微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的定植研究

趙西珍

(三門峽市中心醫(yī)院 口腔科，河南 三門峽472000)

微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的定植研究

趙西珍

(三門峽市中心醫(yī)院 口腔科，河南 三門峽472000)

目的觀察慢性根尖周炎感染根管內微小小單胞菌的定植情況。方法選取在我院就診的100例慢性根尖周炎患者的130顆患牙，根據(jù)治療情況分為根管首次感染組(52例患者，68顆患牙)和根管再感染組(48例患者，62顆患牙)。采用16s rDNA PCR分析微小小單胞菌和牙髓優(yōu)勢致病菌在患牙標本中的檢出率、微小小單胞菌與牙髓優(yōu)勢菌之間的相關性。結果首次感染組患者根管內微小小單胞菌檢出率為47.1%，再次感染組中根管內微小小單胞菌檢出率為9.7%，差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)；首次感染組和再感染組患者微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌檢出具有相關性(Plt;0.05)。結論微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中均有定植，與牙髓卟啉單胞菌存在相關性，可能為共生關系。

微小小單胞菌；牙髓優(yōu)勢菌；檢出率；相關性

(ChinJLabDiagn,2017,21:1920)

以專性厭氧菌為主的根管內細菌感染是慢性根尖周炎發(fā)生的主要致病因素[1]。關于根管內微生物的分析一直是研究的熱點，牙髓優(yōu)勢菌牙髓卟啉單胞菌(Porphyromonasendodontalis)和牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)大多從感染根管中分離出來，是一種與牙髓感染有特殊關系的革蘭陰性菌。目前發(fā)現(xiàn)在慢性根尖周炎感染根管中也可檢出微小小單胞菌(Parvimonasmicra)[2,3]。微小小單胞菌為革蘭陽性小單胞屬細菌，在口腔和全身化膿性感染部位中比較常見[4]。國外對該菌在慢性根尖周炎感染根管中定植情況做了較多研究，但國內開展的調查較少，缺乏詳細的統(tǒng)計數(shù)據(jù)。本研究主要探討該菌株和優(yōu)勢菌糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌兩者之間的相關性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2015年8月-2016年8月在我院就診的100例慢性根尖周炎患者的130顆患牙，納入標準：首次感染患者的診斷依據(jù)慢性根尖周炎診斷標準；再感染為根管治療2年以上，患牙根尖周病變持續(xù)存在或患牙出現(xiàn)新根尖周病變；近1-3個月未服用抗生素；知情同意并簽署知情同意書。排除患有全身系統(tǒng)性疾病，髓腔穿孔或暴露，患牙經(jīng)過塑化或干髓治療，探診深度，附著喪失≥4 mm患者。根據(jù)治療情況將患者分為根管首次感染組(52例患者，68顆患牙)和根管再感染組(48例患者，62顆患牙)。首次感染組男性36例，女性16例，年齡22-70歲，平均年齡(40.52±3.87)歲；再感染組患者男性28例，女性20例，年齡19-68歲，平均年齡(38.36±5.44)歲。兩組患者性別、年齡等資料比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。

1.2標本采集

標本采集參照紀海等[5]報道的取樣方法，患者用氯已定含漱，局麻后橡皮障隔離患牙，用3%過氧化氫和2.5%次氯酸鈉消毒患牙后無菌球鉆去髓質，髓腔再次消毒后取具有根尖病變的牙根作為標本采集對象。首次感染患者根管中用20號無菌紙尖插入根管中，1 min后將紙尖尖端10 mm處剪斷放入含緩沖液的EP管，渦旋，-20℃凍存。再感染組患牙需用GG鉆和K銼去除牙膠，其他步驟同上。20號無菌紙尖尖端10 mm剪斷放入含緩沖液的EP管中為空白對照組。

1.3樣本處理及PCR

樣本于室溫下解凍，按照美國Promega細菌基因組DNA提取試劑盒要求提取DNA，微量分光光度計測定濃度。

微小小單胞菌和牙髓優(yōu)勢菌糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌的菌種特性16S rDNA引物由上海生工生物技術有限公司合成。參考Cogulu 等[6]報道反應條件進行PCR試驗，反應結束后凝膠電泳分析。微小小單胞菌RTFQ-PCR檢測采用該菌種的特異性保守區(qū)域設計，β-actin為內對照，樣本和管家基因分別在獨立反應孔中擴增40個循環(huán)，反應結束后讀取溶解曲線。

1.4統(tǒng)計學分析

收集的資料采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件數(shù)據(jù)包進行分析，兩個獨立樣本資料進行卡方檢驗，α=0.05；Logistic回歸分析各因素之間的相關性；RTFQ-PCR數(shù)據(jù)處理采用比較Ct值法(2-ΔΔCt法)；Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的檢出率

68例感染組樣本擴增出目標條帶32例，根管內微小小單胞菌檢出率為47.1%(32/68)，62例再次感染組樣本6例擴增出目標條帶，根管內微小小單胞菌檢出率為9.7%(6/62)，首次感染檢出率明顯高于再次感染組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)，見表1。

表1 微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的檢出率(%)

注：與再感染組比較，χ2=5.063，*Plt;0.05

2.2優(yōu)勢菌在慢性根尖周炎感染根管中的檢出率及與微小小單胞菌的相關性分析

16S rDNA結果顯示，牙髓優(yōu)勢菌糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌在首次感染中的檢出率分別為4.4%、41.2%和16.2%，再次感染組檢出率為25.8%、14.5%和4.8%。Logistic回歸分析表明，首次感染和再感染組患者標本中微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌檢出具有相關性，與其他單胞菌無相關，見表2。

表2 優(yōu)勢菌與微小小單胞菌的相關性

注：ORgt;2表示兩者間存在相關關系，ORlt;0.5表示兩者間無相關關系。

2.3首次感染和再感染過程微小小單胞菌DNA表達量

首次感染根管中微小小單胞菌DNA的相對表達量為(0.032±0.052)，再感染根管中微小小單胞菌DNA的相對表達量為(0.019±0.024)，首次感染組和再感染組樣本中微小小單胞菌DNA的相對表達量差異無統(tǒng)計學意義(P=0.183)。

3 討論

微小小單胞菌是一類革蘭陽性專性厭氧球菌，菌株大多呈球形，成對或鏈狀排列，是公認的人類牙周根尖中常駐菌[7-9]。微小小單胞菌可以通過刺激巨噬細胞釋放某些炎癥遞質引發(fā)炎癥，具有炎癥刺激作用，此外其還具有蛋白水解作用，與慢性牙周炎發(fā)生具有直接關系。隨著目前厭氧培養(yǎng)及鑒定技術的發(fā)展，人們對微小小單胞菌認識大大提高。結合國內外研究進展，本研究重點對我地區(qū)慢性根尖周炎感染根管內微小小單胞菌檢出率及其與優(yōu)勢菌糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌的相關定植情況進行了探討。

慢性根尖周炎感染根管內微小小單胞菌檢出國外已有部分報道，有文獻[10]利用DNA探針法發(fā)現(xiàn)待測的樣本中有接近半數(shù)樣本含有微小單胞菌，檢出率僅次于具核梭桿菌，另外，有研究證實慢性根尖周炎有病損根管中微小小單胞菌檢出率高于未病損病例[11]。本研究結果表明慢性根尖周炎首次感染組中根管內微小小單胞菌檢出率較高，而再次感染組中根管內微小小單胞菌檢出率下降明顯，差異有統(tǒng)計學意義，與文獻報道的結果相近[12]。經(jīng)過常規(guī)治療的根管可減少微小小單胞菌的定植可能是再次感染后檢出率下降的原因。因此作者建議在日常行根管治療中需要加強感染控制，防止再感染，提高臨床治療效果。

Logistic回歸分析表明首次感染和再感染組中微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌均具有相關性，可能為共生關系。原因可能與微小小單胞菌具有明顯的肽酶活性，可以利用氨基酸和多肽進行代謝，進而與牙髓卟啉單胞菌存在營養(yǎng)共生[12]。在本研究中未發(fā)現(xiàn)微小小單胞菌與糞腸球菌、牙齦卟啉單胞菌之間存在相關性，可能與本研究中兩菌株檢出率較低有關系。此外，本研究中我們發(fā)現(xiàn)首次感染的根管內微小小單胞菌DNA的表達量高于再感染根管，但差異無統(tǒng)計學意義，提示微小小單胞菌再感染根管檢出率減少但DNA表達量并未減少，可能與其他細菌協(xié)同發(fā)揮致病作用。

綜上述，微小小單胞菌為慢性根尖周炎患者感染根管中的常見致病菌之一，其與牙髓卟啉單胞菌存在相關性，臨床根管治療需要加強對微小小單胞菌及其他優(yōu)勢菌的感染控制。

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ThetinyMicromonosporaincolonizationoftherootcanalinchronicperiapicalinfection

ZHAOXi-zhen.

(DepartmentofStomatology,SanmenxiaCentralHospital,Sanmenxia472000,China)

ObjectiveTo detect the root canal micro small Aeromonas and dominant bacteria Enterococcus faecalis.Methods100 cases of chronic periapical periodontitis were collected in our hospital for treatment of 130 teeth,according to the treatment of root canal for the first time were divided into infection group (52 patients,68 teeth) and root canal infection group (48 patients,62 teeth).Using 16S rDNA PCR analysis of micro Micromonospora and pulp pathogens in patients with the detection rate of dental specimens,the correlation analysis between micro Micromonospora and pulp of dominant bacteria.ResultsChronic periapical infection group for the first time in the root canal micro small single cell bacteria detection rate was 47.1%,reinfection group root canal micro small single cell bacteria detection rate was 9.7%,there was significant difference between two groups (Plt;0.05); the first infection and re infection of tiny small cell groups in bacteria and Porphyromonas endodontalis were correlated with other non related Aeromonas(Plt;0.05).ConclusionSmall Micromonospora in chronic periapical infection in root canals were colonization,and Porphyromonas endodontalis are related to possible symbiotic relationship.

tiny Micromonospora; pulp dominant bacteria; detection rate; correlation

1007-4287(2017)11-1920-03

R782.3

A

2016-10-11)