激素6項化學發(fā)光試劑盒性能比較

王小艷 李志雄 董志寧 李明 吳英松★

激素6項化學發(fā)光試劑盒性能比較

王小艷1李志雄1董志寧1李明2吳英松2★

目的 對廣州市達瑞生物技術股份有限公司與貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司的激素6項化學發(fā)光試劑盒進行性能比較，為國產(chǎn)的商品化激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒替換進口激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒提供依據(jù)。 方法 用國產(chǎn)的和進口的激素6項化學發(fā)光試劑盒分別檢測最低檢測限、精密度、準確度及進行樣本比對試驗，對樣本的檢測結果進行相關性和一致性分析。 結果 國產(chǎn)的促卵泡激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，PROG）、催乳素（prolactin，PRL）、睪酮（testosterone，TES）試劑最低檢測限均低于或等于進口的相應試劑的最低檢測限；國產(chǎn)的激素6項試劑盒的精密度都＜8%，進口的激素6項試劑盒精密度都＜12%；各項目的線性相關系數(shù)r均大于或等于0.9，相關性很好。 結論 國產(chǎn)的激素6項試劑盒與進口的激素6項試劑盒均具有良好相關性及較高的一致性，可替代國外昂貴試劑應用于臨床檢測和基礎醫(yī)學的研究。

化學發(fā)光免疫分析；促卵泡激素；促黃體生成素；雌二醇；孕酮；催乳素；睪酮

激素的測定對于生殖內分泌功能的診斷具有很高的臨床價值［1?4］，可以根據(jù)不同生理時期測定的激素值，幫助診斷和指導臨床治療，觀察療效，但人體血液中激素的濃度極低，故準確定量測定人體血液中激素的濃度非常重要。健康人血中促卵泡激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，PROG）、催乳素（prolactin，PRL）、睪酮（testosterone，TES）等激素的濃度極低，以往主要采用放射免疫分析或酶聯(lián)免疫吸附分析（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定技術。近年來，隨著化學發(fā)光免疫分析技術（chemi?luminescent immunoassay，CLIA）在國內的應用逐漸成熟，已有不少國產(chǎn)的化學發(fā)光試劑盒能靈敏、特異、快速和準確地測定血液中各種激素的濃度，無污染，而且還可以做到全自動批量檢測［5?7］。目前，我國大部分醫(yī)院用進口激素類化學發(fā)光法試劑進行定量測定，如羅氏、雅培、西門子、貝克曼等外國公司的試劑盒，價格比較昂貴，患者負擔沉重。為了降低國民醫(yī)療檢測費用，我們需要用國產(chǎn)的商品化激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒替換進口激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒［8?10］。因此，本文將國產(chǎn)的激素類化學發(fā)光法定量測定試劑與進口激素類化學發(fā)光法定量測定試劑進行比較，為國產(chǎn)的商品化激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒替換進口激素類化學發(fā)光法定量測定試劑盒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本

收集2017年6月5日至2017年6月9日廣州達安臨床檢驗中心體檢者血清樣本125例，其中男性體檢者37例，女性體檢者88例，年齡范圍在19～54歲之間，平均年齡為37.6歲。

1.1.2 試劑盒

廣州市達瑞生物技術股份有限公司的促卵泡激素定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）、促黃體生成素定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）、催乳素定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）、雌二醇定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）、孕酮定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）、睪酮定量測定試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法），以下簡稱：達瑞生物激素6項試劑盒。

貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司的促卵泡激素測定試劑盒（化學發(fā)光法）、促黃體生成素測定試劑盒（化學發(fā)光法）、催乳素測定試劑盒（化學發(fā)光法）、雌二醇測定試劑盒（化學發(fā)光法）、孕酮測定試劑盒（化學發(fā)光法）、睪酮測定試劑盒（化學發(fā)光法）及其相應試劑盒的校準品，以下簡稱：貝克曼性激素6項試劑盒。

伯樂質控品：Lyphochek?Immunoassay Plus Control（含低、中、高3個不同濃度水平），批號：40320，購自Bio?Rad公司。

激素6項血清質控品：含3個不同濃度水平的血清質控品，批號：201701，購自廣州邦德盛生物科技有限公司。

1.1.3 儀器

廈門優(yōu)邁科醫(yī)學儀器有限公司的全自動化學發(fā)光免疫分析儀；貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司的UniCel Dxi 800 Access免疫分析系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 最低檢測限試驗

參考 CLSI EP15?A2［11］文件，用 2 個廠家的各項目試劑盒分別對零濃度校準品進行重復測定20次，計算20次檢測發(fā)光值的平均值（mean，M）和標準差（standard deviation，SD），得出M±2SD的結果，根據(jù)零濃度校準品及相鄰校準品的發(fā)光值進行兩點回歸方程，擬合出一次方程，將M±2SD的發(fā)光值代入上述方程中，計算各項目的最低檢出限。

1.2.2 精密度試驗

參考 CLSI EP5?A2［12］文件，用 2 個廠家的各項目試劑盒分別檢測3個不同水平濃度的混合血清質控品，每日3次，連續(xù)5天完成評價試驗，計算各項目測定結果的M、SD和變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。

1.2.3 準確性試驗

參考 CLSI EP9?A2［13］文件，用 2 個廠家的各項目試劑盒分別檢測3個不同水平濃度的企業(yè)質控品，每日3次，連續(xù)5天完成評價試驗，計算各項目測定結果的M與靶值的相對偏差，計算公式為相對偏差=（M-靶值）/靶值×100%。

1.2.4 樣本比對試驗

每天收集25例新鮮血清樣本，用2個廠家的各種試劑盒分別檢測，連續(xù)5天完成評價試驗。以進口試劑盒檢測結果為對照測值Y，以國產(chǎn)試劑盒檢測結果為考核測值X。對實驗數(shù)據(jù)的初步檢查：計算每一樣品的兩種試劑檢測結果的差值以及差值的均值，以差值的均值乘以4為判斷限，兩種試劑檢測樣品結果的差值都應在判斷限值內?？瓷Ⅻc圖有無明顯離群點，若有應對X、Y配對值做離群值計算，以4倍的平均差值為判斷限，所有差值都不應超出限值，若有超出限值應刪除，用新的樣本替代。計算線性回歸方程，分析國產(chǎn)試劑盒與進口試劑盒的相關性及一致性。

1.2.5 統(tǒng)計處理

利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件和Medcalc軟件對樣本檢測結果分別進行一元直線回歸相關性分析及Bland?Altman定量分析；用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對準確度進行t檢驗分析。

2 結果

2.1 最低檢測限試驗結果

根據(jù)各項目零濃度校準品和相鄰校準品的濃度RLU值的結果進行兩點回歸方程擬合得出一次性方程，將零濃度校準品的M±2SD的結果分別代入一次性方程中，得到結果見表1，2個廠家的各試劑盒均在允許范圍內，達瑞生物的FSH、LH、E2、PROG試劑最低檢測限均低于貝克曼的相應試劑的最低檢測限，達瑞生物的PRL、TES試劑最低檢測限均與貝克曼的相應試劑的最低檢測限一樣。

表1 最低檢測限結果Table 1 The results of lowest detectable limit

2.2 線性范圍比較結果

根據(jù)達瑞生物及貝克曼激素6項各試劑說明書，得各項目線性范圍結果見表2，達瑞生物的FSH、LH、PRL試劑線性范圍和貝克曼的相應試劑一樣，達瑞生物的E2、TES試劑線性范圍小于貝克曼的相應試劑的線性范圍。達瑞生物的PROG試劑線性范圍高于貝克曼的PROG試劑。

表2 線性范圍Table 2 The range of linear

2.3 精密度試驗結果

達瑞生物激素6項試劑盒及貝克曼激素6項試劑盒連續(xù)5天檢測同一份激素6項血清質控品，達瑞生物激素6項試劑盒的精密度都＜8%，貝克曼激素6項試劑盒都＜12%，見表3，均符合各試劑盒說明書要求。

2.4 準確性試驗

達瑞生物激素6項試劑盒連續(xù)5天平行檢測同一份激素混合質控品15次，取其平均值，再與標示值比較，同時進行t檢驗，見表4。達瑞生物試劑及貝克曼試劑對企業(yè)質控品檢測出來的結果很相近均在允許范圍內，且P＜0.05。因此2個廠家相對應試劑盒均具有可比性。

2.5 質量控制

經(jīng)過多次測定伯樂質控品以及反復驗證，達瑞生物激素6項得到伯樂質控品范圍值見表5，可見達瑞生物激素6項測定得到的伯樂質控品范圍值與貝克曼激素6項測定的范圍值相近。質量控制符合要求則進行臨床性能評價。

表3 精密度試驗的結果（x±s）Table 3 The results of precision（x±s）

表4 準確性試驗結果Table 4 The results of veracity

2.6 相關性分析

利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，以貝克曼試劑盒檢測結果為對照測值，以達瑞生物試劑盒檢測結果為考核測值，對125例新鮮血清的檢測結果進行相關性分析。FSH相關系數(shù)r值為0.990（P＜0.01），線性回歸方程為y=1.045x+0.092；LH相關系數(shù)r值為 0.986（P＜0.01），線性回歸方程為 y=0.937x+0.373；E2相關系數(shù)r值為 0.9（P＜0.01），線性回歸方程為y=0.875x-9.911；PRL相關系數(shù)r值為0.988（P＜0.01），線性回歸方程為 y=0.910x?0.595；PROG相關系數(shù)r值為0.904（P＜0.01），線性回歸方程為y=1.212x+6.428；TES 相關系數(shù)r值為 0.918（P＜0.01），線性回歸方程為 y=1.257x?1.10，散點圖見圖1；使用雙抗體夾心法的FSH、LH、PRL試劑盒，達瑞生物與貝克曼測值相關性很好，而使用競爭法的E2、PROG、TES試劑盒2個廠家的相關性略差。

表5 伯樂質控品范圍Table 5 The range of quality controls

2.7 2個系統(tǒng)符合性比對

比較2系統(tǒng)之間結果偏倚=（進口試劑測值?達瑞生物試劑測值）/進口試劑測值×100%，計算偏倚在±30%之內的符合率。達瑞生物FSH、LH、PRL、E2試劑與貝克曼FSH、LH、PRL、E2試劑系統(tǒng)符合率都能達到80%以上（表6），而PROG、TES試劑2系統(tǒng)符合率小于80%，但比較接近臨床比對要求的80%。

2.8 Bland?Altman分析

采用Bland?Altman統(tǒng)計學方法對各項目2組測定結果進行分析，以達瑞試劑與貝克曼試劑測值的均值為X軸，以兩者的差異值為Y軸，結果如圖2。FSH測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-6.3～10.2，94.4%（118/125）的測值比值在一致性界限內；LH測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-5.5～6.6，94.4%（118/125）的測值比值在一致性界限內；E2測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-45.8～28.1，96.0%（120/125）的測值比值在一致性界限內；PRL測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-8.6～4.5，95.2%（119/125）的測值比值在一致性界限內；PROG測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-2.5～1.6，97.6%（122/125）的測值比值在一致性界限內；TES測定結果95%一致性界限（X±1.96SD）為-4.6～2.7，95.2%（119/125）的測值比值在一致性界限內；2個廠家的各項目測值結果均具有較高的一致性。

3 討論

目前國內各大醫(yī)院認為國產(chǎn)的化學發(fā)光儀器及試劑的質量比進口化學發(fā)光儀器及試劑差，因此主要使用進口儀器及試劑，但進口試劑及儀器價格昂貴，在基層醫(yī)療機構難以普及。故本文對國產(chǎn)試劑達瑞生物激素6項與進口試劑貝克曼激素6項進行比對。

最低檢測限能反映試劑及儀器的檢測敏感程度，精密度體現(xiàn)試劑及儀器重復測定值的一致性［14?15］。較低的最低檢測限和良好的精密度是保證分析系統(tǒng)靈敏性及檢測結果準確性的前提。

本研究參考CLSI EP15?A2的評價方案檢測國產(chǎn)的達瑞生物激素試劑盒和進口貝克曼激素試劑盒的最低檢測限，結果顯示國產(chǎn)試劑盒的最低檢測限甚至優(yōu)于進口試劑盒。準確度是大批檢測結果的均值與靶值的一致程度，體現(xiàn)試劑檢測結果的準確性，達瑞生物與貝克曼激素6項試劑盒準確性試驗結果均符合要求。以上結果表明國產(chǎn)達瑞生物激素試劑盒的性能已達到進口試劑盒水平。

由于激素在人體內自身特性，現(xiàn)有的市場上各廠家間性激素類體外診斷試劑盒產(chǎn)品差異較大，包括進口廠家間也是如此。例如根據(jù)西門子自身公布的數(shù)據(jù)［16］，西門子公司VDVIA Centaur的兩套檢測系統(tǒng)E2、E2?6?Ⅲ試劑與羅氏公司Elec?sys2010的E2試劑相關性比較，E2和E2?6?Ⅲ與羅氏公司Elecsys2010的E2的斜率分別為0.93和1.12，截距分別為18.85和0.72，r值分別為0.904和0.916，相對應的r2值分別為 0.817 和 0.839［16］，但根據(jù)另一篇參考文獻的報道，西門子公司ADVIA Centaur的2套E2檢測系統(tǒng)以及羅氏公司Elec?sys2010的E2檢測系統(tǒng)分別與商業(yè)化的ID?GC/MS檢測系統(tǒng)相比，r值都能達到0.99以上［17］。況且E2、PROG、TES這些使用競爭法的項目目前無國家甚至國際的標準物質進行溯源，無法達到統(tǒng)一的標準。因此，目前市場上，不同的E2、PROG、TES檢測系統(tǒng)之間的檢測結果普遍存在差異。

圖1 血樣測值相關性分析散點圖Figure 1 The scatter plot of correlation analysis

表6 符合率結果Table 6 The results of agreement rate

圖2 Bland?Altman 分析圖Figure 2 The chart of Bland?Altman analysis

雖然不同檢測系統(tǒng)之間檢測E2、PROG、TES結果普遍存在差異，但根據(jù)Yamamoto等人［18］用不同檢測系統(tǒng)化學發(fā)光試劑評價E2得到結果為r值為0.831，而本研究中達瑞生物與貝克曼的化學發(fā)光試劑檢測E2的結果為r值為0.9，本研究的相關性結果比其還要好，所以達瑞生物E2化學發(fā)光試劑的性能與貝克曼E2化學發(fā)光試劑的性能比較接近，達瑞生物E2試劑能滿足臨床檢驗的要求；同時根據(jù)Schmicke等人［19］用PROG化學發(fā)光試劑盒檢測女性不同月經(jīng)周期PROG濃度的評價結果，本研究中達瑞生物PROG試劑盒的靈敏度高、線性范圍廣、精密度好，這些性能明顯能達到要求。

根據(jù) Xiao 和 Wang 等人［20?21］用 LH 化學發(fā)光試劑檢測人血清的結果，本研究中達瑞生物LH試劑盒可報告范圍和貝克曼LH試劑盒的報告范圍一樣，均比其他廠家高，靈敏度及精密度更好。

綜上所述，達瑞生物FSH、LH、PRL這些采用夾心法的化學發(fā)光試劑盒的各方面性能已達到進口產(chǎn)品的性能水平，不同檢測系統(tǒng)檢測結果普遍存在差異的采用競爭法的E2、PROG、TES化學發(fā)光試劑盒各方面性能也均能與進口產(chǎn)品的性能接近，均能滿足臨床檢驗要求。

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Comparison of the performance of the 6 hormone CLIA kits

WANG Xiaoyan1，LI Zhixiong1，DONG Zhining1，LI Ming2，WU Yingsong2★
（1.Guangzhou Darui Biotechnology Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong，China，510665；2.School of Laboratory Medicine and Biotechnology，Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China，510515）

Objective To compare the performance of the six hormone CLIA kit from Guangzhou Darui Biotechnology Co.,Ltd.and Beckman Coulter Commercial Enterprise(China)Co.,Ltd,and provide the basis for the domestic commercial hormone chemiluminescence determination reagent kit replacement of the import one. Methods The minimum detection limit,precision,accuracy and sample comparison test were detected with domestic and imported hormone CLIA kit,respectively.The correlation and consistency of the test results were analyzed. Results The sensitivity of follicle stimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH),estradiol(E2),progesterone(PROG),prolactin(PRL),and testosterone(TES)reagents of homemade were lower than or equal to the reagents of imported.The precision of the six hormone CLIA kit for the homemade was＜8%,compared to the precision of the six hormone CLIA kit for imported＜12%.The linear correlation coefficient r value of each objective were≥0.9. Conclusion The six hormone CLIA kit for homemade has a good correlation and high consistency with the imported kit,can be used to replace the foreign expensive reagents for clinical detection and basic medical research.

Chemiluminescent immunoassay;Follicle stimulating hormone;Luteinizing hormone;Estradiol;Progesterone;Prolactin;Testosterone

廣州市科技計劃項目（201504291007307）

1.廣州市達瑞生物技術股份有限公司，廣東，廣州510665

2.南方醫(yī)科大學檢驗與生物技術學院，廣東，廣州510515

★通訊作者：吳英松，E?mail：yingsongwu@hotmail.com