響應(yīng)面法優(yōu)化臘肉酶解工藝條件

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(1.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,四川綿陽 621010; 2.肉類加工四川省重點實驗室,四川成都 610016)

響應(yīng)面法優(yōu)化臘肉酶解工藝條件

王艷蓉1,王衛(wèi)2,黃業(yè)傳1,*,劉芝君1,蔣萍1

(1.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,四川綿陽 621010; 2.肉類加工四川省重點實驗室,四川成都 610016)

為探究臘肉最佳酶解工藝,為其進一步深加工奠定理論基礎(chǔ)。以川味臘肉為原料,采用堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味酶及動物蛋白酶對其進行酶解,以水解度(Degree of hydrolysis,DH)為測定指標(biāo),確定中性蛋白酶與風(fēng)味酶的復(fù)配酶為最佳用酶;選取中性蛋白酶與風(fēng)味酶的配比、料液比、加酶量、時間、pH及溫度進行單因素實驗,再在此基礎(chǔ)上,以水解度為響應(yīng)值,采用響應(yīng)面法優(yōu)化工藝條件,確定最佳酶解條件為中性蛋白酶與風(fēng)味酶配比為1∶2、自然pH(5.9～6.0),加酶量0.35%、料液比1∶2 (g/mL)、酶解溫度47 ℃,酶解時間5 h。在此條件下,水解度實測值為8.77%,理論值為8.84%,實測值與理論值相差較小。

臘肉,響應(yīng)面法,酶解,水解度

臘肉在我國歷史悠久,是用食鹽等調(diào)味香料將原料肉腌制后,經(jīng)煙熏、晾曬等工藝加工而成的生肉類產(chǎn)品,具有風(fēng)味獨特、保存性好等特點[1]。現(xiàn)在對臘肉的研究主要集中在幾方面:一、改善臘肉加工工藝[2];二、對臘肉風(fēng)味物質(zhì)鑒定[3];三、微生物在臘肉成熟中的作用[4];四、臘肉安全性研究[5];五、臘肉抗氧化方面的研究[6]。

現(xiàn)在臘肉產(chǎn)品形式較單一,為增加其附加值,開展臘肉深加工方面的研究迫在眉睫。研究表明,酶解技術(shù)是先進的風(fēng)味提取技術(shù),能有效改善產(chǎn)物的口感與營養(yǎng)特性;且其作用過程溫和,在加工過程中能最大限度減少臘肉的風(fēng)味損失[7]。目前,在肉制品方面,酶解技術(shù)應(yīng)用于魚類、雞肉[8]、豬骨[9]、豬皮、豬血及火腿[10]等的研究較多,如王文莉等[11]研究酸性蛋白酶酶解大鯢肉的最佳酶解條件及酶解產(chǎn)物的抗氧化作用,結(jié)果表明,酶解的最佳工藝條件為酸性蛋白酶添加量0.4%、底物濃度0.1 g/mL、酶解溫度45 ℃、pH2.0、時間5.5 h,大鯢酶解產(chǎn)物清除羥基自由基和DPPH自由基的能力隨濃度升高而增強;蘇偉等[12]將新鮮豬皮用胃蛋白酶進行酶解,優(yōu)化酶解工藝,研究酶解產(chǎn)物的抗氧化功能,結(jié)果表明,最佳酶解條件為加酶量0.25%、料液比1∶2 (g/mL)、酶解時間1.65 h、酶解溫度41.15 ℃,在此酶解條件下有較好的抗氧化能力,其產(chǎn)物清除·OH的IC50值為6.36 mg/mL;對DNA損傷保護作用的IC50值為1.86 mg/mL。

但酶解技術(shù)在臘肉方面應(yīng)用報道較少,大部分研究集中在腌制品制作過程中的應(yīng)用[13]。因此本實驗以川味臘肉為原料,選五種酶中水解效果最佳的酶與風(fēng)味酶進行復(fù)配,復(fù)配酶作為實驗酶對其進行酶解,旨在改善臘肉酶解物生物活性及酶解液風(fēng)味,得到更多活性肽及氨基酸,來制備風(fēng)味較好的臘肉香精等,為臘肉酶解液的進一步研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

新鮮豬肉 綿陽八品農(nóng)產(chǎn)品開發(fā)有限公司;臘肉 實驗室自制;食鹽;堿性蛋白酶 酶活力200000 U/g,木瓜蛋白酶 酶活力100000 U/g,中性蛋白酶 酶活力200000 U/g,動物蛋白水解酶 酶活力1500 U/g,風(fēng)味蛋白酶 酶活力15000 U/g 所有酶均購于江蘇銳陽生物科技有限公司;甲醛,鹽酸,氫氧化鈉,酚酞等所用其他化學(xué)試劑 均為分析純。

PHS-3CB型pH計 上海越平科學(xué)儀器有限公司;BS223S型電子天平 德國賽多利斯公司(北京);DHG-9053A電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司;FW-200型高速萬能粉碎機 北京中興偉業(yè)儀器有限公司;HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋 常州澳華儀器有限公司;SZ-1型快速混勻器 常州普天儀器制造有限公司;G20-PHOH電磁爐 上海奔騰企業(yè)有限公司;美國布林克曼煙熏爐;真空腌味機 深圳市瑞豐電器有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1 臘肉制作流程與預(yù)處理 稱取適量豬背脊肉切成厚度為4～6 cm的肉條,再用蒸餾水沖洗肉條表面3～5遍后懸掛晾干,備用[14];稱取豬背脊肉重量5%的鹽均勻揉抹在備用的肉條上,揉抹均勻后,將肉條放入滾揉機里,轉(zhuǎn)動25～30 min以促進腌制劑的吸收,之后將肉條在4 ℃左右腌制24 h[14-15]。

將上述腌制好的肉條懸掛進煙熏爐,用柏枝為柴火,利用其不完全燃燒釋放出的植物油脂青煙對肉條進行熏烤,直至肉條表面微微起焦、呈金黃色時,取出掛于通風(fēng)處自然風(fēng)干,進行后熟。

取出臘肉條并用刀刮除肉表面焦黑部分,再用蒸餾水沖洗干凈后用刀削片,切成肉末備用。

1.2.2 臘肉酶解工藝流程 稱取10.00 g臘肉按1∶3 (g/mL)的比例加入蒸餾水→加入0.30%的酶(臘肉質(zhì)量比)→攪拌,混勻→恒溫水浴鍋內(nèi)酶解→100 ℃水浴滅酶15 min→4000 r/min離心20 min→過濾→指標(biāo)測定

1.2.3 酶的選擇 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在水解時,隱藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水氨基會暴露出來,顯示出苦味;選擇復(fù)配酶,讓疏水氨基進一步被水解,而風(fēng)味酶同時具有內(nèi)切和外切兩種活性,可用于脫除水解液苦味,改善水解液風(fēng)味[16]。風(fēng)味酶作為復(fù)配酶之一。根據(jù)文獻[17-18]及前期預(yù)實驗,初步確定各酶的酶解條件,按1.2.2的步驟進行酶解,通過測定臘肉蛋白的水解度,確定水解效果最佳的酶,并與風(fēng)味酶進行復(fù)配,為后續(xù)生產(chǎn)風(fēng)味較好的臘肉香精,提供指導(dǎo)和打下基礎(chǔ)。

1.2.4 臘肉酶解單因素實驗

1.2.4.1 中性蛋白酶與風(fēng)味酶配比 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,料液比1∶3 (g/mL),加酶量為0.30%(臘肉質(zhì)量比),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶按一定比例進行配比(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6),在自然pH(5.9～6.0),50 ℃水浴,酶解4 h后,在100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.4.2 料液比 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,按料液比(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7 g/mL)加入蒸餾水,加酶量0.30%(臘肉質(zhì)量比),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶1∶2配比,在自然pH(5.9～6.0),50 ℃水浴,酶解4 h后,在100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.4.3 加酶量 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,料液比1∶3 (g/mL),按加酶量(0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%、0.40%),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶1∶2配比,在自然pH(5.9～6.0),50 ℃水浴,酶解4 h后,100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.4.4 酶解時間 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,料液比1∶3 (g/mL),加酶量0.30%(臘肉質(zhì)量比),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶1∶2配比,自然pH(5.9～6.0),水浴50 ℃,分別酶解(0、1、2、3、4、5、6 h)后,100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.4.5 酶解pH 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,料液比1∶3 (g/mL),加酶0.30%(臘肉質(zhì)量比),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶1∶2配比,在pH為(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、自然pH),水浴50 ℃,酶解4 h后,100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.4.6 酶解溫度 分別稱取10.00 g備用臘肉肉末,料液比1∶3 (g/mL),加酶0.30%(臘肉質(zhì)量比),中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶為1∶2配比,在自然pH(5.9～6.0),水浴(40、45、50、55、60、65 ℃),酶解4 h后,100 ℃水浴滅酶15 min后離心過濾,取濾液進行水解度測定。

1.2.5 酶解工藝條件的響應(yīng)面實驗設(shè)計 在單因素實驗的基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken設(shè)計原理,以臘肉酶解過程中的水解度為響應(yīng)值,選取加酶量、酶解時間、料液比及溫度為影響因子,進行4因素3水平響應(yīng)面實驗,確定臘肉酶解的最佳工藝參數(shù)。實驗因素水平表見表1。

表1 響應(yīng)面實驗因素水平表Table 1 Factors and levels table of response surface experiment

1.2.6 水解度的測定

表2 各酶粗酶解條件及結(jié)果(平均值±標(biāo)準差)Table 2 The hydrolysis conditions and resultsof each enzyme(mean±SD)

式(1)

采用甲醛滴定法[19-20]測游離氨基態(tài)氮,取酶解液20.00 mL于100 mL容量瓶中,定容,混勻后取10.00 mL稀釋樣品入三角瓶中,加入10.00 mL中性甲醛,再加入2～3滴酚酞指示劑,用0.05 mol/L標(biāo)準NaOH溶液滴定至微紅,同時用10.00 mL蒸餾水代替酶解液做空白對照。記錄所消耗的標(biāo)準NaOH溶液的體積?？偟坑萌詣觿P氏定氮儀,微量凱氏定氮法測定[19]。

式(2)

式(2)中,c為標(biāo)準氫氧化鈉溶液濃度,mol/L;V1為樣品消耗氫氧化鈉標(biāo)準溶液的體積,mL;V0為試劑空白消耗氫氧化鈉標(biāo)準溶液的體積,mL;V為測定時吸取樣品稀釋體積,mL。

1.3數(shù)據(jù)處理

所有實驗均重復(fù)三次,采用Excel、SPSS 13.0和Design Expert 8.0.6對各實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1酶的確定

五種酶在其粗酶解條件下得到的臘肉水解情況如表2,因不同酶對底物的酶切方式不同,使酶解液疏水性等指標(biāo)不同,從而影響水解度[17]。由表2可知中性蛋白酶水解度最高,水解效果最好,因此選擇中性蛋白酶與復(fù)配酶之一的風(fēng)味酶進行復(fù)配,增強水解效果,改善水解液風(fēng)味,為后續(xù)制備風(fēng)味好的臘肉香精產(chǎn)品打下基礎(chǔ)。

2.2中性蛋白酶與風(fēng)味酶的配比對水解度的影響

由圖1可知,隨著配比的增加水解度先增加后減少,在1∶2時,水解度達到最高為6.01%,隨后呈遞減趨勢。說明中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶在1∶2配比時,作用基團范圍相對較大,水解比較充分[18]。綜合考慮實驗結(jié)果以及經(jīng)濟成本,中性蛋白酶與風(fēng)味酶的配比定為1∶2。

圖1 中性蛋白酶與風(fēng)味酶配比對水解度影響Fig.1 Effects of the ratio of neutrase and flavor enzyme on degree of hydrolysis

圖2 料液比對水解度的影響Fig.2 Effect of solid-liquid ratio on degree of hydrolysis

2.3料液比對水解度的影響

由圖2可知,隨著料液比的增加,水解度遞減,在料液比為1∶1 (g/mL)時達到最高,但在此時得到的酶解產(chǎn)物含雜質(zhì)較多稍渾濁,酶解液損失嚴重,不利于后續(xù)檢測和研究。鄧楠[16]研究海產(chǎn)品下腳料酶解料液比時,料液比在1∶1 (g/mL),水解度達到最大,可知料液比對酶解反應(yīng)的影響較大,水分不夠,酶在底物中流動性差,兩者不能充分結(jié)合;而料液比較大時,使底物濃度降低,酶不能得到充分利用。綜合考慮,選擇料液比1∶2、1∶3、1∶4 (g/mL)三個水平進行響應(yīng)面優(yōu)化實驗。

2.4加酶量對水解度的影響

由圖3可知,隨著酶添加量的增加,水解度呈上升趨勢,到0.30%時,增加的幅度變小,趨勢變緩,說明酶濃度已達到飽和。吳爽等[17]用堿性蛋白酶酶解谷朊粉時,隨著酶添加量增大,堿性蛋白酶對谷朊粉的酶解作用也逐漸增加,當(dāng)達到一定值時,變化不明顯,繼續(xù)增加酶添加量對酶解速率影響較小。王嵐等[21]用蛋白酶酶解蝦肉時,隨著酶質(zhì)量分數(shù)的增加,水解度逐漸上升,在0.20%～0.30%之間時,水解度上升較快;而當(dāng)酶質(zhì)量分數(shù)超過0.30%后,水解度上升平緩,與本實驗結(jié)果相似。綜合考慮,選擇0.25%、0.30%、0.35%三個水平做響應(yīng)面優(yōu)化。

圖3 加酶量對水解度的影響Fig.3 Effect of enzyme addition on degree of hydrolysis

2.5酶解時間對水解度的影響

固定加酶量、料液比、pH及酶解溫度,考察酶解時間對水解度的影響。由圖4可知,水解度隨著酶解時間的增加,呈上升的趨勢。在3 h之后,水解度增加的趨勢變緩,可能是因為水解已達到平衡,而在6 h時水解度稍有下降。吳爽等[17]研究時間對谷朊粉酶解的影響時,發(fā)現(xiàn)隨著時間的增長,水解度隨之上升,當(dāng)水解到180 min時,水解度趨于平緩,與本實驗結(jié)論相似。綜合考慮能源節(jié)約等因素,選用3、4、5 h三個水平進行響應(yīng)面優(yōu)化,既不造成能源浪費,又能得到較好的酶解效果。

圖4 酶解時間對水解度的影響Fig.4 Effect of enzymolysis time on degree of hydrolysis

2.6酶解pH對水解度的影響

不同的酶對應(yīng)最適pH范圍不同,酶解時pH會對酶分子極性基團解離狀態(tài)的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響,從而影響酶解反應(yīng)的效果[17]。實驗選用5.5、6.0、6.5、7.0、7.5以及自然pH(5.9～6.0)為實驗水平,固定料液比、加酶量、酶解時間以及溫度,以研究pH對水解度的影響。其結(jié)果如圖5所示,隨著pH的增加,水解度呈遞減趨勢;自然pH在5.5～6.0之間,有較好的水解效果。鄧楠[16]研究海產(chǎn)品下腳料酶解pH影響時,表示時間和溫度等因素也會對水解度產(chǎn)生影響,所以表現(xiàn)出水解度最高對應(yīng)的pH不是精確的在某個值上,但酶在其最適pH范圍內(nèi),酶活力是最強的。綜合考慮,選用自然pH(5.9～6.0)。

圖5 pH對水解度的影響Fig.5 Effect of pH on degree of hydrolysis

2.7溫度對水解度的影響

酶解反應(yīng)的效果與酶解溫度關(guān)系密切,溫度過低,反應(yīng)慢;溫度升高,反應(yīng)速率加快;但溫度過高,會使酶失活,影響酶解反應(yīng)效果[17]。結(jié)果如圖6所示,隨著溫度的上升,水解度先增加后減小,在45～55 ℃變化趨勢不大,55 ℃之后水解度開始降低,酶活性可能受損。王文莉[11]等酶解大鯢肉,隨著溫度的升高,水解度升高,達到一定溫度,水解度達到最大值,再提高溫度,水解度出現(xiàn)下降趨勢。李俊江[22]等對鵝肉進行酶解時,隨著溫度的升高,水解度和酶解液的抗氧化活性逐漸增大,當(dāng)溫度達到50 ℃左右時,水解度和酶解液的抗氧化活性均達到最大值,與本實驗結(jié)果相似。綜合考慮實驗結(jié)果及節(jié)約能源,選擇45、50、55 ℃做響應(yīng)面優(yōu)化。

圖6 酶解溫度對水解度的影響Fig.6 Effect of enzymolysis temperature on degree of hydrolysis

2.8臘肉酶解的響應(yīng)面優(yōu)化

根據(jù)上述單因素實驗結(jié)果,中性蛋白酶與風(fēng)味酶1∶2的配比,選擇自然pH(5.9～6.0),并對酶添加量、料液比、酶解時間、溫度四個因素,按表3進行4因素3水平的Box-Behnken的優(yōu)化實驗設(shè)計,實驗設(shè)計及結(jié)果見表3。

表3 響應(yīng)面分析實驗設(shè)計及結(jié)果(平均值±標(biāo)準差)Table 3 Results of response surface experiments(mean±SD)

表4 響應(yīng)面二次回歸方程模型方差分析結(jié)果Table 4 ANOVA results of quadratic regression model for response surface

注：p<0.05,表示顯著*,p<0.01,表示極顯著**。

采用Design Expert 8.0.6統(tǒng)計軟件對表3實驗數(shù)據(jù)進行回歸擬合分析,得到加酶量、料液比、溫度和時間4個因素的二次多項回歸方程為:

水解度(%)=5.80-0.011A-1.94B+0.29C-0.13D-0.045AB+5.000×10-3AC-0.013AD-0.050BC+0.28BD-0.14CD+0.031A2+0.42B2+0.097C2-0.48D2

對表4回歸系數(shù)進行顯著性分析,結(jié)果表明,B、C、D、BD、B2、D2為極顯著項(p<0.01),CD為顯著項,其他項均不顯著。B的F值最大,其次是C和D,A相對較小,表明四個因素對酶解過程水解度影響的大小順序為B>C>D>A,即料液比>時間>溫度>加酶量。交互作用中,只有BD和CD項有顯著交互作用,因此,料液比和酶解溫度、酶解時間和酶解溫度兩組因素存在明顯交互作用,對兩組因素進行響應(yīng)面分析,考察因素間的交互規(guī)律。

通過響應(yīng)面軟件最優(yōu)組合分析得到臘肉的最佳酶解條件為加酶量0.35%、料液比1∶2 (g/mL)、酶解時間5.00 h、酶解溫度47.00 ℃,最優(yōu)條件下水解度為8.84%。

2.8.1 料液比和酶解溫度間的交互作用分析 圖7為料液比與溫度之間的交互作用,料液比與溫度對水解度影響的交互作用極顯著(p=0.0002);加酶量0.30%,酶解時間為4 h,當(dāng)溫度一定時,隨著料液比的減小,臘肉的水解度呈直線上升趨勢;當(dāng)料液比一定時,隨著溫度的增加,水解度先上升后下降,但總的變化較小,酶解溫度存在臨界值。對酶解溫度臨界值計算,進一步分析酶溫度與料液比的交互規(guī)律,結(jié)果如表5所示,當(dāng)料液比為1∶2 (g/mL)時,臨界溫度為47.83 ℃;料液比為1∶3 (g/mL)時,臨界溫度49.31 ℃;料液比為1∶4 (g/mL)時,臨界溫度為50.79 ℃。在不同料液比,酶解溫度都存在臨界值使水解度有最大值,隨著料液比的增加,臨界溫度增加,水解度最大值減小。表明溫度過高過低都不利于臘肉的酶解,料液比過大使得底物濃度變小,不利于酶解。料液比對水解度的影響明顯大于溫度,反應(yīng)體系的水分可以使蛋白酶分散均勻,與底物充分接觸,保證酶解完全[25]。

表5 不同料液比下酶解溫度對水解度影響的臨界值Table 5 Temperature critical values influencing the degree of hydrolysis under the conditions of different solid-liquid ratio

表6 不同酶解時間下酶解溫度對水解度影響的臨界值Table 6 Temperature critical values influencing the degree of hydrolysis under the conditions of different enzymolysis time

圖7 料液比和溫度對水解度影響的響應(yīng)面圖Fig.7 Response surface graph of temperature and solid-liquid ratio on the degree of hydrolysis

2.8.2 酶解時間和酶解溫度間的交互作用分析 圖8為酶解時間與酶解溫度之間的交互作用,加酶量0.30%、料液比1∶3。等高線呈橢圓形,酶解時間與酶解溫度交互顯著(p=0.0247)。當(dāng)溫度一定時,隨著時間的增長,水解度呈上升趨勢;當(dāng)酶解時間不變時,水解度隨著溫度的增加而先升高后下降,酶解溫度存在臨界值[26]。對不同時間下溫度的臨界值進行求解,進一步分析酶解時間與溫度的交互作用,結(jié)果如表6所示,當(dāng)酶解時間為3 h時,臨界溫度為50.06 ℃;酶解時間為4 h時,臨界溫度49.31 ℃;酶解時間為5 h時,臨界溫度為48.56 ℃。說明在不同酶解時間,酶解溫度都存在臨界值使水解度有最大值,隨著時間增加,臨界溫度減小,水解度的最大值增加。

圖8 酶解時間和溫度對水解度影響的響應(yīng)面圖Fig.8 Response surface graph of temperature and enzymolysis time on the degree of hydrolysis

2.8.3 酶解最佳工藝條件的確定及驗證結(jié)果 為驗證響應(yīng)面所得結(jié)果的可靠性,根據(jù)Design Expert 軟件,預(yù)測出臘肉酶解的最佳工藝條件。并對其進行驗證,酶解所得的平均水解度為8.77%,與預(yù)測值8.84% 基本相符,誤差較小。因此用響應(yīng)面法分析優(yōu)化得到的臘肉酶解條件與實際擬合較好,具有可靠性和實用價值。

3 結(jié)論

通過比較不同蛋白酶對臘肉酶解的效果,選用中性蛋白酶與風(fēng)味酶按1∶2進行復(fù)配,自然pH(5.9～6.0),在單因素實驗的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法對酶解過程中加酶量、料液比、酶解時間、酶解溫度四個因素進行優(yōu)化,得到臘肉酶解的最佳工藝條件為:加酶量0.35%、料液比1∶2 (g/mL)、酶解溫度47 ℃,酶解時間5 h。驗證得到的水解度為8.77%,與預(yù)測值8.84%十分接近。響應(yīng)面法能對臘肉酶解工藝進行較好的優(yōu)化,同時為臘肉酶解物的進一步研究及美拉德反應(yīng)生產(chǎn)香精產(chǎn)品等提供了理論依據(jù)。

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Optimizationofenzymatichydrolysisconditionsforbaconbyresponsesurfacemethod

WANGYan-rong1,WANGWei2,HUANGYe-chuan1,*,LIUZhi-jun1,JIANGPing1

(1.College of Life Science and Engineering,Southwest University of Science and Technology,Mianyang 621010,China; 2.Sichuan Key Laboratory of Meat Processing,Chengdu 610016,China)

To investigate the optimal enzymatic hydrolysis conditions of bacon and to lay theoretical foundation for further processing,the Sichuan bacon was hydrolyzed by alcalase,neutrase,papain,flavor enzyme,and animal protease respectively. The compound enzyme of neutrase and flavor enzyme was the best enzyme for the progress according to the determination of degree of hydrolysis. Single factor tests were conducted to determine the ratio of neutrase and flavor enzyme,solid-liquid ratio,enzyme addition,time,pH,and temperature. The optimal processes conditions were obtained using response surface methodology and the degree of hydrolysis was used as the response value,and the optimum conditions were neutrase-flavor enzyme ratio of 1∶2,original pH(5.9～6.0),enzyme addition of 0.35%,solid-liquid ratio of 1∶2,enzymolysis temperature of 47 ℃,enzymolysis time of 5 h. Under the conditions,the DH could reach 8.77%,which was close to the predicted value of 8.84%.

bacon;response surface method;enzymatic hydrolysis;degree of hydrolysis

2017-05-08

王艷蓉(1993-)，女，在讀碩士研究生，研究方向：肉制品加工與酶工程，E-mail：790010315@qq.com。

*

黃業(yè)傳(1975-)，男，博士，副教授，研究方向：肉制品加工與酶工程，E-mail：563248056@qq.com。

肉類加工四川省重點實驗室開放基金(15-R17)；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目(2016JY0110)。

TS251.9

B

1002-0306(2017)21-0209-07

10.13386/j.issn1002-0306.2017.21.041