劉鳳霞 毛吾蘭?買買提依明 阿卜杜熱伊木江?如則 朱彥劉瑩 張盼盼 阿地力江?伊明**
1.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院人體解剖學教研室(烏魯木齊 830011);2.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院生物學教研室;3.新疆克拉瑪依市人民醫(yī)院
·論 著·
異常黏液質型陽痿病證大鼠陰莖組織中SP、AchE的表達*
劉鳳霞1毛吾蘭?買買提依明2阿卜杜熱伊木江?如則1朱彥劉瑩3張盼盼1阿地力江?伊明1**
1.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院人體解剖學教研室(烏魯木齊 830011);2.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院生物學教研室;3.新疆克拉瑪依市人民醫(yī)院
目的研究異常黏液質型陽痿病證大鼠模型陰莖組織中P物質(SP)、乙酰膽堿酯酶(AchE)的表達與伊木薩克片的影響,探討其生物學意義。方法取100只正常雄性SD大鼠,隨機取10只作為正常對照組(N),余90只是造模組,采用濕寒環(huán)境和飲食方法建立異常黏液質證候大鼠模型,根據(jù)勃起和交配實驗,篩選出44只陽痿病證大鼠模型,并將其隨機分為病證模型組(A1)、病證自然反證組(A2)、病證藥物反證組(A3)。反證后,免疫組化方法檢測陰莖組織中SP、AchE的表達。結果(1)大鼠陰莖組織中SP表達:A1、A2和A3組較N組顯著增高(P<0.05);A3組較A1、A2組顯著降低(P<0.05)。(2)大鼠陰莖組織中AchE表達:A1、A2組較N組顯著降低(P<0.05);A3組較A1組顯著升高(P<0.05)。結論異常黏液質型陽痿病證大鼠模型陰莖組織中SP顯著增高、AchE顯著降低,對證維藥伊木薩克片可能通過下調SP、上調AchE表達對異常黏液質型陽痿病證大鼠模型發(fā)揮作用。
伊木薩克片; 陽萎; P物質; 乙酰膽堿酯酶
陽痿(impotence),也稱勃起功能障礙(erectile dysfunction, ED),是男子最常見的性功能障礙之一,雖然不會危及生命,卻與患者的生活質量、性伴侶關系、家庭和諧息息相關,也是多種身體疾病的重要早期預警因子。歐洲泌尿外科協(xié)會(EUA)ED指南(2015版)中資料顯示, ED在世界各地出現(xiàn)較高的患病率和發(fā)病率[1,2]。維吾爾醫(yī)學(維醫(yī))作為傳統(tǒng)醫(yī)學寶庫中重要成員之一,在男科疾病,尤其是ED、早泄和少、弱精子癥等疾病的診療中有著舉足輕重的作用。本研究團隊前期研究[3-8]以維醫(yī)理論為指導,建立了異常黏液質證候和陽痿病證大鼠模型,其勃起功能和交配能力等明顯減退,對其陰莖組織的形態(tài)學研究發(fā)現(xiàn),水腫、纖維化等炎癥反應明顯,采用對證維藥伊木薩克片干預后,有顯著的修復作用。本研究擬檢測異常黏液質型陽痿病證大鼠陰莖組織中P物質(SP)和乙酰膽堿酯酶(AchE)的表達,并觀察對證維藥伊木薩克片干預后對其的影響,旨在發(fā)現(xiàn)異常黏液質型陽痿更多的發(fā)病機制和藥物的作用靶點。
100只正常的雄性(SD)大鼠,20只正常的雌性大鼠,體質量(200±20)g,均由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供。
人工氣候箱(上海博迅實業(yè)有限公司),阿樸嗎啡(APO,美國Sigma公司),黃體酮(浙江仙琚制藥股份有限公司),雌二醇(寧波市三生藥業(yè)有限公司),伊木薩克片(新疆和田維吾爾藥業(yè)有限責任公司,國藥準字Z65020144,規(guī)格0.5g),鼠抗兔抗體SP、AchE(美國Abcam公司),免疫組化檢測試劑盒(北京中杉金橋公司),DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋公司)。
(一)動物分組和模型的建立
100只正常雄性SD大鼠中,隨機取10只作為正常對照組(N),余90只作為造模組。異常黏液質型陽痿病證大鼠模型的建立及陰莖取材方法見文獻[3-8]。從造模組中篩選出44只陽痿病大鼠模型,并將其分為病證模型組(A1)15只、病證自然反證組(A2)15只和病證藥物反證組(A3)14只。
(二)免疫組化
嚴格按照試劑盒步驟操作,封片后顯微鏡觀察并采集圖像。結果按文獻方法量化[8]。
(三)統(tǒng)計學分析
采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包處理實驗數(shù)據(jù)。計量資料用均數(shù)±標準差(±s)進行統(tǒng)計描述,多組之間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析(ANOVA),檢驗水準α = 0.05。
與N組比較,A1、A2和A3組大鼠陰莖組織中SP表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與A1組比較,A2組大鼠陰莖組織中SP表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);A3組大鼠陰莖組織中SP表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與A2組比較,A3組大鼠陰莖組織中SP表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見圖1、表1。
與N組比較,A1、A2組大鼠陰莖組織中AchE表達明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與A1組比較,A2組大鼠陰莖組織中AchE表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);A3組大鼠陰莖組織中AchE表達明顯增多(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義。與A2組比較,A3組大鼠陰莖組織中AchE表達增多,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見圖1、表1。
維醫(yī)通過2500多年的發(fā)展,汲取了多種醫(yī)學的精華,已經(jīng)形成了完整、獨特的理論體系,系統(tǒng)闡釋了人體與外界的辯證關系,由此生成診治疾病的治療學說和藥物學說[9]。體液學說是維醫(yī)各種病證診斷、分型的核心理論和辨證施治的基礎[10,11]。
圖1 免疫組化檢測大鼠陰莖組織中SP和AchE表達(×400)
表1 免疫組化檢測大鼠陰莖組織SP、AchE表達(±s)
注: 與N組比較,*P<0.05;與A1組比較,△P<0.05;與A2組比較,▲P<0.05
10 31.8±11.7 172.7±44.0 A1 15 258.3±39.5* 92.9±45.0*A2 15 202.3±69.3* 106.3±50.0*A3 14 70.0±25.8*△▲ 147.5±54.6△分組 樣本量(只) SP AchE N
本課題組前期研究[3-8]基于維醫(yī)理論,成功建立了異常黏液質證候和陽痿病證大鼠模型,對其生物學表征、性功能與交配行為、性腺軸、甲狀腺軸、腎上腺軸等生殖生物學和形態(tài)學方面的改變進行了研究,并研究了異常黏液質型陽痿、早泄對證治療特色維藥伊木薩克,研究結果發(fā)現(xiàn)其可增強大鼠勃起功能和性行為,其作用機制涉及神經(jīng)內分泌網(wǎng)絡、NO-cGMP通路等。進一步研究結果發(fā)現(xiàn)異常黏液質型陽痿大鼠模型出現(xiàn)肝細胞損傷及蛋白質和脂代謝的紊亂,陽痿關鍵靶器官(陰莖)形態(tài)學研究,發(fā)現(xiàn)有水腫、纖維化等炎癥反應,對證維藥伊木薩克片干預后,具有顯著的修復作用。
SP在炎癥時的免疫細胞募集環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用,可以調節(jié)免疫功能和炎癥反應[12]。本研究發(fā)現(xiàn),SP在A1組大鼠陰莖組織中表達較N組明顯增多,說明SP可能參與異常黏液質型陽痿病證大鼠陰莖組織炎癥過程。A2組較A1組減少,差異不明顯,但較N組明顯增多,提示去除濕寒環(huán)境、飲食的造模條件,經(jīng)過自然反證后,SP雖有降低,但仍然比正常組大鼠表達水平增高;A3組較A1、A2組明顯減少,說明經(jīng)過對證維藥伊木薩克片干預后,SP表達明顯減少,反證結果明顯優(yōu)于自然反證,提示伊木薩克片可能通過下調陰莖組織中SP表達水平,減輕陰莖組織炎癥反應,對異常黏液質型病證大鼠發(fā)揮作用。
AchE是乙酰膽堿(Ach)的水解酶,其活性增加說明膽堿能神經(jīng)興奮性增高[13]。近年有研究報道[14],膽堿能抗炎通路是一條神經(jīng)-免疫調節(jié)通路,是膽堿能神經(jīng)及其遞質ACh調節(jié)免疫反應的通路,抑制多種促炎因子的產(chǎn)生。炎癥反應時Ach減少,阻礙抗炎效應。 本研究發(fā)現(xiàn),大鼠陰莖組織中AchE表達,A1組較N組顯著降低,提示膽堿能神經(jīng)通路抑制可能促進異常黏液質病證大鼠模型的建立,加劇此模型陰莖組織的炎癥反應;A2組較A1組增高,差異不顯著,但仍較N組顯著降低,提示去除濕寒環(huán)境和濕寒飲食的造模條件,經(jīng)過自然反證,AchE雖然有一定程度的增高,但仍然比正常組大鼠低;A3組較A1組顯著升高,較A2組升高,較N組無顯著差異,提示經(jīng)過對證維藥伊木薩克片干預后,AchE顯著增高,反證結果優(yōu)于自然反證,與正常大鼠無顯著差別,說明伊木薩克片可能通過上調AchE表達,減輕陰莖組織炎癥反應,對異常黏液質證型陽痿大鼠發(fā)揮作用。
綜上所述,異常黏液質型陽痿病證大鼠模型中SP表達顯著增高、AchE表達顯著降低,對證維藥伊木薩克片可能通過下調SP、上調AchE表達調控炎癥反應發(fā)揮作用。
1 中國醫(yī)學百科全書編輯委員會.中國醫(yī)學百科全書維吾爾醫(yī)學分冊. 上海: 上??茖W技術出版社, 2005: 120-124
2 中國中西醫(yī)結合學會男科專業(yè)委員會.勃起功能障礙中西醫(yī)結合診療指南(試行版). 中華男科學雜志 2016;22(8): 751-757
3 阿地力江?伊明, 潘建春, 哈木拉提?吾甫爾, 等. 幾種不同方法建立維醫(yī)異常黏液質陽痿病證模型的研究. 新疆醫(yī)科大學學報 2010; 33(11): 1275-1280
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6 朱彥劉瑩, 買買提祖農(nóng)?買蘇爾, 劉鳳霞, 等. 伊木薩克片對異常黏液質型陽痿病證模型大鼠陰莖組織形態(tài)學的影響. 中國男科學雜志 2015; 29(6): 9-14
7 買買提祖農(nóng)?買蘇爾, 朱彥劉瑩, 劉鳳霞, 等. 異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織形態(tài)學改變的研究. 新疆醫(yī)科大學學報 2015; 38(6): 687-690, 695
8 朱彥劉瑩. 維醫(yī)異常黏液質型陽痿病證模型大鼠性腺軸與NO-cGMP通路改變的實驗研究. 新疆醫(yī)科大學2015
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12 張世紅, 趙晏. P物質的免疫調節(jié)作用. 生理科學進展2002; 33(3): 235-238
13 朱金照, 冷恩仁, 張捷, 等. 白術對大鼠腸道乙酰膽堿酯酶及P物質分布的影響. 中國現(xiàn)代應用藥學 2003; 20(1):14-16
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(2017-04-08收稿)
SP and AchE expression in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rats model and the role of Yimusake*
Liu Fengxia1, Maimaitiyiming Maowulan2,Ruze Abudureyimujiang1, Zhu yanliuying1, Zhang Panpan1, Adilijiang Yiming1**
1Department of Human Anatomy, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi,830011,China;2 Department of Biology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi; 3.The people's hospital of xinjiang Kelamayi
Adilijiang Yiming, E-mail: adljym@163.com
ObstractTo study the roles of Yimusake on SP and AchE expressions in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rats model.MethodsA total of 100 mature male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups. Rats in model group (n = 90) were treated with cold-wet environment and diet, and rats(n = 10) in normal control group with normal environment and diet. Biological parameters and sexual behavior of the rats were observed for 20 weeks until establishment of abnormal phlegmatic syndrome rat model. Through APO erection test,we selected impotence rat model, the rats were randomly divided into 3 groups (A1, A2, A3) and disproved for 2 weeks. The expressions of SP and AchE were detected by immunohistochemistry.Results(1)SP expression in A1、A2、A3 groups were increased compared with that in N group (P<0.05); SP expression in A3 group was decreased compared with that in A1、A2 group (P<0.05).(2)AchE expression in A1、A2 groups were decreased compared with that in N group(P<0.05);Ache expression in A3 group was increased compared with that in A1 group (P<0.05).ConclusionHigher expression of SP and lower expression AchE occurred in penis tissue of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rat model. Yimusake might play key roles in treatment of abnormal phlegmatic syndrome with impotence disease rat model via regulating the SP and AchE expression.
Yimusake; impotence; Substance P; Acetylcholinesterase
10.3969/j.issn.1008-0848.2017.05.001
中國分類號R698.1
資助:國家自然科學基金聯(lián)合基金項目(81160470,81260581)
**通訊作者,E-mail:adljym@126.com