4696例人乳頭瘤病毒感染基因分型檢測(cè)及分析

胡新年+歐文岳+龍輝+歐陽(yáng)慧

[摘要] 目的 探討清遠(yuǎn)地區(qū)4696例婦科門診和體檢中心就診人群人乳頭瘤病毒的感染狀況和基因亞型的分布特征。 方法 采用HPV-DNA核酸分子快速雜交基因分型方法對(duì)就診婦女的陰道分泌物進(jìn)行HPV DNA分型檢測(cè)。 結(jié)果 在4696名婦女中，檢測(cè)出陽(yáng)性的患者有831例，陽(yáng)性率為17.70%，其中有342人感染兩種及兩種以上亞型，主要以高危型HPV感染為主。HPV 52和HPV 16是最常見(jiàn)的感染亞型，在感染者中分別占25.5%和13.5%。婦科門診就診的高危人群組的HPV感染率為20.25%，較體檢組感染率12.63%高。各年齡階段HPV感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 清遠(yuǎn)地區(qū)女性HPV的感染率為17.7%，且以高危型感染為主，其中最為常見(jiàn)的感染亞型為HPV 52。

[關(guān)鍵詞] 人乳頭瘤病毒；雜交；感染；高危型

[中圖分類號(hào)] R752 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）20-20-04

Genotyping and analysis of human papillomavirus infection in 4696 cases

HU Xinnian1 OU Wenyue2 LONG Hui1 OUYANG Hui1

1.Genetic Laboratory Diagnosis Center of Prenatal Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan，Qingyuan 511500，China；2.People's Hospital of Qingyuan Guangdong，Qingyuan 511500，China

[Abstract] Objective To investigate the infection status and gene subtype distribution of HPV in 4696 cases of gynecological outpatients and physical examination centers in Qingyuan. Methods HPV DNA typing test was performed by using the HPV-DNA nucleic acid molecule fast hybridization method to detect the vaginal secretions of women. Results In 4，696 women，831 were positive， with a rate of 17.70%.In addition，there were 342 women infected with two or more subtypes，which mainly in high-risk HPV infection.HPV 52 and HPV 16，the most common subtypes，accounted for 25.5% and 13.5% respectively in these people.The rate of HPV infection in the high-risk group was 20.25%，higher than that in the physical examination group （12.63%）.There were no statistically significant differences in HPV infection rates among the various age groups（P>0.05）. Conclusion The infectious rate of female HPV in Qingyuan area was 17.7%，mainly in high-risk infection type.The most common infection subtype was HPV 52.

[Key words] HPV；Hybridization；Infection；High risk type

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一種DNA病毒，屬于乳頭多瘤空泡病毒科（papovaviridae），乳頭瘤病毒屬，主要感染人類表皮和黏膜鱗狀上皮等部位，HPV在不同部位引起的病變是不一的，如在表皮引起的增生性病變稱為“疣”，感染黏膜鱗狀上皮則主要引起增生[1-2]。宮頸癌是全世界發(fā)病率和死亡率較高的女性生殖道惡性腫瘤之一，并且每年的增長(zhǎng)率達(dá)到2%～3%，在我國(guó)每年就有將近13.15萬(wàn)例新增患者，我國(guó)宮頸癌的發(fā)生占世界總新發(fā)生率的28%，且目前已有研究表明女性感染HPV與宮頸癌的發(fā)生存在一定關(guān)聯(lián)[3-6]。

目前HPV已經(jīng)確定的亞型有200多種，并根據(jù)其病變部位和致病力強(qiáng)弱分為低危型和高危型，兩者都能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖，且在臨床上對(duì)人體有增殖樣損傷，但兩者基因在人體內(nèi)功能有著明顯的差異，HPV低危型在感染過(guò)程中雖然有HPV病毒的釋放，但是其病毒基因不會(huì)整合到宿主細(xì)胞DNA中，而HPV高危型能夠?qū)⑵銬NA整合到宿主細(xì)胞內(nèi)的DNA中，并且表達(dá)癌蛋白，進(jìn)而整合到宿主周期蛋白中，從而抑制宿主抑癌基因的作用，從而導(dǎo)致細(xì)胞癌變。醫(yī)院常見(jiàn)檢測(cè)的低危型（非癌相關(guān)型）主要有1、2、3、4、7、10、27、40、42、43等，這些與尋常疣、扁平疣等相關(guān)，很少導(dǎo)致癌癥[7]。高危型（癌相關(guān)型）又分為兩種：（1）疣狀表皮發(fā)育不良（EV）-HPV相關(guān)型：HPV 5、8、9、12、14、15、17、19～25等。（2）生殖道癌前病變/癌-HPV型：HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59等，這些高危型HPV的感染通常與惡性腫瘤密切相關(guān)，其中HPV 16和HPV18是與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[8-9]。高危型HPV持續(xù)性感染的發(fā)生是宮頸癌發(fā)生的必要因素，同時(shí)也和陰部腫瘤以及外生殖器相關(guān)的惡性腫瘤發(fā)生有一定關(guān)系[10]。endprint

為了解清遠(yuǎn)市婦女感染HPV的狀況，不同年齡階段的感染分布規(guī)律以及各常見(jiàn)HPV亞型感染分布狀況，特地收集2016年來(lái)我院檢查的4696位女性資料進(jìn)行分析，受檢女性來(lái)個(gè)不同區(qū)域、不同年齡以及不同職業(yè)，具有隨機(jī)性，能夠代表清遠(yuǎn)市婦女的健康狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1～12月在我院婦科門診和常規(guī)體檢的4696例居住在清遠(yuǎn)不同地區(qū)的女性，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。入選標(biāo)準(zhǔn)：醫(yī)生開(kāi)出HPV DNA檢測(cè)項(xiàng)目即作為研究對(duì)象，選取其宮頸刷片標(biāo)本，年齡分布在16～64歲之間，所有研究對(duì)象均有性生活史、非月經(jīng)期且檢查前24h無(wú)性生活；排除標(biāo)準(zhǔn)：選取標(biāo)本細(xì)胞較少、有子宮切除或者宮頸手術(shù)者。

資料整理：將2017年本實(shí)驗(yàn)室封存的檢測(cè)膜條進(jìn)行分類整理統(tǒng)計(jì)，分別按照感染的不同亞型（23種）、不同年齡（16～64歲）、就診原因（婦科門診和健康體檢）以及感染種類（單種和多重感染）進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)并結(jié)合t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

高危組和體檢組的區(qū)分 高危組包括存在不規(guī)則陰道出血或者接觸性陰道破損的婦女或者有其它不適癥患者。體檢組包括我院體檢中心接待健康體檢的清遠(yuǎn)常住婦女。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集 由婦科醫(yī)生用亞能生物科技有限公司提供的專門采集宮頸脫落細(xì)胞采集器從患者體宮頸內(nèi)進(jìn)行采集。醫(yī)生通過(guò)窺陰器或者陰道擴(kuò)增器將女性宮頸暴露，然后用無(wú)菌棉簽將分泌物擦拭干凈，再用宮頸刷按照同一方向旋轉(zhuǎn)4～5圈，然后放置專用保存管內(nèi)并且折斷保存送檢。

1.2.2 檢測(cè)試劑與儀器 深圳市亞能生物技術(shù)有限公司提供的人乳頭瘤病毒23型檢測(cè)試劑盒；由美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的real-time PCR system進(jìn)行擴(kuò)增；全自動(dòng)核酸分子雜交儀（YN-H18）進(jìn)行雜交。

1.2.3 檢測(cè)方法 檢測(cè)方法：PCR-反向斑點(diǎn)雜交法：將送檢標(biāo)本用3mL吸管充分混勻，吸取1mL左右混勻液至1.5mL EP管內(nèi)，在13 000rpm條件下離心10min去上清，加入100μL裂解液混勻，100℃條件下加熱10min，13 000rpm離心10min，取5μL上清加入PCR試劑內(nèi)，離心機(jī)內(nèi)瞬離，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增完成然后在全自動(dòng)雜交儀上雜交顯色。

結(jié)果判讀：該方法主要檢測(cè)23種亞型，分別為：HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、81、82、83。每張膜條上均有質(zhì)控IC點(diǎn)，只有IC點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)點(diǎn)，才說(shuō)明實(shí)驗(yàn)有效。哪個(gè)數(shù)字出現(xiàn)藍(lán)色點(diǎn)就代表感染哪種亞型的HPV。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0版對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同亞型HPV在感染婦女群體內(nèi)的分布情況

2016年1～12月在我院就診檢查HPV患者共4 696例，其中檢測(cè)出陽(yáng)性的患者有831位，陽(yáng)性率為17.70%。共檢測(cè)到23種亞型，其中高危型18種，分別包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83，低危型5種，分別為6、11、42、43、81，其中HPV各高危型感染例數(shù)共有940例，低危型例數(shù)共有140例，其中包括雙重感染者和多重感染者，應(yīng)用t檢驗(yàn)方法對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)兩組數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.25，P<0.01），由此可見(jiàn)，清遠(yuǎn)地區(qū)婦女主要以HPV高危型感染為主。而在HPV高危型感染的患者中，又以HPV 16、52、58這三種高危亞型感染最為常見(jiàn)，分別占HPV總感染例數(shù)的13.5%、25.5%、12.8%。HPV低危型感染則以HPV 81最為常見(jiàn)，占HPV總感染數(shù)的7.4%，而在各低危型感染患者中所占的比例為57.1%。見(jiàn)表1。

2.2 高危組和體檢組HPV基因亞型分布情況

來(lái)我院檢測(cè)HPV的4696例婦女分別來(lái)自婦科門診和體檢中心的，其中門診人數(shù)為3120例，常規(guī)體檢的為1576例。婦科門診的患者感染HPV例數(shù)為632例，檢出率為20.25%。體檢人員中共檢測(cè)出199位HPV感染者，檢出率為12.63%。通過(guò)χ2檢驗(yàn)將兩組數(shù)據(jù)比較分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.253，P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 HPV在不同年齡階段檢出率

來(lái)我院受檢的4696例女性年齡分布于16～65歲之間，21～40歲年齡階段檢測(cè)者居多，占所有檢測(cè)者的65.65%。其中26～30歲和31～35歲這兩個(gè)年齡階段感染率最高，分別為20.94%和18.92%。46歲以上的女性也是HPV感染高發(fā)人群，有786例女性受檢，陽(yáng)性率高達(dá)22.01%。但是各年齡階段之間HPV感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.25，P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 HPV多重感染在各年齡階段的分布情況

通過(guò)臨床檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，許多女性不是單純感染單種亞型HPV，而是感染兩種及兩種以上，有324例感染2種亞型HPV，49例感染3種及以上。從數(shù)據(jù)中可以看出，低于20歲的HPV感染者中，多重感染患者占了74.19%。見(jiàn)表4。

3 討論

宮頸癌是世界上死亡率高和較為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，而HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因之一，并且其主要發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[11]。有研究表明，在已發(fā)現(xiàn)的200多種HPV亞型中有30多種是與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，所以快速有效的HPV檢測(cè)和分型，從而能夠有效地治療和關(guān)注，從而對(duì)HPV持續(xù)感染引起的宮頸癌的預(yù)防有著重要的作用[12-13]。

通過(guò)本調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，在清遠(yuǎn)地區(qū)婦女體內(nèi)感染的HPV 亞型中，HPV 52（高危型）的感染率最高，占HPV總感染率的25.5%。目前已有研究表明在全世界宮頸癌患者體內(nèi)HPV 52的檢出率排在第七位，同時(shí)HPV 52也是導(dǎo)致亞洲宮頸癌的主要因素之一。其次是HPV 16和HPV 58，HPV 16的檢出率為13.5%，它是所有亞型中研究最為清楚的，目前其流行特點(diǎn)和分子結(jié)構(gòu)已經(jīng)研究清楚，是宮頸癌和肛門生殖器腫瘤（如肛門癌、陰莖癌和外陰癌等）的必要致病因素，同時(shí)也有研究證明其與口咽癌以及頭頸部腫瘤的發(fā)生存在相關(guān)性[14]。HPV 58是亞洲正常和非正常宮頸細(xì)胞的主要感染亞型之一，也是地區(qū)性宮頸癌發(fā)生的高危因素之一，在我院受檢感染婦女體內(nèi)的比率為12.8%。endprint

通過(guò)表3調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)，在清遠(yuǎn)地區(qū)各年齡組之間HPV的感染率無(wú)明顯差異?？赡茉蚴请S著社會(huì)的發(fā)展，女性發(fā)生性行為的年齡降低，從而導(dǎo)致低年齡的感染患者增加，高年齡組隨著年紀(jì)的增長(zhǎng)，機(jī)體免疫力下降，許多患者可能是出現(xiàn)宮頸病變或者其它宮頸癥狀前來(lái)就診，從而導(dǎo)致HPV的感染率升高[10]。

清遠(yuǎn)地區(qū)宮頸癌發(fā)生的高危人群較多，多重感染率較高，且不同年齡階段均有分布。在研究數(shù)據(jù)中顯示年齡小于20歲的HPV感染者中，多數(shù)感染兩種及兩種以上亞型，且為多種高危亞型聯(lián)合感染。但目前有研究表明，HPV的多重感染僅僅能夠增加宮頸的病變，與增加宮頸癌的發(fā)生率無(wú)直接密切的關(guān)系[12-15]。

從本文研究可以看出，清遠(yuǎn)市婦女主要以高危型HPV感染為主，尤其是HPV 52、HPV 16、HPV 58三種亞型。且各年齡階段女性感染HPV的概率沒(méi)有明顯的區(qū)別，因此所有女性都是高危易感人群。目前世界上的疫苗只能針對(duì)16、18兩種亞型，所以其他高危型也需要引起重視[11]。在生活中主要以預(yù)防為主，加大宣傳力度，提升婦女對(duì)HPV的了解與認(rèn)識(shí)，注意個(gè)人衛(wèi)生，對(duì)青春期女性這一群體進(jìn)行性知識(shí)教育，定期進(jìn)行HPV和宮頸細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，從而降低女性宮頸癌發(fā)生的概率，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

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