雄激素合成酶在H22荷瘤小鼠不同證候表達差異?

潘志強，方肇勤，盧文麗，劉小美，梁 超，張園園

(上海中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,上海 201203)

【實驗研究】

雄激素合成酶在H22荷瘤小鼠不同證候表達差異?

潘志強，方肇勤△，盧文麗，劉小美，梁 超，張園園

(上海中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,上海 201203)

目的：研究睪丸雄激素合成酶與腫瘤狀態(tài)下小鼠證候的關(guān)系。方法：采用實驗小鼠及其標準化四診與辨證方法篩選H22荷瘤小鼠邪毒壅盛證、氣虛證、陽氣虛證、氣陰陽虛證，并以GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array技術(shù)檢測睪丸組織基因芯片表達譜，重點分析睪丸基因芯片中雄激素合成酶及其調(diào)節(jié)因子在不同證候小鼠中的差異表達。結(jié)果：與正常組比較，Star、Stard5、Cyp17a1、Hsd3b6、Hsd17b3、Sult1e1等基因在早期邪毒壅盛證和氣虛證小鼠呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，且在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證下調(diào)幅度更加顯著，Cyp11a1、Hsd3b1、Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12、Fdx1、Fdxr、Por、Sult1a1等僅在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證中顯著下調(diào)，Cyp17a1僅在睪丸組織特異性中表達。結(jié)論：H22荷瘤小鼠腫瘤形成后，自發(fā)產(chǎn)生的虛證越嚴重，其睪丸雄激素合成酶基因轉(zhuǎn)錄活性越低。

雄激素合成酶；證候；小鼠；基因芯片；基因表達

證候的發(fā)生涉及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)功能紊亂的觀點在中醫(yī)學(xué)術(shù)界基本達成共識。既往在臨床與實驗動物方面均發(fā)現(xiàn)，虛證在下丘腦、垂體、腎上腺皮質(zhì)、甲狀腺、性腺、胸腺等存在功能紊亂現(xiàn)象[1-3]。方肇勤課題組以H22肝癌荷瘤小鼠為實驗對象，采用小鼠標準化四診與辨證技術(shù)，動態(tài)觀察荷瘤小鼠不同階段自然形成的證候演變及檢測神經(jīng)內(nèi)分泌免疫組織的基因表達譜，發(fā)現(xiàn)不同證候具有特征性差異表達基因[4]。

本文在課題組既往H22肝癌荷瘤小鼠不同證候睪丸基因芯片數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上[5-7]，深入分析雄激素合成酶及其調(diào)節(jié)因子在不同證候中的表達特征，發(fā)現(xiàn)隨腫瘤的進展，中晚期小鼠腫瘤體積逐漸增大，氣血陰陽虛證日益嚴重，呈現(xiàn)典型的虛實夾雜證候特征，相應(yīng)的雄激素合成減弱，其雄激素合成酶與調(diào)控因子的基因表達逐漸減弱，提示這可能與中晚期腫瘤虛證的發(fā)生有關(guān)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明種雄性小鼠250只，體質(zhì)量(25±1)g，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供(動物生產(chǎn)許可證號SCXK(滬)2003-0003)。

1.2 實驗試劑

TRIzol試劑購自美國GIBCO BRC公司，RNeasy Mini Kit試劑盒購自德國QIAGEN公司，RNA 6000 Nano LabChip購自美國Agilent Technologies公司，小鼠外顯子基因芯片(GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array)及其試劑盒購自美國Affymetrix公司。

1.3 實驗儀器

1.3.1 四診計量化檢測設(shè)備 YLS-13 A型小鼠抓力測定儀(購自山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)用于抓力檢測，底部劃有4.5 cm×5.5 cm方格(3行×6列=18格)的實驗籠用于曠場檢測，NIKON 4500數(shù)碼相機用于顯微和普通拍照、曠場檢測錄像，3200 K(色溫)250 W攝像專用光源顯微和普通照明，MP200B型電子天平(購自上海恒平科學(xué)儀器有限公司)用于動物和飼料稱質(zhì)量，數(shù)字WMY-01型溫度計(購自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司)用于檢測腋溫，SQF-EA體視顯微鏡(購自上海萬科儀器有限公司)用于顯微爪、尾的顯微拍攝，游標卡尺、個人電腦用于圖像和數(shù)據(jù)處理。

1.3.2 芯片檢測儀器 雜交爐、芯片洗滌系統(tǒng)和芯片掃描儀等購自美國Affymetrix公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗分組及處理 采用隨機數(shù)字表法取60只做正常對照，另190只腋下接種H22腫瘤腹水癌細胞0.2 ml(細胞濃度4×107/ml)，出瘤后淘汰40只出瘤不佳及畸形小鼠，剩余150只。取正常小鼠20只和肝癌小鼠150只用于四診計量檢測和辨證，另40只正常對照小鼠不做四診檢測(用于早期、中期的正常對照組)，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.4.2 四診計量化檢測方法與計量辨證方法 我們采用課題組研制的小鼠四診工作站技術(shù)與方法標準采集小鼠四診信息，主要包括小鼠一般外觀表現(xiàn)、體質(zhì)量、體溫、飲水量、攝食量、曠場實驗小鼠跨格數(shù)、小鼠肢體抓力、爪色澤、尾色澤、腫瘤瘤徑等指標，然后進行計量化辨證，可參見有關(guān)文獻[8]。

1.4.3 肝癌小鼠分期與常見證候的確定 H22肝癌小鼠分期標準參見有關(guān)文獻[9]。分別于接種腫瘤后第7天(早期)、第20天(中期)、第28天(中晚期)進行全體小鼠四診檢測與辨證，并分別于檢測后的次日，即接種腫瘤后第8天(早期)辨證并篩選出最為典型的邪毒壅盛證和氣虛證小鼠各16只，第21天(中期)辨證并篩選出最為典型的陽氣虛證小鼠16只，第29天(中晚期)辨證并篩選出最為典型的氣陰陽虛證小鼠16只。

1.4.4 不同證候肝癌小鼠的處死與取材 在小鼠四診檢測與辨證的次日，即分別于接種腫瘤后第8天處死邪毒壅盛、氣虛證肝癌小鼠以及正常對照小鼠各16只；第21天處死陽氣虛肝癌小鼠和正常對照小鼠各16只，第29天處死氣陰陽虛肝癌小鼠和正常對照小鼠各16只。分別取下丘腦、垂體、甲狀腺、腎上腺、睪丸、胸腺、脾臟和腫瘤組織。

1.4.5 RNA的提取與檢測 以上共5組樣本采用Trizol(GIBCO BRC)試劑盒及其方法，抽提睪丸組織總RNA；采用RNeasy Mini Kit(QIAGEN)試劑盒及其方法純化RNA；采用RNA Nano LabChip和方法，及其配套的Agilent-bioanalizer 2100檢測RNA的質(zhì)量和電泳圖譜。

1.4.6 芯片檢測 采用Affymetrix的GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array及其試劑盒所建議的檢測方法。依據(jù)檢測結(jié)果和Affymetrix建議的方法，采用iterPlier法計算核心基因表達讀數(shù)值。以上RNA質(zhì)量和芯片檢測委托上海生物芯片有限公司完成。

1.4.7 雄激素合成酶及其調(diào)節(jié)因子的基因篩選 在睪丸基因芯片原始數(shù)據(jù)中，篩選雄激素合成酶及其調(diào)節(jié)因子，并以正常組為對照，計算不同證候差異變化倍數(shù)，即各證候/正常基因芯片讀數(shù)比值。

2 結(jié)果

2.1 雄激素合成起始環(huán)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白在荷瘤小鼠不同證候中的表達差異

表1顯示，雄激素合成起始環(huán)節(jié)由類固醇急性調(diào)節(jié)蛋白(Star)介導(dǎo)，將細胞漿內(nèi)膽固醇從線粒體外膜轉(zhuǎn)運到線粒體內(nèi)膜。此外，協(xié)同轉(zhuǎn)運的StarD家族蛋白也起到類似馬達蛋白作用，為類固醇激素合成提供重要的膽固醇原料，其中StarD4和StarD5具有低水平Star活性作用，而StarD6主要表達于生精細胞，但其功能不清楚。結(jié)果顯示，H22荷瘤小鼠腫瘤發(fā)生后，早期邪毒壅盛證和氣虛證睪丸Star基因表達下調(diào)40%，中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Star基因表達下調(diào)達60%，同樣，Stard4、Stard5、Stard7和Stard8基因在陽氣虛證和氣陰陽虛證也下調(diào)，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸雄激素合成的起始環(huán)節(jié)就出現(xiàn)異常。此外，Stard10基因在睪丸組織中表達量非常高，但是其在睪丸中的生物功能尚不清楚。

2.2 雄激素合成限速酶和17α羥化酶在荷瘤小鼠不同證候中的表達差異

表2顯示，Cyp11a1編碼膽固醇側(cè)鏈裂解酶P450scc，主要催化膽固醇轉(zhuǎn)化為孕烯醇酮，是類固醇合成過程的限速酶。結(jié)果顯示，在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Cyp11a1表達下調(diào)60%，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸雄激素合成起始環(huán)節(jié)限速過程顯著降低。P450c17酶既有17α羥化酶活性，又表現(xiàn)出17,20裂解酶活性，將孕烯醇酮轉(zhuǎn)化為C19類固醇(脫氫表雄酮)。結(jié)果顯示，不同證候均出現(xiàn)Cyp17a1基因表達下調(diào)，尤其是中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Cyp17a1表達下調(diào)約60%，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸雄激素前體轉(zhuǎn)化為脫氫表雄酮的能力顯著降低。

表1 膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)分子在不同證候中的基因表達差異

表2 雄激素合成限速酶和17α羥化酶在不同證候中的表達差異

2.3 羥基類固醇脫氫酶在荷瘤小鼠不同證候中的表達差異

2.3.1 3β-羥基類固醇脫氫酶 表3顯示，3β-HSDs主要作用催化孕烯醇酮轉(zhuǎn)化為孕酮、17羥-孕烯醇酮轉(zhuǎn)化為17羥-孕酮、脫氫表雄酮(DHEA)轉(zhuǎn)化為雄烯二酮、雄烯二醇轉(zhuǎn)化為睪酮。結(jié)果顯示，小鼠睪丸組織Hsd3b1和Hsd3b6高表達，各證候Hsd3bs基因表達均下調(diào)，尤其是中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Hsd3b3、Hsd3b6基因下調(diào)約70%，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證小鼠雄激素合成過程的脫氫酶活躍性下降。

表3 3β-羥基類固醇脫氫酶在不同證候中的表達差異

2.3.2 11β-羥基類固醇脫氫酶 表4顯示，11β-HSDs屬于短鏈脫氫酶還原酶(SDR)家族，包括Hsd11b1和Hsd11b2。結(jié)果顯示，它們在小鼠睪丸組織中表達量較低，提示它們對睪丸生理功能不重要。

表4 11β-羥基類固醇脫氫酶在不同證候中的表達差異

2.3.3 17β-羥基類固醇脫氫酶 表5顯示，17β-HSDs屬于醛酮還原酶(AKR)家族，它催化雄烯二酮轉(zhuǎn)化為睪酮、脫氫表雄酮轉(zhuǎn)化為雄烯二醇、雌酮轉(zhuǎn)化為雌二醇等重要生化過程。17β-HSDs包括多種亞型，其中Hsd17b3屬于微粒體氧化酶，它特異性表達于睪丸組織，該酶的紊亂常導(dǎo)致男性假兩性畸形(17-酮類固醇還原酶)缺陷。本研究結(jié)果顯示，H22荷瘤小鼠腫瘤形成后，不同證候小鼠睪丸Hsd17b3基因表達下調(diào)50%～70%，且中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證下調(diào)更顯著，提示嚴重的虛實夾雜證腫瘤小鼠睪丸雄激素合成與轉(zhuǎn)化關(guān)鍵酶活躍性下降。然而，Hsd17b1主要表達于胎盤組織和卵巢顆粒細胞，負責(zé)催化雌二醇生成；Hsd17b2屬于微粒體氧化酶，主要表達于胎盤、肝臟、小腸、前列腺、子宮內(nèi)內(nèi)膜和卵巢組織。本基因芯片未包含Hsd17b1和Hsd17b2轉(zhuǎn)錄本。 Hsd17b4類似Hsd17b2，Hsd17b4缺乏會引起Zellweger綜合征，結(jié)果顯示Hsd17b4在睪丸中表達量很高，且中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Hsd17b4表達下調(diào)約10%；小鼠Hsd17b5(Akr1c6)最早克隆于3α羥基類固醇脫氫酶，屬于AKR酶，催化雄烯二酮轉(zhuǎn)化成睪酮，且在體外相當不穩(wěn)定。目前認為，Hsd17b5在前列腺內(nèi)雄激素代謝有重要作用，Hsd17b5在睪丸中表達量低，同樣在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Hsd17b5表達下調(diào)約40%。值得注意的是，Hsd17b6(別名Hsd17b9、Rdh8)、Hsd17b7、Hsd17b8、Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12、Hsd17b13等盡管屬于17βHSD家族，但實際上其17βHSD活性非常弱，它們與雄激素合成過程關(guān)系不大。結(jié)果顯示，睪丸組織中Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12表達量較高，且在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證均下調(diào)30%以上?？傮w而言，H22荷瘤小鼠陽氣虛證和氣陰陽虛證17β羥基類固醇脫氫酶多種亞型基因表達均呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，提示17βHSD酶活性下降可能與虛證關(guān)系密切。

表5 17β-羥基類固醇脫氫酶在不同證候中的表達差異

2.4 雄激素合成酶的調(diào)節(jié)因子在荷瘤小鼠不同證候中的表達差異

表6顯示，雄激素合成各酶的幾個重要調(diào)節(jié)因子，包括鐵氧還蛋白1(Fdx1)、鐵氧還蛋白還原酶(Fdxr)、P450氧化還原酶(Por)、5α還原酶(Srd5a)、細胞質(zhì)磺酶(Sult)等，其中睪酮經(jīng)5α還原酶(Srd5a1、Srd5a2)作用后轉(zhuǎn)化成更強烈的雙氫睪酮，類固醇的磺和硫酸化方式主要通過細胞質(zhì)磺(Sult)酶作用，以產(chǎn)生活性更強的雄激素。結(jié)果顯示，小鼠睪丸Sult1e1和Sult1a1基因表達均高，Sult1e1在不同證候H22荷瘤小鼠均出現(xiàn)下調(diào)，尤其是中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Fdx1、Fdxr、Por、Sult1e1和Sult1a1基因表達均下調(diào)，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸雄激素磺和硫酸化作用也顯著減弱。

表6 雄激素合成酶調(diào)節(jié)因子在不同證候中的表達差異

2.5 P450c17酶在小鼠睪丸組織特異性表達

表7顯示，P450c17酶主要表達于睪丸組織，依據(jù)芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Cyp17a1基因在正常小鼠睪丸中表達量非常高，芯片讀數(shù)值為8358，而正常小鼠下丘腦、垂體、腎上腺、甲狀腺、胸腺、脾臟組織表達量非常低，僅是睪丸組織的1.3%～6.7%。此外在腫瘤組織也低表達，進一步提示Cyp17a1基因在睪丸組織特異性表達的特性。

表7 Cyp17a1基因在小鼠不同組織中表達量比較

2.6 P450arom芳香化酶在小鼠各組織中的表達比較

表8顯示，P450arom芳香化酶由Cyp19a1基因編碼，是雌激素合成過程的關(guān)鍵酶，主要催化睪酮和雄烯二酮轉(zhuǎn)化為雌激素，Cyp19a1基因在雄性小鼠睪丸、下丘腦、垂體、腎上腺、甲狀腺、胸腺、脾臟、腫瘤等組織中表達量均非常低，提示Cyp19a1在雄激素合成過程中不重要。

3 討論

證候研究是中醫(yī)基礎(chǔ)理論的一個重要領(lǐng)域，近幾十年來，探索證候發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)是中醫(yī)基礎(chǔ)現(xiàn)代化的方向之一。既往的研究思路是依據(jù)中醫(yī)證候產(chǎn)生的病理因素，在實驗動物上施加類似因素以復(fù)制不同證候模型，然后檢測模型動物相關(guān)靶組織的分子變化，以期望發(fā)現(xiàn)證候的可能物質(zhì)基礎(chǔ)，這種方法被廣泛運用，其優(yōu)點是方法易于采納與推廣，缺點是一些實施的造模因素與臨床疾病及證候發(fā)生不相符。近20年來，方肇勤課題組依據(jù)中醫(yī)臨床自然狀態(tài)下的辨證思維模式，發(fā)明與創(chuàng)建了小鼠/大鼠標準化四診信息采集方法與辨證技術(shù)[8-9]，針對疾病模型小鼠予以辨證分型，然后對同病異證小鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)組織及相應(yīng)的病變組織進行微觀指標檢測，以期望揭示證候的可能物質(zhì)基礎(chǔ)，該研究方法最大優(yōu)點是符合臨床診治實際，運用中醫(yī)思維對任何疾病動物均可執(zhí)行辨證論治，具有很強的實用性，然而部分學(xué)者對小鼠/大鼠標準化四診信息采集方法與辨證技術(shù)也有質(zhì)疑。

表8 Cyp19a1基因在小鼠不同組織中表達量比較

證候是客觀存在的，那么證候是否具有相應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)？理論上是肯定的。但證候的物質(zhì)基礎(chǔ)是否可用比較簡潔的語言表述清楚，目前依然難以定論甚至存在很大爭論[10]。經(jīng)學(xué)術(shù)界的不斷研究與積累，發(fā)現(xiàn)證候與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)及其病變靶組織的內(nèi)在變化存在一定的關(guān)系，這一認識在業(yè)界基本達成共識?；诖耍疚闹饕獜男韵俸铣尚奂に刂匾δ芑虻霓D(zhuǎn)錄組層面，探索H22肝癌荷瘤小鼠自發(fā)形成的各種證候在雄激素合成轉(zhuǎn)錄組的變化。我們采用基因芯片技術(shù)檢測了正常小鼠以及不同證候荷瘤小鼠睪丸組織的基因表達，圍繞雄激素合成過程的重要酶及其調(diào)節(jié)因子，比較與分析它們在不同證候中的差異表達特征。業(yè)已明確[11-12]，睪酮及其前體去氫表雄酮(DHEA)是睪丸間質(zhì)細胞合成的重要雄激素，其生化合成過程屬于類固醇激素。經(jīng)典生化合成過程是，類固醇急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)首先將膽固醇從線粒體外膜轉(zhuǎn)運到線粒體內(nèi)膜，然后在P450側(cè)鏈裂解酶作用下合成孕烯醇酮，這兩步是限速過程；之后經(jīng)P450 17α羥化酶催化合成DHEA，再經(jīng)3β羥基固醇脫氫酶的催化作用最終合成睪酮。

芯片結(jié)果顯示，雄激素合成過程重要酶包括Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd17b3等在正常小鼠睪丸組織中表達非常高(芯片讀數(shù)2000以上，是睪丸基因芯片均值746的3倍以上)，尤其是Cyp17a1在睪丸組織呈現(xiàn)特異性高表達(芯片讀數(shù)值為8358)，Cyp19a1在雄性小鼠各組織中低表達，進一步佐證基因芯片數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性與可信度。進而深入分析各基因差異表達與不同證候的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)雄激素合成起始環(huán)節(jié)的2個重要限速酶Star和Cyp11a1在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證均下調(diào)60 %以上。此外，Stard4、Stard5、Stard7和Stard8基因在陽氣虛證和氣陰陽虛證也下調(diào)，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸間質(zhì)細胞將膽固醇從線粒體外膜轉(zhuǎn)運到線粒體內(nèi)膜的轉(zhuǎn)運能力下降，而Cyp11a1基因表達的下調(diào)進一步提示雄激素起始過程的限速步驟的合成能力明顯下降。同樣，不同證候均出現(xiàn)Cyp17a1基因表達下調(diào)，尤其是中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Cyp17a1表達下調(diào)約60%，提示中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證H22荷瘤小鼠睪丸雄激素前體轉(zhuǎn)化為脫氫表雄酮的能力顯著降低。細胞色素P450是一類重要的酶，其中有7個表達于線粒體、50個表達于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而15個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中P450酶是肝藥物代謝酶，20個參與類固醇激素和膽汁酸等合成，15個作用不明確。在睪丸間質(zhì)細胞，Cyp11a1編碼膽固醇側(cè)鏈裂解酶P450scc，主要催化膽固醇轉(zhuǎn)化為孕烯醇酮，是類固醇合成過程的限速酶；Cyp17a1編碼P450c17酶，既有17α羥化酶活性、又表現(xiàn)出17,20裂解酶活性[13]。本研究顯示，小鼠腫瘤形成后，中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證的睪丸組織Cyp11a1和Cyp17a1基因表達顯著低于正常小鼠，說明中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證小鼠具有雄激素合成能力下降的特征。

此外，羥基類固醇脫氫酶家族成員、Hsd3bs基因在各證候中表達均下調(diào)，尤其是中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證Hsd3b3、Hsd3b6基因下調(diào)約70%；中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證荷瘤小鼠睪丸Hsd17b3、Hsd17b4、Hsd17b5、Hsd17b7、Hsd17b10、Hsd17b11基因表達明顯低于正常組小鼠。它們在睪酮合成過程中發(fā)揮重要的脫氫酶作用，提示小鼠腫瘤形成后，中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證小鼠睪酮合成與轉(zhuǎn)化能力顯著下降。而雄激素合成酶的重要調(diào)節(jié)因子Fdx1、Fdxr、Por、Sult1e1和Sult1a1在中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證表達也顯著下降，進一步提示其雄激素磺和硫酸化作用也顯著減弱。

綜上所述，昆明種小鼠接種H22肝癌細胞后，腫瘤形成后的不同階段自發(fā)出現(xiàn)邪毒壅盛證、氣虛證、陽氣虛證、氣陰陽虛證等證候，通過對不同證候睪丸組織的基因表達譜檢測，發(fā)現(xiàn)中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證小鼠睪丸雄激素合成過程關(guān)鍵酶及其調(diào)節(jié)因子基因轉(zhuǎn)錄明顯低于正常對照小鼠，提示雄激素合成酶轉(zhuǎn)錄水平下降可能是腫瘤小鼠中晚期陽氣虛證和氣陰陽虛證的重要特征性變化。

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DifferentialExpressionofAndrogenSynthaseinDifferentSyndromesofH22TumorBearingMice

PAN Zhi-qiang, FANG Zhao-qin△, LU Wen-li, LIU Xiao-mei, LIANG Chao, ZHANG Yuan-yuan

(BasicMedicalSchoolofShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai, 201203,China)

Objective: To study the relation of androgen synthases genes expression and syndromes in H22 tumor Mice. Methods: By the quantitative four diagnosis and syndrome differentiation methods, different H22 tumor mice with poisonous pathogenic factors syndrome and asthenia of qi syndrome in earlier period, asthenia of yang and qi syndrome on intermediate stage, asthenia of qi and yin and yang syndrome on advanced stage were obtained. Then testis cDNA microarray were detected by GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array. The androgen synthase and its regulatory factor genes expression were analyzed. Results: Compared with normal mice, Star, Stard5, Cyp17a1, Hsd3b6, Hsd17b3 and Sult1e1 genes expression were down-regulated in pathogenic factors syndrome and asthenia of qi syndrome on earlier period, and those genes were more significantly down-regulated in asthenia of yang and qi syndrome, asthenia of qi and yin and yang syndrome. Cyp11a1, Hsd3b1, Hsd17b10, Hsd17b11, Hsd17b12, Fdx1, Fdxr, Por and Sult1a1 genes expression were down-regulated only in asthenia of yang and qi syndrome, asthenia of qi and yin and yang syndrome. And Cyp17a1 specifically expressed only in testis. Conclusion: After the tumorigenesis, androgen synthases genes expression were decreased with spontaneous asthenia syndromes aggravation.

Androgen synthase; Syndrome; Mice; GeneChip; Genes expression

R285.5

B

1006-3250(2017)10-1379-05

上海市科委國際合作資助項目(064307052)-中醫(yī)藥有關(guān)腫瘤辨證論治機制的系統(tǒng)生物學(xué)研究；上海市進一步加快中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動計劃(2014～2016年)(ZY3-CCCX-3-3010)-溫腎壯陽中藥有效成分的類固醇激素樣效應(yīng)比較及其相須配伍的物質(zhì)基礎(chǔ)

潘志強(1977-)，男，江西人，教授，醫(yī)學(xué)博士，碩士研究生導(dǎo)師，從事實驗中醫(yī)學(xué)教學(xué)與中醫(yī)證候?qū)嶒炑芯俊?/p>

△通訊作者：方肇勤(1955-)，男，上海人，醫(yī)學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事實驗中醫(yī)學(xué)教學(xué)與中醫(yī)基礎(chǔ)實驗研究，Tel：021-51322115，E-mail：zqfang@sh163.net。

2017-03-16