紙片法快速檢測(cè)生活飲用水中總大腸菌群的探討

許晶

紙片法快速檢測(cè)生活飲用水中總大腸菌群的探討

許晶

目的探討使用紙片法快速檢測(cè)生活飲用水中大腸菌群的可行性。方法使用紙片法與多管發(fā)酵法同時(shí)檢測(cè)本地區(qū)收集的水樣106份，對(duì)兩種方法對(duì)大腸菌群的檢出率進(jìn)行比較。結(jié)果在106份生活飲用水水樣中，多管發(fā)酵法和紙片法均檢出總大腸菌群陽(yáng)性2份，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論紙片法可以達(dá)到快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便地檢測(cè)總大腸菌群的目的，可以用于快速、便捷的檢測(cè)生活飲用水。

紙片法；快速檢測(cè)；生活飲用水；大腸菌群

作者單位：430100 武漢，武漢市蔡甸區(qū)疾病預(yù)防控制中心

生活飲用水與居民的身體健康密切相關(guān)，大腸菌群是我國(guó)生活飲用水中最為常見(jiàn)的細(xì)菌[1]。根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行的《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB5749-2006中明確規(guī)定總大腸菌群不得檢出，菌落總數(shù)不得高于100 CFU/mL[2]。紙片法檢測(cè)細(xì)菌（如大腸菌群等）在餐飲行業(yè)中已經(jīng)較為常用，與傳統(tǒng)的發(fā)酵法相比，紙片法具有快速、便捷的特點(diǎn)[3]。但在紙片法對(duì)大腸菌群檢出的靈敏度上仍有爭(zhēng)議。我單位采集來(lái)自本地區(qū)（包括下屬鄉(xiāng)鎮(zhèn)）的生活飲用水，分別用紙片法及多管發(fā)酵法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩種方式檢出的總大腸菌群數(shù)?，F(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本單位從本區(qū)所屬的各個(gè)街道、鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集不同的飲用水水樣106份，其中來(lái)自本區(qū)各街道的水樣74份，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)水樣32份。將每份水樣平均分為兩份，分別使用紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 紙片法 本次試驗(yàn)選用水質(zhì)大腸菌群檢驗(yàn)紙片（十五管法）（生產(chǎn)廠家：廣州綠洲生化科技股份有限公司；產(chǎn)品編號(hào)：BD104）。（1）接種：用10 mL滅菌吸管吸取10 mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共加5個(gè)大紙片（濃度為10）；用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL水樣加到小紙片中，共加5個(gè)小紙片（濃度為1）；另取1 mL水樣加到9 mL滅菌生理鹽水中混勻，用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL（即0.1 mL水樣），加到最后5片小紙片中（濃度為0.1）。（2）培養(yǎng)：將接種好的紙片（每一份水樣共計(jì)15張）放于培養(yǎng)箱中，恒溫37oC培養(yǎng)24 h。

1.2.2 多管發(fā)酵法 發(fā)酵法按照《生活飲用水衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 微生物指標(biāo)》GB/T5750.12-2006[4]以及《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB5749-2006規(guī)定執(zhí)行。大體分為3步：（1）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：接種管內(nèi)裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液并倒置一小套管，取10 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1 mL水樣注入到9 mL滅菌生理鹽水中，混勻，用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL（即0.1 mL水樣）接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，每一稀釋度接種5管。將接種管置于37oC培養(yǎng)24 h，如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸的報(bào)告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，繼續(xù)以下步驟。（2）分離培養(yǎng)：將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于37oC培養(yǎng)18 h-24 h，觀察菌落形態(tài)，挑取有金屬光澤的深紫黑色菌落；不帶或略帶金屬光澤的紫黑色菌落；中心較深的淡紫紅色菌落做革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。（3）證實(shí)試驗(yàn)：經(jīng)上述涂片染色鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌者，同時(shí)接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，經(jīng)37oC培養(yǎng)24 h產(chǎn)酸又產(chǎn)氣者，即證實(shí)為總大腸菌群陽(yáng)性。

1.3 結(jié)果判讀和報(bào)告

1.3.1 紙片法 觀察每片試紙的顏色變化，若試紙紙片變黃或在黃色上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表現(xiàn)為大腸菌群陽(yáng)性，若試紙紙片保持紫藍(lán)色不變或在紫藍(lán)色上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，但周?chē)鷽](méi)有黃色出現(xiàn)均表現(xiàn)為大腸菌群陰性。根據(jù)陽(yáng)性反應(yīng)紙片數(shù)，查MPN表可得出水樣中大腸菌群的MPN值。

1.3.2 多管發(fā)酵法 根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100 mL水樣中的總大腸菌群MPN值

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩種檢驗(yàn)方式結(jié)果比較

2 結(jié)果

本次檢測(cè)生活飲用水中總大腸菌群，共計(jì)采集水樣106份，檢驗(yàn)106份。其中紙片法檢驗(yàn)水質(zhì)達(dá)標(biāo)104份，水質(zhì)不達(dá)標(biāo)2份，達(dá)標(biāo)率為98.11%，陽(yáng)性率為1.89%；發(fā)酵法水質(zhì)達(dá)標(biāo)104份，水質(zhì)不達(dá)標(biāo)2份，達(dá)標(biāo)率為98.11%，陽(yáng)性率為1.89%。兩種檢驗(yàn)方式結(jié)果相同，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。兩種方式檢測(cè)總大腸菌群的MPN值見(jiàn)表1。

本次的水質(zhì)檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)本區(qū)大部分地區(qū)生活飲用水水質(zhì)符合國(guó)家要求，仍有部分地區(qū)生活飲用水水質(zhì)不符合國(guó)家的衛(wèi)生安全標(biāo)準(zhǔn)，這部分衛(wèi)生安全隱患主要集中于較偏遠(yuǎn)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

3 討論

生活飲用水關(guān)系到居民們的身體健康，嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生活飲用水進(jìn)行檢測(cè)，分析飲用水是否安全衛(wèi)生是本單位的工作之一[5-7]。探求快速、有效的檢測(cè)方法，是我們的目標(biāo)。

紙片法與傳統(tǒng)多管發(fā)酵法檢測(cè)生活飲用水中的總大腸菌群陽(yáng)性比率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)明顯差異，紙片法對(duì)大腸菌群的檢驗(yàn)靈敏度不弱于多管發(fā)酵法，兩者相比檢驗(yàn)出來(lái)的水質(zhì)MPN值也相差不大。以上結(jié)果說(shuō)明紙片法與傳統(tǒng)的發(fā)酵法對(duì)于總大腸菌群的檢出率基本一致。但是與多管發(fā)酵法相比，紙片法檢測(cè)總大腸菌群的測(cè)定周期更短，所用材料更容易得到，對(duì)于環(huán)境及操作的要求也更簡(jiǎn)單。更適用于快速、大批量水樣的檢驗(yàn)，及周?chē)h(huán)境復(fù)雜、不能完全達(dá)到無(wú)菌條件時(shí)的檢驗(yàn)。

總之，紙片法可以達(dá)到快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)總大腸菌群的目的，而且檢測(cè)的靈敏度，與傳統(tǒng)的發(fā)酵法相比無(wú)明顯差異。

1 焦勇霞.大腸菌群快速檢測(cè)方法探討.山西化工,2016(1):51-53.

2 謝雪欽.兩種方法測(cè)定菌落總數(shù)和大腸菌群的比較研究.食品工業(yè),2015(10): 283-285.

3 蔡盡忠.大腸菌群快速檢測(cè)方法研究進(jìn)展.生命科學(xué)儀器,2015(2): 14-18.

4 王琳.生活飲用水大腸菌群快速紙片法和多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果比較.臨床合理用藥雜志,2015(8): 166.

5 李儉峰.大腸菌群紙片法與發(fā)酵法檢測(cè)食具的結(jié)果比較.中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生,2012(3): 117-118.

6 王正革.生活飲用水大腸菌群檢測(cè)紙片法快速檢測(cè)與發(fā)酵法的結(jié)果對(duì)比.醫(yī)學(xué)信息,2012,25(5): 361.

7 趙紅,蘇靜,梁煒,等.紙片培養(yǎng)法與平板培養(yǎng)法監(jiān)測(cè)牙科水路細(xì)菌污染的比較研究.中國(guó)消毒學(xué)雜志,2015,32(5):489-490.

Study on rapid detection of total coliform bacteria in drinking water by paper strip method

Jing XU
Disease Prevention and Control Center of Caidian District,Wuhan 430100,China

ObjectiveTo investigate the feasibility of rapid detection of coliform bacteria in drinking water using paper strip method.MethodsSimultaneous detection of 106 samples of water collected in the region by using paper strip and multiple-tube fermentation.The detection rate of coliform bacteria by two methods were compared.ResultsIn 106 drinking water samples,2 samples with total coliform bacteria positive detected by the multiple-tube fermentation and the paper strip method,and there was no statistically significant difference between the two groups.ConclusionThe paper strip method can quickly,accurately and conveniently detect the total coliform bacteria,and can be used to detect drinking water quickly and conveniently.

Paper strip method; Rapid detection; Drinking water; Fecal coliform