不同T淋巴細(xì)胞亞群在惡性腫瘤患者外周血中的臨床檢測價(jià)值

張燦強(qiáng)，何繼宏，張芳娣，郭劼琳

(1.惠州市惠城區(qū)慢性病防治站，廣東 惠州 516001；2.惠州市第三人民醫(yī)院)

不同T淋巴細(xì)胞亞群在惡性腫瘤患者外周血中的臨床檢測價(jià)值

張燦強(qiáng)1，何繼宏2，張芳娣2，郭劼琳1

(1.惠州市惠城區(qū)慢性病防治站，廣東 惠州 516001；2.惠州市第三人民醫(yī)院)

目的探討惡性腫瘤患者外周血中不同T淋巴細(xì)胞檢測的臨床價(jià)值。方法選擇在我院接受治療的147例惡性腫瘤患者作為觀察組，選擇同期在我院接受體檢的健康人群80例作為對照組，檢測并比較兩組外周血中CD3+、CD4+、CD8+不同亞群T細(xì)胞以及CD4+/CD8+水平差異。結(jié)果觀察組患者治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于對照組(P<0.05)，治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前(P<0.05)，但仍明顯低于對照組(P<0.05)。觀察組患者治療前后CD8+比較及與對照組之間比較均無明顯差異(P>0.05)。觀察組內(nèi)各不同癌癥T淋巴細(xì)胞水平不受腫瘤類型影響。結(jié)論惡性腫瘤患者外周血T細(xì)胞亞群不同指標(biāo)的檢測有助于了解患者的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，從而為患者治療方案的確定和調(diào)整以及治療效果的評估提供參考依據(jù)。

惡性腫瘤；T淋巴細(xì)胞亞群；細(xì)胞免疫功能

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展已經(jīng)被大量研究證實(shí)與腫瘤宿主的免疫狀況密切相關(guān)。有研究[1]指出，在機(jī)體的抗腫瘤機(jī)制中，細(xì)胞免疫發(fā)揮著主要作用。其中外周血T淋巴細(xì)胞是人體抗感染和抗腫瘤反應(yīng)中的免疫活性細(xì)胞之一，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量和功能的變化在很大程度上與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散過程有關(guān)[2]。為了進(jìn)一步了解不同T淋巴細(xì)胞亞群在惡性腫瘤患者外周血的變化情況，并探討其檢測對惡性腫瘤診斷、治療和預(yù)后判斷等方面的意義，我們分別對惡性腫瘤患者和健康對照人群的外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了監(jiān)測和比較，現(xiàn)將具體結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月至2016年6月在我院接受治療的147例惡性腫瘤患者作為觀察組，選擇同期在我院接受體檢的健康人群80例作為對照組。觀察組男84例，女63例；年齡14～79歲，平均(53.6±13.9)歲；其中肺癌54例，乳腺癌42例，食管癌31例，白血病20例。健康對照組中男51例，女29例；年齡13～80歲，平均(50.8±10.6)歲。兩組研究對象年齡、性別組成等一般資料比較均無明顯差異(P>0.05)。

1.2 研究方法

1 2.1 觀察指標(biāo)

所有惡性腫瘤患者均接受對癥治療，包括腫瘤切除、放療、化療等，對照組不做處理。觀察兩組之間治療前后外周血T細(xì)胞亞群分布情況，以及不同類型腫瘤患者治療前后T細(xì)胞亞群分布情況。

1.2.2 儀器與試劑

儀器：37℃恒溫水浴箱、微量加樣器、低速離心機(jī)、FACSA ria流式細(xì)胞儀系統(tǒng)。試劑：巰基化藻紅蛋白染色的羊抗鼠Ig抗體；純化單克隆鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+；紅細(xì)胞裂解液；PBS；1%多聚甲醛。

1.2.3 檢測方法

取檢測對象外周血2mL置于加入EDTA抗凝試管中，充分混勻，分別取100μL置于4個含有Ependorf管中(空白對照、CD3+、CD4+、CD8+)，空白對照管中加入PBS10μL，之后3個試管中加入10μL相應(yīng)純化的鼠抗人單克隆抗體，置于37℃恒溫水浴箱中孵育1h。PBS清洗細(xì)胞后離心，CD3+、CD4+、CD8+管中分別加入巰基化藻紅蛋白染色的羊抗鼠Ig抗體10μL，空白對照管中加入PBS10μL，室溫條件下避光進(jìn)行孵育。洗滌離心細(xì)胞后，分解加入紅細(xì)胞裂解液2mL，洗滌后將上清液棄去，加入1%多聚甲醛0.5mL將細(xì)胞固定，置于4℃冰箱中避光保存待測。24h內(nèi)應(yīng)用FACSA ria流式細(xì)胞儀系統(tǒng)進(jìn)行檢測，以陽性細(xì)胞百分率表示CD3+、CD4+、CD8+含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者外周血T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

健康人群組及惡性腫瘤組患者在治療前后兩個時(shí)間點(diǎn)CD3+、CD4+、CD8+不同亞群T細(xì)胞以及CD4+/CD8+水平檢測結(jié)果具體見表1。根據(jù)表1可知，觀察組患者治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于對照組(P<0.05)；觀察組患者治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前(P<0.05)，但仍明顯低于對照組(P<0.05)。觀察組患者治療前后CD8+比較及與對照組之間比較均無明顯差異(P>0.05)。

與對照組比較，*P<0.05；與治療前比較，△P<0.05

2.2 不同類型腫瘤患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

肺癌、食管癌、乳腺癌和白血病不同類型惡性腫瘤患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較具體見表2。根據(jù)表2可知，不同類型惡性腫瘤患者治療后CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+水平與治療前相比均明顯提高(P<0.05)，而CD8+含量無明顯變化(P>0.05)。經(jīng)方差分析，各腫瘤類型患者之間無顯著差異(P均>0.05)。

表2 不同類型腫瘤患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

與治療前比較，*P<0.05

3 討 論

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展在現(xiàn)代腫瘤免疫學(xué)說中與機(jī)體的免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫應(yīng)答密切相關(guān)，研究指出，T細(xì)胞亞群的細(xì)胞免疫是機(jī)體抗感染、抗腫瘤應(yīng)答中的主要免疫應(yīng)答形式，而T淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)控作用就是通過各種功能不同的T淋巴細(xì)胞亞群來發(fā)揮的[3]。CD3+T細(xì)胞代表了成熟的淋巴細(xì)胞以及總體T淋巴細(xì)胞的水平，其是細(xì)胞免疫中的主要活性細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞被稱為輔助性T細(xì)胞，其主要通過不同細(xì)胞因子的分泌和第二活化信號的提供來輔助體液免疫和細(xì)胞免疫。但CD4+細(xì)胞并不被作為是重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，反而對靶細(xì)胞的凋亡有直接的影響作用。CD8+T細(xì)胞則具有細(xì)胞毒性和免疫抑制作用。CD4+/CD8+比值則反映的是機(jī)體細(xì)胞免疫功能的狀態(tài)，正常情況下其保持在動態(tài)平衡的狀態(tài)，表示機(jī)體細(xì)胞免疫功能相應(yīng)處于穩(wěn)定狀態(tài)，但二者的比值降低時(shí)則表示免疫抑制的出現(xiàn)，此時(shí)容易發(fā)生腫瘤。CD4+/CD8+比值的變化往往可以敏感地反應(yīng)出機(jī)體免疫功能的變化，其比值的下降被認(rèn)為是提示疾病惡化和預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一[4]。

近年來大量研究均證實(shí)腫瘤患者外周血中的不同T淋巴細(xì)胞亞群含量會發(fā)生變化，主要原因是惡性腫瘤的出現(xiàn)及其分泌的某些因子會直接打亂CD3+、CD4+、CD8+含量和CD4+/CD8+比值的平衡，尤其是對CD4+/CD8+比值的影響會導(dǎo)致機(jī)體免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)的紊亂[5]。本研究結(jié)果顯示的觀察組患者治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于對照組的這一結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，提示惡性腫瘤患者普遍存在免疫功能降低，尤其是細(xì)胞免疫功能的下降，并進(jìn)一步表現(xiàn)為執(zhí)行細(xì)胞免疫功能的淋巴數(shù)量和功能的變化，機(jī)體抗腫瘤的細(xì)胞免疫功能的下降是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和發(fā)展的重要原因之一。作為反映細(xì)胞免疫功能的主要細(xì)胞，CD3+、CD4+、CD8+等T細(xì)胞含量的檢測結(jié)果可以作為評價(jià)疾病進(jìn)展和預(yù)后的有效依據(jù)。同時(shí)如果及時(shí)對患者采取干預(yù)措施進(jìn)行治療則會轉(zhuǎn)變這一現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示：觀察組患者治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯高于治療前(P<0.05)，且不同類型惡性腫瘤患者均表現(xiàn)出明顯升高的趨勢，但與對照組相比仍具有明顯差異。提示經(jīng)過治療后，不同類型惡性腫瘤患者機(jī)體的免疫功能均有不同程度的恢復(fù)。

綜上所述，惡性腫瘤患者外周血T細(xì)胞亞群不同指標(biāo)的檢測有助于了解患者的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，從而為患者治療方案的確定和調(diào)整以及治療效果的評估提供參考依據(jù)。

[1]王俞,崔書中.惡性腫瘤患者的免疫功能狀態(tài)及免疫治療研究進(jìn)展[J].中國腫瘤臨床，2014,41(13):876

[2]MULLER L，MITSUHASHI，SIMMS P，et al.Tumor-derived exosomes regulate expression of immune function-related genes in human T cell subsets[J].Scientific Reports，2016，6:20254

[3]XIN W W，WANG Y，SCHLOEMER N J，et al.Sa1753 altered NK cell homeostasis，NK immune-modulation，and NK tumor suveilance function in a mouse model of colitis and colon adenocarcinoma caused by a targeted mutation in the FX Locus[J].Gastroenterology，2015，148(4):323

[4]施愛軍,吳曉柳,沈宗麗,等.常見惡性腫瘤患者機(jī)體淋巴細(xì)胞亞群和活化T淋巴細(xì)胞的分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014,35(20):2758

[5]胡小倩,周國芹,王素霞,等.聯(lián)合檢測外周血T淋巴細(xì)胞及DNT細(xì)胞在惡性腫瘤早期診斷中的應(yīng)用[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23(2):139

ClinicalDetectionofDifferentTLymphocyteSubsetsinPeripheralBloodofPatientswithMalignantTumor

ZHANG Can-qiang,HE Ji-hong,ZHANG Fang-di,et al

(HuichengHuizhouDistrictChronicDiseasePreventionandControlStation,HuizhouGuangdong516001,China)

ObjectiveTo investigate the clinical value of different T lymphocytes in peripheral blood of patients with malignant tumor.Methods147 cases of malignant tumor patients in our hospital were chosen as the observation group study and 80 cases of healthy people underwent a medical examination in our hospital were selected as the control group.Theb different subsets of T cells of CD3+,CD4+and CD8+and the level of CD4+/CD8+in the peripheral blood were detected and compared in the two groups of subjects.ResultsCD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group before treatment were significantly lower than that of the control group(P<0.05).The CD3+,CD4+and CD4+/CD8+in the observation group were significantly higher than those before treatment(P<0.05),but still significantly lower than that of the control group(P<0.05).There was no significant difference in CD8+between the observation group and the control group before and after treatment(P>0.05).The levels of T lymphocytes in the different groups of cancer patients were analyzed and it was found that the levels of T lymphocytes were not influenced by tumor type.ConclusionThe patients with malignant tumor of peripheral blood T cell subsets in different target detection is helpful to understand the cellular immune function of patients,so as to provide reference for the evaluation of treatment.

Malignant tumor;T Lymphocyte subsets;Cellular immune function

R392.13

A

2095-4646(2017)05-0381-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2017.05.0381

2017-01-29)