西吡氯銨含漱液對(duì)兩種口腔感染真菌抗菌活性研究

王新紅，唐櫻花，晏麗婷

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，廣州口腔疾病研究所，口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510140)

西吡氯銨含漱液對(duì)兩種口腔感染真菌抗菌活性研究

王新紅*，唐櫻花，晏麗婷

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，廣州口腔疾病研究所，口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510140)

目的：檢測(cè)0.1%西吡氯銨含漱液對(duì)白色念珠菌、熱帶念珠菌及其部分臨床株的抗菌活性。方法：以CLSI推薦的微量肉湯稀釋法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：西吡氯銨對(duì)白色念珠菌、熱帶念珠菌均有較好的抑制效果，標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC均為156.25μg/mL；臨床菌株的MIC在78.13μg/mL～312.5μg/mL之間。結(jié)論：0.1%西吡氯銨含漱液對(duì)白色念珠菌和熱帶念珠菌具有較好的抗菌效果。

西吡氯銨； 白色念珠菌； 熱帶念珠菌； 微量肉湯稀釋法

西吡氯銨(Cetylpyridinium chloride,CPC)化學(xué)成分為陽(yáng)離子季銨化合物，具有表面活性劑的功能。因其有較好的抗菌效果，對(duì)黏膜無(wú)明顯刺激作用，且無(wú)著色效應(yīng)[1]，故該制劑在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛應(yīng)用，在臨床上多用于口腔衛(wèi)生保健[2-3]。

真菌感染是臨床常見(jiàn)的口腔疾病之一，傳染性較強(qiáng)，流行廣泛。近年來(lái)，隨著口腔治療的廣泛開(kāi)展，加之激素和免疫抑制劑的大量應(yīng)用，口腔真菌感染越來(lái)越常見(jiàn)，尤其是對(duì)免疫低下的患者而言，更易引發(fā)嚴(yán)重后果甚至導(dǎo)致死亡。念珠菌屬所致感染在口腔真菌感染中最為常見(jiàn)，該屬真菌中致病性最強(qiáng)的是白色念珠菌(CanidiaAlbicans)和熱帶念珠菌(Candidatropicalis)[4]，其中白色念珠菌為常見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌，可感染皮膚、黏膜和臟器，引起淺部或深部感染[5]。在口腔中，該菌可感染黏膜，引起口腔齲齒病變；熱帶念珠菌是最流行的非白色念珠菌[6]，近年來(lái)，由侵襲性熱帶念珠菌所致的口腔感染發(fā)生比例顯著升高[7]。故此，本研究以這兩種真菌的標(biāo)準(zhǔn)株及多株臨床分離株為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)0.1%西吡氯銨含漱液的抗真菌活性進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示該含漱液對(duì)上述兩種真菌及其臨床分離株均有一定抑制效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥品

待檢制劑：0.1%CPC漱口液，由杭州民生藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)170306，規(guī)格0.1%/200 mL(瓶)；3%過(guò)氧化氫消毒液，批號(hào)K1704302，規(guī)格3%/100 mL(瓶)。

1.1.2 培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)所用沙保弱瓊脂由北京奧博星生物公司生產(chǎn)，批號(hào)：20150707，YPD肉湯為北京奧博星生物公司生產(chǎn)，批號(hào)20160712；上述培養(yǎng)基均按說(shuō)明書(shū)配制，并按說(shuō)明書(shū)規(guī)定條件高壓蒸汽滅菌備用。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)菌株

實(shí)驗(yàn)所用菌株由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室惠贈(zèng)。白色念珠菌(CanidiaAlbicans)標(biāo)準(zhǔn)菌株2株，為ATCC9028，CMCC(F)98001，臨床分離株共計(jì)7株。熱帶念珠菌(Candidatropicalis)標(biāo)準(zhǔn)株ATCC1369，臨床分離株共計(jì)5株。以上各菌株以沙保弱瓊脂進(jìn)行接種，35℃48h培養(yǎng)后挑取生長(zhǎng)良好的菌苔，以YPD肉湯配成1×105cfu/mL的對(duì)應(yīng)菌液備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的微量稀釋法[8]，參照文獻(xiàn)[9]稍作修改，以96孔板測(cè)定MIC(最小抑菌濃度)。在96孔板中每孔加入YPD肉湯100μL，然后在第1行中加入100μL西吡氯銨原液，隨后從第1行中吸取100μL混合液加入第2行，依次類推至第8行，西吡氯銨原液等效濃度為1mg/mL，依次遞倍稀釋得到2～256倍稀釋梯度。另單獨(dú)設(shè)置陰性對(duì)照，只加入YPD肉湯和對(duì)應(yīng)菌液，觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象。同時(shí)設(shè)立藥物稀釋梯度和YPD肉湯空白做為輔助對(duì)比。陽(yáng)性對(duì)照孔每孔加入10μL 3%過(guò)氧化氫消毒液。以上藥液和對(duì)照加樣完畢后，每孔加入1×105cfu/mL的對(duì)應(yīng)真菌菌液10μL，每個(gè)藥物重復(fù)3孔，37℃24h培養(yǎng)，以真菌生長(zhǎng)情況判斷結(jié)果。樣品的MIC判定以樣品孔與對(duì)照孔比較得出：若該孔肉眼觀察培養(yǎng)液清晰，下一孔出現(xiàn)渾濁，則該孔稀釋度視為其MIC；與空白孔對(duì)照出現(xiàn)渾濁則說(shuō)明無(wú)抑制效果[10]。

2 結(jié)果

37℃24h培養(yǎng)結(jié)束后觀察結(jié)果。陽(yáng)性孔中培養(yǎng)液澄清透明，無(wú)肉眼可見(jiàn)渾濁；陰性孔中均有明顯渾濁。各樣品孔結(jié)果如下。

2.1 白色念珠菌菌抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果(含標(biāo)準(zhǔn)株，見(jiàn)表1)

表1 白色念珠菌MIC結(jié)果

表1顯示，西吡氯銨含漱液對(duì)白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC均為156.25μg/mL，對(duì)白色念珠菌各臨床菌株的MIC介于78.13μg/mL-312.5μg/mL之間。

2.2 熱帶念珠菌菌抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果(含標(biāo)準(zhǔn)株，見(jiàn)表2)

表2 熱帶念珠菌MIC結(jié)果

表2顯示，西吡氯銨含漱液對(duì)熱帶念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC1369的MIC為156.25μg/mL，對(duì)熱帶念珠菌各臨床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之間。

3 討論

國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道顯示，西吡氯銨是一種表面活性劑，可通過(guò)降低表面張力，進(jìn)而增加細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性而起到抑菌和殺菌作用。其抗菌譜較廣，對(duì)多種細(xì)菌如葡萄球菌、鏈球菌、幽門(mén)螺桿菌、大腸埃希菌、傷寒沙門(mén)菌等均有一定抑制效果[11-13]]，對(duì)口腔白色念珠菌感染也有較好療效[14]。因其對(duì)口腔正常菌群無(wú)顯著作用[15]，故而已有多家口腔醫(yī)院將其用作口腔消毒劑。

念珠菌屬是酵母菌中最大的一屬[16]，其中部分念珠菌寄生于人體，在正常菌群中分布廣泛，也屬于機(jī)會(huì)致病菌，臨床中該菌常引起的感染是口腔念珠菌病及念珠菌性陰道炎。其中口腔念珠菌感染是念珠菌屬感染所引起的急性、亞急性或慢性口腔黏膜疾病, 長(zhǎng)期不愈還有惡變。應(yīng)引起足夠的重視[17]。該病的主要病原菌為白色念珠菌，但熱帶念珠菌等其他念珠菌屬真菌也可引起類似感染[18]。白色念珠菌是臨床常見(jiàn)的口腔感染真菌之一，但亦可引起免疫低下者出現(xiàn)黏膜及全身感染。熱帶念珠菌是最流行的非白色念珠菌[19]，由于近年來(lái)對(duì)白色念珠菌患者過(guò)度使用抗真菌藥物，導(dǎo)致非白念珠菌定植率升高。如印度流行病學(xué)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，院內(nèi)真菌感染主要由非白念珠菌引起，其中熱帶念珠菌占到絕大多數(shù)[20]。該菌易感染免疫低下患者，病死率高于其他念珠菌感染，易形成生物膜，可能導(dǎo)致院內(nèi)播散，更需要予以重視[7]。有鑒于此，本研究選擇上述兩種具有代表性的真菌及其臨床菌株進(jìn)行研究，能充分反映西吡氯銨含漱液對(duì)常見(jiàn)口腔真菌的抑菌活性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，西吡氯銨含漱液對(duì)白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001標(biāo)準(zhǔn)株的MIC均為156.25μg/mL，對(duì)白色念珠菌各臨床菌株的MIC介于78.13μg/mL～312.5μg/mL之間；對(duì)熱帶念珠菌ATCC1369標(biāo)準(zhǔn)株的MIC為156.25μg/mL，對(duì)熱帶念珠菌各臨床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之間。該結(jié)果顯示西吡氯銨含漱液對(duì)這兩種真菌均有較好的抑制效果，與臨床研究的結(jié)果基本一致。

近年來(lái)，由于廣譜抗生素、激素和免疫抑制劑的大量使用，加之艾滋病患者的不斷增加，口腔念珠菌感染的發(fā)病率不斷上升。研究顯示，白色念珠菌感染在真菌感染中最為常見(jiàn)，占53%～68%[21]；臨床中，熱帶念珠菌等非白色念珠菌日益增多，周小武[18]等的研究顯示，在口腔念珠菌病患者中，白念珠菌感染占61.43%，熱帶念珠菌占14.29%。目前臨床中，對(duì)口腔念珠菌感染常建議早期局部藥物治療。西吡氯銨可通過(guò)其表面活性劑作用，阻止菌體粘附于口腔黏膜上皮細(xì)胞表面，影響真菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，增強(qiáng)其通透性導(dǎo)致菌體內(nèi)蛋白變性，進(jìn)而殺滅真菌。此外，該藥物對(duì)口腔黏膜刺激性小，無(wú)明顯染色效應(yīng)，故此，西吡氯銨是一種適用于防治口腔真菌感染的有效藥物，有進(jìn)一步深入開(kāi)發(fā)的價(jià)值。

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(本文文獻(xiàn)格式：王新紅，唐櫻花，晏麗婷.西吡氯銨含漱液對(duì)兩種口腔感染真菌抗菌活性研究[J].山東化工，2017，46(20)：19-20,25.)

AntibacterialactivityofCetylpyridniumChlorideGargleAgainstontwoOralInfectionFungi

WangXinhong1，TangYinghua1，YanLiting1

(Department of periodontics and oral medicine, Stomatology Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510140,China)

Objective:The in vitro antimicrobial activity of 0.1% cetylpyridinium chloride was determined against standard strains and clinical isolates ofCanidiaAlbicansandCandidatropicalis. Methods: Micro both dilution method. Results:The inhibition of cetylpridinium chloride onCanidiaAlbicansandCandidatropicalisare obvious, the MIC of standard strains is 156.25μg/mL; While the MICs of clinical isolates range from 78.13μg/mL～312.5μg/mL. Conclusion: 0.1% of cetylpyridinium chloride has significant antibacterial effect on Canidia Albicans and Candida tropicalis. and clinically isolated strains.

cetylpyridinium chloride;CanidiaAlbicans;Candidatropicalis;micro both dilution method

2017-08-17

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金A2016223

王新紅(1976—)，女，山東威海人，博士研究生，副教授，主要從事牙周病及黏膜病學(xué)的醫(yī)教研工作。

R781.54

A

1008-021X(2017)20-0019-02