尿道菌顯色平板的敏感性與特異性驗證

崔海榮，公衍文，索淑會

尿道菌顯色平板的敏感性與特異性驗證

崔海榮，公衍文，索淑會

尿道菌顯色平板；大腸埃希菌；特異性

尿道菌顯色平板是在普通培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加人工合成的特異性的酶底物，經(jīng)目的菌酶系統(tǒng)的酶解作用釋放出顯色原而顯色。具有生化反應(yīng)和分離培養(yǎng)同時進行等特點，從而大大縮短了細(xì)菌鑒定時間。筆者對其敏感性和特異性進行了驗證，并就其臨床實驗室應(yīng)用情況介紹如下。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 分離自2012年1月1日—2012年6月30日原濟南軍區(qū)總醫(yī)院患者送檢的臨床標(biāo)本（中段尿、血液、痰、胸腹水、分泌物等），經(jīng) VITEK－2 compact全自動細(xì)菌鑒定儀及GN鑒定卡（法國梅里埃生物公司產(chǎn)品）鑒定，鑒定符合率均＞90%的革蘭陰性菌共計763株，其中銅綠假單胞菌193株、大腸埃希菌165株、鮑曼不動桿菌138株、肺炎克雷伯菌99株、陰溝腸桿菌34株、嗜麥芽窄食單胞菌25株、黏質(zhì)沙雷菌21株、弗氏枸櫞酸桿菌13株、奇異變形桿菌11株、產(chǎn)氣腸桿菌6株、其他（24種）58株。接種LB肉湯置－80℃冰箱凍存。

1.2 性能驗證 將上述凍存菌株接種血平板，置35℃孵箱培養(yǎng)，次日挑取單個菌落接種尿道菌顯色平板（鄭州安圖生物工程股份有限公司產(chǎn)品，以下簡稱顯色平板），然后置35℃孵箱培養(yǎng)，18～24 h后觀察菌落顏色，菌落呈現(xiàn)紫紅色判定為大腸埃希菌，其他均判定為非大腸埃希菌。以儀器鑒定結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，計算顯色平板鑒定大腸埃希菌的敏感度和特異度。敏感度=顯紫紅色大腸埃希菌株數(shù)/所有大腸埃希菌株數(shù)×100%；特異度=1-顯紫紅色非大腸埃希菌株數(shù)/所有非大腸埃希菌株數(shù)。

1.3 顯色平板用于中段尿培養(yǎng)和血培養(yǎng)陽性報警標(biāo)本中大腸埃希菌的分離鑒定 2013-01-01—2013-12-31所有臨床送檢中段尿細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本及血培養(yǎng)（Bact/ALERT 3D全自動血培養(yǎng)儀，生物梅里埃公司）陽性報警標(biāo)本，均在常規(guī)分離培養(yǎng)［1］基礎(chǔ)上加種尿道菌顯色平板 （一塊7 cm平板可接種四份標(biāo)本），置35℃孵箱過夜培養(yǎng)，分離菌種上機鑒定，同時記錄顯色平板鑒定結(jié)果。

1.4 其他標(biāo)本來源的革蘭陰性菌的顯色 2013-01-01—2013-12-31，臨床送檢其他標(biāo)本分離出的革蘭陰性桿菌，分純同時接種顯色平板，觀察不同種屬革蘭陰性桿菌顯色特點。

2 結(jié)果

2.1 尿道菌顯色平板鑒定大腸埃希菌的敏感度和特異度 顯色平板鑒定大腸埃希菌的敏感度為97.6%，有4株大腸埃希菌未顯色；特異度為97.8%，僅有13株弗氏枸櫞酸桿菌顯紫紅色，與以往報道相符［2］。

2.2 尿道菌顯色平板用于中段尿培養(yǎng)和血培養(yǎng)陽性報警標(biāo)本中大腸埃希菌的分離鑒定結(jié)果 尿路感染和血流感染病原菌中大腸埃希菌所占比例分別是 33.1%（179/540）和 29.8%（57/191），顯色平板直接分離鑒定中段尿培養(yǎng)和血培養(yǎng)陽性報警標(biāo)本中大腸埃希菌的敏感度和特異度分別為99.6%和99.4%，詳見表1。

表1 尿道菌顯色平板的臨床應(yīng)用結(jié)果

2.3 其他標(biāo)本來源的革蘭陰性菌的顯色情況 其他腸桿菌科細(xì)菌大多顯藍(lán)色，少數(shù)不顯色或顯淡褐色（主要是摩氏摩根菌、普羅維登菌、奇異變形桿菌等）；銅綠假單胞菌平板不顯色，但菌落本身可產(chǎn)生色素，可滲入菌落周圍平板中；鮑曼不動桿菌不顯色；嗜麥芽窄食單胞菌顯綠色。

3 討論

大腸埃希菌是目前醫(yī)院感染的主要病原菌之一［3］，本組試驗結(jié)果顯示，尿道菌顯色平板對其鑒定具有很高的敏感度（97.6%）和特異度（97.8%），對尿路感染和血流感染病原菌中大腸埃希菌分離鑒定的敏感度和特異度分別達99.6%和99.4%。因此其能夠基本滿足臨床實驗室分離鑒定大腸埃希菌的需要。個別菌種和菌株，尤其是弗氏枸櫞酸桿菌，顯色結(jié)果可造成困擾，需要引起實驗室人員的重視，注意從標(biāo)本來源、菌體形態(tài)、菌落形態(tài)等方面注意區(qū)分，必要時還需上機鑒定。

尿道菌顯色平板分離鑒定大腸埃希菌，其優(yōu)勢在于成本低廉，并且生化反應(yīng)和分離培養(yǎng)同時進行［4］，非常符合分級報告的要求（對大腸埃希菌引起的感染，二級報告可提前至少半天時間報告到種），適合重癥患者的降階梯治療的需要。另外，目前臨床微生物實驗室一般細(xì)菌鑒定和藥敏試驗同時進行，藥敏試驗藥物組合的選擇十分關(guān)鍵，在菌落分純的同時接種顯色平板，首先，分離的大腸埃希菌可直接鑒定，其次，其他革蘭陰性菌可根據(jù)顯色情況以及菌落和菌體特點，方便區(qū)分腸桿菌科細(xì)菌、銅綠假單胞菌、不動桿菌等，非常有助于藥敏組合的選擇。因此，建議推廣使用尿道菌顯色平板。

［1］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.南京：東南大學(xué)出版社，2006：743-744.

［2］楊自副，陳默蕊.定位顯色培養(yǎng)基在細(xì)菌快速初步鑒定中的應(yīng)用［J］. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（7）：760-762.

［3］陳國敏，王東辰，李曉霞，等.大腸埃希菌的分布及耐藥性分析［J］. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（10）：2356-2357.

［4］吳 慶，陳櫟江，黎 麗，等.科瑪嘉大腸埃希菌顯色培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用評價［J］. 溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，39（5）：485-486.

R446．5

B

10．14172/j．issn1671－4008．2017．09．019

250031山東濟南，原濟南軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科（崔海榮，公衍文，索淑會）

［2017－02－06 收稿，2017－03－08 修回］ ［本文編輯：吳 蓉］