹重比逐漸增加, 肝胰腺管直徑逐漸縮小,各發(fā)病階段病蟹的這些指標都與健康蟹有極顯著差異(P＜0.01), 病蟹肝胰腺與蟹重比除乳白階段與灰白階段之間和腔液與蟹重比除淺粉階段與乳白階段和乳白階段與灰白階段之間以及肝胰腺管直徑除乳白階段與灰白階段之間的差異均不顯著(P＞0.05)和淺粉階段與乳白階段之間的差異顯著(P＜0.05)外, 其他各發(fā)病階段之間這些指標均有極顯著差異(P＜0.01); 4個發(fā)病階段病蟹6種組織器官中肝胰腺、鰓、肌肉組織和心臟組織病理變化具有相似性, 淺黃階段主要是以組織器官水腫和萎縮為主, 是一種可逆的組織病理過程, 但在淺粉階段肝胰腺和肌肉組織出現(xiàn)細胞壞死, 以后發(fā)病階段更為嚴重, 鰓和心臟組織在乳白階段出現(xiàn)細胞壞死, 壞死是一種不可逆的組織病理過程, 神經(jīng)團和腸道組織病理變化不明顯。根據(jù)不同發(fā)病階段的病理特點, 在未來確定病因后通過消除病因等方法, 只有在病理變化處于可逆狀態(tài)的淺黃階段, 病蟹才有恢復(fù)的可能, 才有防控和挽救價值, 而淺粉階段以后的病蟹由于主要器官組織細胞崩解壞死處于不可逆的病理過程, 即使病因消除病蟹已不可能恢復(fù), 這樣的病蟹應(yīng)及時清除, 減少繼續(xù)養(yǎng)殖造成進一步的經(jīng)濟損失。

中華絨螯蟹; 水癟子病; 病理變化; 組織病理變化

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)俗稱河蟹、大閘蟹, 因其味道鮮美, 深受廣大消費者的喜愛, 河蟹人工繁殖育苗成功后20個世紀90年代初解決了苗種供不應(yīng)求的問題, 使河蟹養(yǎng)殖業(yè)得到了迅猛發(fā)展,目前已成為我國主要養(yǎng)殖的經(jīng)濟蟹類。2015年, 在江蘇省興化以及周邊等河蟹養(yǎng)殖區(qū)大范圍出現(xiàn)了一種被當?shù)匦忿r(nóng)稱為“水癟子”病的疾病, 主要表現(xiàn)為病蟹肝胰腺顏色發(fā)生變化, 從健康時的黃色肝胰腺變淺到進一步發(fā)展至乳白和灰白色的改變, 胸腔積液, 肝胰腺和肌肉大量減少而消瘦等癥狀。盡管該病病程較長, 死亡率較低, 但由于后期幾乎空殼無肉, 病蟹失去商品價值和經(jīng)濟價值, 使養(yǎng)蟹戶前期的投入血本無歸, 造成巨大的經(jīng)濟損失。楊宗英等[1]調(diào)查, 2015年是興化地區(qū)“水癟子”病首次暴發(fā)的一年, 興化市80%以上的塘口出現(xiàn)了“水癟子”病,大部分塘口發(fā)病率達到30%—40%, 有的甚至高達90%—100%, 2016年“水癟子”病仍然十分嚴重, 不僅發(fā)生在江蘇省所有河蟹養(yǎng)殖市縣, 而且在湖北省和安徽省等其他省份養(yǎng)蟹區(qū)也有較多的出現(xiàn)。什么原因?qū)е潞有贰八T子”病的說法不一, 有些人認為病毒、微孢子蟲、細菌等生物因素引起, 也有些人認為一些殺蟲藥物、養(yǎng)殖水質(zhì)、種質(zhì)退化和營養(yǎng)等非生物因素引起, 至今為止, 存在較大的爭議,病因尚未明確[2]。為了了解“水癟子”病的病理變化等特點, 根據(jù)病蟹肝胰腺顏色變化, 將該病劃分為不同發(fā)病階段, 對各發(fā)病階段的河蟹病理變化進行了分析研究, 研究結(jié)果對揭示該病的疾病本質(zhì)、最終查明病因和確定有效的防控方法等方面都有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實驗蟹

實驗用的病蟹于2015年和2016年的6—10月間采自發(fā)病嚴重的江蘇省興化市安豐鎮(zhèn)等河蟹養(yǎng)殖區(qū), 在發(fā)病蟹池通過放置蟹籠獲取病蟹。健康蟹采自上海崇明河蟹養(yǎng)殖場。

1.2 病理變化

疾病癥狀在發(fā)病季節(jié), 通過觀察和比較采集的病蟹, 得到病蟹癥狀的變化規(guī)律, 根據(jù)打開病蟹背甲后肝胰腺顏色變化的預(yù)觀察結(jié)果, 將病蟹劃分為4個發(fā)病階段, 對采集的健康蟹和各發(fā)病階段病蟹分別進行體重和體長測定。

肝胰腺、腔液與蟹重比和肝胰腺管直徑的測定為避免打開蟹背甲時在背甲內(nèi)的血淋巴液(簡稱腔液)的流失, 打開背甲時蟹腹部向上, 對健康蟹和各發(fā)病階段病蟹背甲內(nèi)留有的腔液稱重, 計算腔液與蟹重比。取出蟹體內(nèi)全部肝胰腺稱重, 計算肝胰腺與蟹重比。用ZEN pro 2012軟件在蔡司體視顯微鏡SteREO Discovery.V12下, 迅速對距離肝胰腺管末端2.5 mm處的肝胰腺管外直徑進行隨機測定, 其他剩余的肝胰腺作為組織病理分析的材料。

組織病理分別切取健康蟹和不同發(fā)病階段病蟹(各10只)的肝胰腺、肌肉組織(胸部、螯足和步足)、心臟、鰓、腸道和位于胸腔中央靠近胸甲處的神經(jīng)團, 在Bouin’s液中分別固定, 24h后70%酒精沖洗, 保存待用。各組織器官經(jīng)酒精梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋后組織切片, 切片厚度4—5 μm, 蘇木精伊紅(HE)染色, 中性樹膠封片。神經(jīng)團組織除用HE染色外, 還用尼氏小體染色法[3]進行染色。用NIS-Elements F 4.0軟件在Nikon Eclipse 55i顯微鏡下觀察拍照。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件, 對各發(fā)病階段病蟹和健康蟹數(shù)據(jù)進行方差分析和Duncan氏多重比較,P＜0.05為差異顯著,P＜0.01為差異極顯著,P＞0.05為差異不顯著。除有說明外, 健康蟹和各發(fā)病階段病蟹的所有測定數(shù)據(jù)的樣本數(shù)n=20, 實驗數(shù)據(jù)均用平均值±標準差(Mean±SD)表示。

2 結(jié)果

2.1 疾病癥狀

作為對照采集的健康蟹體重為(52.49±8.69) g,殼長為(4.65±0.12) cm, 活力高, 攝食能力強, 甲殼堅硬, 肝胰腺飽滿呈橘黃色或黃色(圖1a)。剛開始發(fā)病的病蟹, 其外表無明顯的異常, 病蟹不易察覺, 隨著病情發(fā)展, 蟹甲殼變軟, 活力下降, 攝食能力逐漸減弱, 打開病蟹的背甲, 甲殼內(nèi)的血淋巴液量增多,肝胰腺顏色發(fā)生逐漸變淡的變化, 肝胰腺量減少,同樣肌肉組織量減少和在其間的血淋巴液量增多,雌蟹和雄蟹的發(fā)病率相近。經(jīng)預(yù)觀察, 肝胰腺顏色隨著病蟹發(fā)病程度加深而有規(guī)律地變化, 根據(jù)肝胰腺顏色的不同將病蟹劃分為4個發(fā)病階段(圖1b—e), 分別為肝胰腺淺黃色發(fā)病階段(簡稱淺黃階段): 肝胰腺淺黃色或淺橘紅色, 采集的病蟹體重為(49.32±9.46) g, 殼長為(4.43±0.35) cm; 肝胰腺淺粉紅色發(fā)病階段(簡稱淺粉階段): 肝胰腺淺粉紅色或淺黃色, 采集的病蟹體重為(50.93±7.52) g, 殼長為(4.50±0.23) cm; 肝胰腺乳白色發(fā)病階段(簡稱乳白階段): 肝胰腺乳白色、淡黃色或淡粉紅色, 采集的病蟹體重為(49.89±8.70) g, 殼長為(4.46±0.29) cm;肝胰腺灰白發(fā)病階段(簡稱灰白階段): 肝胰腺淺灰色或灰白色, 采集的病蟹體重為(50.54±8.94) g, 殼長為(4.49±0.23) cm。淺粉階段至灰白階段的病蟹,一般腸中無食或只有少量食物, 嚴重消瘦, 可食部分的肝胰腺和肌肉大量減少, 已失去食用價值, 病蟹離水后容易死亡, 由于血淋巴液量增多病蟹仍然有重量感, 鰓和心臟有明顯的水腫現(xiàn)象。

2.2 肝胰腺和腔液與蟹重比以及肝胰腺管大小

如圖2所示, 從健康蟹至灰白階段的病蟹肝胰腺與蟹重比呈逐漸減少的趨勢, 依次為0.090±0.007、0.063±0.010、0.040±0.006、0.028±0.007和0.026±0.005, 各發(fā)病階段病蟹的肝胰腺與蟹重比與健康蟹都有極顯著差異(P＜0.01), 病蟹除乳白階段與灰白階段之間差異不顯著(P＞0.05)外, 其他各發(fā)病階段之間均有極顯著差異(P＜0.01); 而健康蟹至灰白階段的病蟹腔液與蟹重比呈逐漸增加的趨勢, 依次為0.005±0.004、0.029±0.005、0.060±0.006、0.063±0.010和0.066±0.005, 各發(fā)病階段病蟹的腔液與蟹重比與健康蟹都有極顯著差異(P＜0.01), 病蟹除淺粉階段與乳白階段和乳白階段與灰白階段之間差異不顯著(P＞0.05)外, 其他各發(fā)病階段之間均有極顯著差異(P＜0.01); 健康蟹至灰白階段的病蟹肝胰腺管直徑呈逐漸縮小的趨勢, 分別為(0.402±0.020)、(0.323±0.026)、(0.273±0.021)、(0.266±0.017)和(0.263±0.015) mm, 各發(fā)病階段病蟹的肝胰腺管直徑與健康蟹都有極顯著差異(P＜0.01), 病蟹除淺粉階段與乳白階段之間差異顯著(P＜0.05)和乳白階段與灰白階段之間差異不顯著(P＞0.05)外, 其他各發(fā)病階段之間均有極顯著差異(P＜0.01)。

圖1 健康蟹和不同發(fā)病階段病蟹的肝胰腺Fig. 1 Hepatopancreas of healthy crab and diseased crabs in the different stages of disease

圖2 健康蟹和各發(fā)病階段病蟹肝胰腺和腔液與蟹重比以及肝胰腺管直徑比較Fig. 2 Comparisons of the weight ratio of hepatopancreas with crab body, and the weight ratio of haemolymph in the cavity with crab body and the diameter of hepatopancreatic tube between healthy crab and diseased crab

2.3 肝胰腺組織病理

健康蟹肝胰腺由大量緊密排列的肝胰腺管和管間少量的結(jié)締組織構(gòu)成, 肝胰腺管由基膜和排列于基膜之上的纖維細胞(F細胞)、泡狀細胞(B細胞)、吸收細胞(R細胞)和胚細胞(E細胞)4種柱狀肝胰腺細胞組成, 基膜中纖維存在, 細胞核圓形或橢圓形, 核仁1—2個(圖版Ⅰ-1)。

不同發(fā)病階段肝胰腺組織病理表現(xiàn)為淺黃階段: 部分肝胰腺管出現(xiàn)不同程度的萎縮現(xiàn)象, 基膜略增厚并呈輕微波浪型的皺縮, 肝胰腺細胞體積略有縮小, 少數(shù)細胞與基膜出現(xiàn)輕度分離(圖版Ⅰ-2);淺粉階段: 大部分肝胰腺管萎縮現(xiàn)象進一步加劇,脫離基膜的肝胰腺細胞與基膜間的空隙增大(圖版Ⅰ-3), 局部區(qū)域肝胰腺管中肝胰腺細胞出現(xiàn)壞死;乳白階段: 肝胰腺管嚴重萎縮, 脫離基膜的肝胰腺細胞與基膜間的空隙進一步增大, 并有較多的肝胰腺細胞壞死, 肝胰腺細胞壞死的肝胰腺管明顯增多,壞死細胞胞核固縮、胞質(zhì)崩解(圖版Ⅰ-4); 灰白階段: 病理變化類似于乳白階段, 但壞死的區(qū)域增多,極大多數(shù)從基膜脫落的肝胰腺細胞壞死崩解, 固縮核和崩解的細胞質(zhì)混合在一起, 失去完整的細胞結(jié)構(gòu), 許多殘留的基膜盡管還是管型, 但由于肝胰腺管的嚴重萎縮和壞死而呈現(xiàn)嚴重折疊狀或卷曲狀(圖版Ⅰ-5)。不同發(fā)病階段病蟹肝胰腺管內(nèi)許多肝胰腺細胞細胞核出現(xiàn)核溝, 隨著病情的發(fā)展, 有核溝的肝胰腺細胞數(shù)量增加, 出現(xiàn)核溝的肝胰腺細胞主要是R細胞(圖版Ⅰ-6), 另外在肝胰腺管內(nèi)常發(fā)現(xiàn)有細菌的存在。

2.4 肌肉組織病理

健康蟹肌肉組織主要分布在胸部和螯、步足內(nèi), 為骨骼肌, 由許多肌束和包裹其周圍的結(jié)締組織肌束膜構(gòu)成, 肌束膜伸入肌內(nèi), 將肌分隔為若干肌束, 肌束中肌纖維由許多肌原纖維組成, 橫切面的肌原纖維呈點狀(圖版Ⅱ-1a), 縱切面顯示明、暗帶交替的橫紋, 排列均勻, 細胞核成梭形或橢圓形,位于肌纖維的邊緣(圖版Ⅱ-1b)。

經(jīng)觀察同一發(fā)病階段病蟹胸部和螯、步足內(nèi)肌肉組織病理變化相似。不同發(fā)病階段肌肉組織病理表現(xiàn)為淺黃階段: 部分肌肉肌纖維出現(xiàn)萎縮,肌纖維間和肌束間水腫而間隙增大, 尤其肌束膜與肌束間的分離現(xiàn)象更為明顯, 肌纖維細胞核沒有出現(xiàn)明顯的病變現(xiàn)象(圖版Ⅱ-2)。淺粉階段: 局部區(qū)域出現(xiàn)肌纖維橫紋模糊不清, 肌纖維出現(xiàn)壞死, 少量肌纖維斷裂, 壞死肌纖維濃染, 肌束膜與肌束分離現(xiàn)象更為嚴重。乳白階段: 肌纖維壞死崩解, 橫切面呈點狀的肌原纖維無法分辨, 肌纖維細胞核固縮濃染, 有些區(qū)域壞死崩解成無結(jié)構(gòu)的物質(zhì)(圖版Ⅱ-3), 縱切面壞死的肌纖維橫紋消失(圖版Ⅱ-4、5); 灰白階段: 幾乎所有的肌纖維壞死, 橫紋消失,壞死崩解成無結(jié)構(gòu)的物質(zhì), 只殘留固縮濃染的肌纖維細胞核, 肌纖維壞死而大量減少使肌束膜與肌束間出現(xiàn)嚴重分離, 間隙進一步增大(圖版Ⅱ-6)。

2.5 心臟組織病理

健康蟹的心臟組織結(jié)構(gòu)分為心外膜、心肌層和心內(nèi)膜三層, 心外膜和心內(nèi)膜主要由結(jié)締組織構(gòu)成, 而很厚的心肌層是由結(jié)締組織和大量的心肌纖維構(gòu)成, 肌纖維為橫紋肌, 并有分支, 排列松散, 整齊, 核橢圓形(圖版Ⅲ-1)。

不同發(fā)病階段心肌組織病理表現(xiàn)為淺黃階段:部分心肌纖維出現(xiàn)水腫現(xiàn)象, 間隙增大, 少數(shù)肌纖維纖維素樣變, 嗜伊紅性增強, 強嗜酸性而成深紅色, 橫紋不清晰(圖版Ⅲ-2); 淺粉階段: 肌纖維之間出現(xiàn)空隙增多, 纖維素樣變的肌纖維增多, 肌纖維出現(xiàn)崩解壞死現(xiàn)象。乳白階段: 肌纖維之間間隙明顯增大, 并出現(xiàn)血淋巴細胞浸潤現(xiàn)象, 纖維素樣變的肌纖維崩解壞死, 壞死肌纖維出現(xiàn)強的嗜伊紅性,橫紋完全消失(圖版Ⅲ-3、4)。灰白階段: 纖維素樣變肌纖維明顯增多, 肌纖維崩解壞死區(qū)域增大, 部分區(qū)域失去心肌組織應(yīng)有的結(jié)構(gòu)(圖版Ⅲ-5), 并出現(xiàn)大量血淋巴細胞的浸潤現(xiàn)象。

2.6 鰓組織病理

健康蟹的每條鰓由鰓軸和鰓葉組成, 鰓葉最外面為角質(zhì)層, 內(nèi)為緊靠的單層上皮細胞層, 與柱狀細胞一起構(gòu)成鰓腔, 鰓腔內(nèi)有游離的血細胞(圖版Ⅳ-1)。

不同發(fā)病階段鰓組織病理表現(xiàn)為淺黃階段: 鰓部分區(qū)域出現(xiàn)水腫現(xiàn)象, 一種水腫是出現(xiàn)在鰓葉角質(zhì)層與上皮細胞間, 使角質(zhì)層與上皮細胞分離(圖版Ⅳ-2), 另外一種是鰓葉的鰓腔增大, 使得整個鰓葉變厚, 而鰓上皮細胞萎縮; 淺粉階段: 水腫現(xiàn)象更為嚴重, 鰓腔膨大, 有些區(qū)域是正常鰓葉厚度的1—2倍, 上皮細胞核有輕度固縮現(xiàn)象, 上皮細胞細胞質(zhì)淡染(圖版Ⅳ-3); 乳白階段: 既有淺粉階段的鰓腔膨大, 也有灰白階段的細胞壞死崩解的病理現(xiàn)象;灰白階段: 鰓葉部分區(qū)域病變嚴重, 較多的角質(zhì)層出現(xiàn)斷裂, 組成鰓葉的上皮細胞和柱狀細胞壞死崩解, 細胞核溶解消失, 壞死物質(zhì)淡染(圖版Ⅳ-4、5),有些區(qū)域柱狀細胞壞死, 鰓腔變窄, 甚至鰓腔完全消失, 殘留的鰓上皮細胞核固縮濃染(圖版Ⅳ-6), 影響鰓的呼吸功能。

2.7 腸和神經(jīng)團組織病理

不同發(fā)病階段病蟹腸道組織只在淺粉階段后有輕微的水腫外, 無其他組織病理變化。位于胸腔中央靠近胸甲處的神經(jīng)團, 與周圍的步足和螯足分別有一根神經(jīng)相連, 神經(jīng)團中的神經(jīng)細胞完整, 細胞質(zhì)內(nèi)的尼氏小體正常, 在不同發(fā)病階段均未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)組織的病理變化現(xiàn)象。

3 討論

河蟹規(guī)模化養(yǎng)殖從20世紀90年代起, 至今已有20多年的歷史, 隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大, 新的病害不斷出現(xiàn), 包括寄生蟲性疾病[4,5]、病毒性疾病[6,7]和細菌性疾病[8], 還有無法確定病因的疾病, 如2007年報道的在江蘇東太湖圍網(wǎng)養(yǎng)殖的中華絨螯蟹出現(xiàn)肝胰腺白化癥, 盡管排除了生物性病因, 但結(jié)論是該病的發(fā)生與餌料投喂量、動植物餌料之比及水環(huán)境有著密切的聯(lián)系, 最終也沒有明確疾病是由哪種非生物性因素引起的[9]。本研究的河蟹水癟子病發(fā)生在養(yǎng)殖池塘, 與時隔十年發(fā)生在東太湖養(yǎng)殖的中華絨螯蟹肝胰腺白化癥具有相似的癥狀, 由于都沒有明確病因, 兩者是否是屬于相同病因引起的疾病還有待于進一步證實。2007年宋學(xué)宏等[10]對中華絨螯蟹肝胰腺白化癥進行了病理方面的研究, 但側(cè)重于超微結(jié)構(gòu)的病理變化, 在顯微病理方面只是粗略地對3種組織器官進行了病理觀察和簡單的描述。本研究不僅從病蟹肝胰腺量和胸腔內(nèi)血淋巴液量等方面進行了病理變化的分析比較, 且更為系統(tǒng)地分別對病蟹的4個不同發(fā)病階段6種組織器官進行病理觀察, 研究了該病發(fā)生、發(fā)展過程中不同發(fā)病階段的病理變化規(guī)律和特點, 對全面掌握“水癟子”病的病理變化特點和疾病的本質(zhì)、提供查明該病病因和確定有效防控方法的病理依據(jù)等方面都有重要意義。

河蟹水癟子病肝胰腺不僅顏色發(fā)生變化, 肝胰腺量也顯著減少, 從健康蟹至灰白階段的病蟹, 肝胰腺與蟹重比從0.090±0.007減少到0.026±0.005, 減少了約2/3; 肝胰腺管直徑從(0.402±0.020) mm縮小到(0.263±0.015) mm, 萎縮了約1/3。肝胰腺由許多肝胰腺管集合而成, 肝胰腺管縮小是肝胰腺量的減少主要因素之一, 不同發(fā)病階段病蟹肝胰腺與蟹重比和肝胰腺管直徑呈正相關(guān)關(guān)系, 都隨病情的加深而逐漸減小。肝胰腺與蟹重比和肝胰腺管直徑的減少主要發(fā)生在發(fā)病后的淺黃階段和淺粉階段, 幾乎呈直線下降, 表現(xiàn)為極顯著的差異(P＜0.01), 而從乳白階段到灰白階段差異不顯著(P＞0.05)。這種減少現(xiàn)象同樣顯示在肝胰腺的組織病理中, 發(fā)病的淺黃階段肝胰腺細胞萎縮為主導(dǎo)致肝胰腺管萎縮, 淺粉階段萎縮加劇, 乳白階段和灰白階段萎縮的肝胰腺細胞以崩解壞死為主, 但許多壞死細胞仍被嚴重萎縮呈鋸齒形的管狀基膜包圍著。

腔液與蟹重比隨病情的加深而逐漸增加, 與肝胰腺與蟹重比呈負相關(guān)關(guān)系。河蟹是開放式的循環(huán)系統(tǒng), 血淋巴液主要分布在組織內(nèi), 胸腔內(nèi)也有少量存在, 腔液與蟹重比在健康蟹內(nèi)只有0.005±0.004, 發(fā)病后, 顯著增加到灰白階段0.066±0.005,增加了13倍。腔液與蟹重比的增加主要發(fā)生在發(fā)病后的淺黃階段和淺粉階段, 幾乎呈直線上升, 表現(xiàn)為極顯著的差異(P＜0.01), 乳白階段起血淋巴液不再增加, 乳白階段與灰白階段之間腔液與蟹重比差異不顯著(P＞0.05)。病蟹尤其后期的病蟹嚴重消瘦, 肝胰腺和肌肉等可食部分已大量減少, 食用時幾乎空殼無肉, 但病蟹仍然有重量感, 是因為病蟹體內(nèi)血淋巴液的增加。肝胰腺和肌肉等組織出現(xiàn)壞死等病變, 機體蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)變成小分子等物質(zhì)后進入血淋巴液, 這種小分子物質(zhì)的持續(xù)增加, 使血淋巴液滲透壓持續(xù)升高, 通過鰓等組織器官水分從體外進入血淋巴液中以平衡增加的滲透壓, 病蟹甲殼內(nèi)大量血淋巴液增加形成大量積液,導(dǎo)致腔液與蟹重比增加和組織間的水腫現(xiàn)象。

河蟹水癟子病主要病變出現(xiàn)在肝胰腺、鰓、肌肉組織和心臟, 病理變化都首先出現(xiàn)不同程度的水腫現(xiàn)象, 組織細胞出現(xiàn)不同程度的萎縮, 組織間隙逐漸增大, 然后部分組織細胞變性和壞死, 最終局部組織細胞出現(xiàn)崩解壞死的病變過程。在病蟹4個發(fā)病階段中, 有些病變與其前后鄰近的發(fā)病階段病變類似, 有些病變具有發(fā)病階段間的承上啟下現(xiàn)象, 即其前個發(fā)病階段的病灶相對較小和程度相對較輕, 而其后個發(fā)病階段的病灶相對較大和程度相對較重, 例如在乳白階段肝胰腺細胞壞死的病理變化已比較嚴重, 在其前的淺粉階段出現(xiàn)輕度的少量壞死, 在其后的灰白階段有些區(qū)域肝胰腺細胞已壞死成一片無結(jié)構(gòu)物質(zhì)。肝胰腺、鰓、肌肉組織和心臟病變過程具有相似性, 淺黃階段主要是以組織器官水腫和萎縮為主, 水腫和萎縮是一種可逆的病理過程, 病因消除后可以向正常轉(zhuǎn)化, 但在淺粉階段肝胰腺和肌肉組織出現(xiàn)細胞壞死, 以后發(fā)病階段更為嚴重, 鰓和心臟組織在乳白階段和灰白階段出現(xiàn)細胞壞死, 壞死是一種不可逆的病理過程。根據(jù)不同發(fā)病階段的病理特點, 在未來確定病因后通過消除病因等方法, 只有在病變處于可逆狀態(tài)的淺黃階段病蟹才有恢復(fù)的可能, 才有防控和挽救價值,而淺粉階段尤其是乳白階段和灰白階段的病蟹由于主要器官組織細胞出現(xiàn)崩解壞死處于不可逆的病理過程, 即使病因消除病蟹已不可能恢復(fù), 這樣的病蟹建議及時的清除, 不應(yīng)該繼續(xù)養(yǎng)殖, 減少繼續(xù)養(yǎng)殖造成進一步的經(jīng)濟損失。

同一病蟹的不同組織器官病理變化程度是不同的, 在同一個發(fā)病階段不同病蟹的相同組織器官病理變化程度也存在一定的差異。隨著病情的加深, 盡管各發(fā)病階段的主要組織器官肝胰腺、鰓、肌肉組織和心臟病變程度不一, 參差不齊, 但在發(fā)病過程中都出現(xiàn)萎縮、水腫、壞死的組織病理變化。蟹殼軟是“水癟子”病的主要癥狀, 肝胰腺的病變影響消化吸收和合成代謝, 尤其在發(fā)病的后階段得不到充分的營養(yǎng)等原因, 使蛻殼后的新生蟹殼無法進一步硬化, 是蟹殼軟主要因素之一; 肌肉組織的病變影響活動能力, 病蟹表現(xiàn)為活力顯著下降;心臟的病變影響血淋巴液的循環(huán)和鰓的病變影響其呼吸功能, 相對健康蟹而言病蟹離水后在較短時間內(nèi)就死亡, 有些病蟹病程未達到乳白階段和灰白階段就有死亡, 呼吸功能下降是主要原因之一。病蟹肝胰腺細胞細胞核出現(xiàn)核溝, 隨著病情的發(fā)展,出現(xiàn)核溝的肝胰腺細胞數(shù)量增加。核溝常在人的腫瘤細胞中出現(xiàn), 如人的汗腺腺瘤(Hidradenoma)[11]和乳頭狀腎細胞癌(Papillary renal cell carcinoma)[12]等疾病, 認為核溝是細胞核核膜凹入的結(jié)果, 本研究的病蟹肝胰腺細胞細胞核出現(xiàn)核溝的病理現(xiàn)象是否與“水癟子”病有一定關(guān)系有待進一步證實。

本文采用肝胰腺與蟹重比和腔液與蟹重比, 能夠比較真實地反映不同發(fā)病階段病蟹的病理變化狀況, 而宋學(xué)宏等[9]為了比較健康蟹與白化癥病蟹在肥瘦程度上的差異性, 采用夏武平等[13]用于測定大林姬鼠(Apodemus speciosus peninsulaeThomas)肥滿度的方法作為測定積有大量血淋巴液的白化癥病蟹肥滿度, 肥滿度等于體重(g)除以體長(cm)的三次方再乘以100, 肥滿度與體重和體長有關(guān), 該報道中健康雄蟹和患病雄蟹的肥滿度測定結(jié)果分別為(69.8±1.9)和(60.6±2.9) g/cm3, 健康雌蟹和患病雌蟹的肥滿度分別為(55.1±2.6)和(51.0±1.3) g/cm3, 盡管有顯著差異, 但很明顯病蟹依然具有很高的肥滿度, 與健康蟹差異很小。由于白化癥病蟹減少的肝胰腺和肌肉組織重量由增加的血淋巴液取代, 其體重沒有出現(xiàn)很大變化, 但很瘦, 尤其到了后期, 空殼無肉, 已失去食用價值, 因此將測定大林姬鼠肥滿度的方法使用在具有大量腔液和組織水腫的病蟹上, 不能真實體現(xiàn)實際病蟹肥瘦度和病理變化, 同時會產(chǎn)生誤導(dǎo)作用。

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PATHOLOGICAL CHANGES OF SHUI-BIE-ZI DISEASED CHINESE MITTEN CRAB ERIOCHEIR SINENSIS IN THE DIFFERENT STAGES OF DISEASE

LU Hong-Da, TIAN Quan-Quan, JIA Xiang-Xiang, ZHANG Xiao-Jun and REN Fang-Fang
(Shanghai Collaborative Innovation for Aquatic Animal Genetics and Breeding; National Pathogen Collection Center for Aquatic Animals; National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

The pathological changes of “shui-bie-zi” diseased Chinese mitten crabEriocheir sinensiswere analyzed in order to understand the process of disease occurrence and development and reveal the nature of disease. According to hepatopancreatic colours of the diseased crabs, the disease was divided into four stages of light yellow, light pink,milky white and grey respectively. The results showed that as the development of the disease, the weight ratio of hepatopancreas with crab body reduced gradually, and the weight ratio of haemolymph in the cavity with crab body and the diameter of hepatopancreatic tube decreased gradually. These indexes of diseased crabs in four stages of disease were extremely significant difference compared to healthy crabs respectively (P＜0.01). Except there were no significant differences of the weight ratios of hepatopancreas with crab body between the milky white stage and the grey stage, and of haemolymph in the cavity with crab body between the light pink stage and the milky white stage and between the milky white stage and the grey stage, and of the diameter of hepatopancreatic tubes between the milky white stage and the grey stage (P＞0.05) and there was significant difference of the diameter of hepatopancreatic tubes between the light pink stage and the milky white stage (P＜0.05), these indexes were extremely significant differences between the other various stages of diseased crabs (P＜0.01). The histopathological changes of hepatopancreas, gill, muscle and cardiac muscle were similar among six kinds of tissues or organs of diseased crabs in the four stages of disease. The main histopathological changes of hepatopancreas, gill, muscle and cardiac muscle were edema and atrophy in the light yellow stage. Edema and atrophy are reversible histopathological processes. Necrosis of hepatopancreas and muscle appeared in the light pink stage and was more serious in the later stages. Necrosis of gills and cardiac tissue appeared in the milky white stage and the grey stage. Necrosis is an irreversible histopathological process. Histopathological changes of nerve and intestinal tract were not obvious. According to the histopathological characteristics in the different stages, diseased crabs could recover only in the light yellow stage by eliminating the cause which will be determined in the future. Diseased crabs are impossible to recover due to the necrosis of major organs or tissues in the light pink stage and the later stages even the cause of disease is eliminated. Diseased crabs should be cleared away in time in order to reduce the economic losses of further breeding.

Eriocheir sinensis; Shui-bie-zi disease; Pathology; Histopathology

S945.6

A

1000-3207(2017)06-1242-09

2017-07-12;

2017-09-04

上海市中華絨螯蟹產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項目(滬農(nóng)科產(chǎn)字2017-4號); 水產(chǎn)動物遺傳育種上海市協(xié)同創(chuàng)新中心(ZF1206)資助[Supported by Shanghai Chinese Mitten Crab Industry Technology System Construction Project (Shanghai Agricultural Science Production 2017-4); Shanghai Collaborative Innovation for Aquatic Animal Genetics and Breeding (ZF1206)]

陸宏達(1960—), 男, 江蘇啟東人; 教授; 主要從事水生動物醫(yī)學(xué)研究。E-mail: hdlu@shou.edu.cn

10.7541/2017.154

圖版Ⅰ 肝胰腺組織病理PlateⅠ Histopathology of hepatopancreas

圖版Ⅱ 肌肉組織病理PlateⅡ Histopathology of muscle

圖版Ⅲ 心臟組織病理PlateⅢ Histopathology of heart

圖版Ⅳ 鰓組織病理PlateⅣ Histopathology of gill