聯(lián)合檢測RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用研究

洪雄新　胡潤濤　尤美霞　陳輝雄

【摘要】 目的：研究類風(fēng)濕因子（RF）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸（CCP）抗體、和抗RA33抗體四項指標(biāo)聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）診斷中的價值。方法：收集50例RA患者（RA組）和62例非RA的自身免疫病患者（自免組）血清，同時選擇60例健康體檢者（對照組）作為研究對象，給予所有納入人群檢查RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體，并對檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果：RA組RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體的陽性率均明顯高于自免組和對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。四項指標(biāo)診斷RA的敏感性高低依次為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33；特異性高低依次為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF；四項指標(biāo)聯(lián)合檢測進行平行診斷試驗中敏感性高達96.0%，在系列診斷試驗中特異性高達100%。結(jié)論：RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體四項指標(biāo)聯(lián)合檢測可極大提高特異性和敏感性，有利于提高RA患者的早期診斷，臨床上值得推廣使用。

【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎； 類風(fēng)濕因子； 抗角蛋白抗體； 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體； 抗RA33抗體

Diagnostic Value of Combined Detection of AKA Antibody，Anti CCP Antibody，Anti RA33 Antibody and RF for Rheumatoid Arthritis/HONG Xiong-xin，HU Run-tao，YOU Mei-xia，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（24）：021-024

【Abstract】 Objective：To study the value of rheumatoid factor （RF），anti keratin antibodies（AKA），anti cyclic citrullinated peptide （CCP） antibodies，and anti RA33 antibodies in the detection of rheumatoid arthritis （RA）.Method：50 patients with RA（RA group），62 patients with other autoimmune diseases （autoimmune disease group）and 60 healthy subjects （control group）under going physical examination were selected as the research subjects.The RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were given to the population，and the test results were analyzed.Result：In RA group，the positive rate of RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were obviously higher than those of autoimmune disease group and control group，the differences were statistically significant（P<0.01）.The sensitivity of four indicators for diagnosing RA was anti CCP antibody>RF>AKA>anti RA33；the specificity was anti RA33>AKA>anti CCP antibody>RF.In the parallel diagnostic test， the sensitivity of the four indicators in joint detection was as high as 96.0%，in the series of diagnostic tests，the specificity was as high as 100%.Conclusion：The combined detection of RF，AKA，CCP antibody and anti RA33 can significantly improve the specificity and sensitivity，to improve the early diagnosis of RA patients and should be promoted in clinical use.

【Key words】 Rheumatoid arthritis； Rheumatoid factor； Anti keratin antibody； Anti cyclic citndlinated pepfide antibody； Anti RA33 antibody

First-authors address：Shenzhen Longgang District Peoples Hospital，Shenzhen 518172，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.24.006

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以炎性滑膜炎為主的自身免疫性疾病，其臨床主要表現(xiàn)為對稱性的關(guān)節(jié)滑膜炎癥，可致軟骨破壞甚至侵蝕而造成關(guān)節(jié)強直畸形，嚴重時還可導(dǎo)致患者失去勞動力和生活自理能力，是世界上導(dǎo)致殘疾的主要疾病之一[1-3]。及早診斷和治療可有效減少RA致殘率，本研究通過對RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體的測定，為臨床上早期診斷提供更為有價值的診斷方案。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月-2016年12月深圳龍崗區(qū)人民醫(yī)院住院RA患者50例（RA組）作為研究對象，其中女38例，男12例，年齡23～76歲，平均（31.3±4.2）歲，所有患者均符合RA臨床診斷標(biāo)準，另選取其他自身免疫性疾病患者62例（自免組），其中男11例，女51例，年齡21～82歲，平均（30.5±5.3）歲。同時選取本院同期體檢健康者60例作為對照組，其中男15例，女45例，年齡18～80歲，平均（28.4±6.9）歲，排除相關(guān)疾病。三組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 類風(fēng)濕因子（RF）檢測采用BeckmanAU5810及其配套試劑，抗角蛋白抗體（AKA）檢測試劑盒產(chǎn)自北京和杰創(chuàng)新生物技術(shù)有限公司；抗環(huán)瓜氨酸（CCP）抗體采用德國AESKU公司的抗CCP抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒；抗RA33抗體是采用德國胡曼生化診斷有限責(zé)任公司的抗RA33抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測。酶標(biāo)儀為安圖PHOMO全自動酶標(biāo)儀（精度變異系數(shù)≤2%）。

1.3 方法 所有受試者均于清晨抽取空腹靜脈血5 mL，待血液凝固后以3000 r/min的速度，離心10 min，分離血清后-20 ℃保存待檢。所有操作均嚴格按照試劑說明書進行。RF檢測是采用免疫散射比濁法進行定量分析。AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法測定（ELISA）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組的RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體的陽性表達情況比較 三組的RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體的陽性表達情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；四項指標(biāo)兩兩組間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）

2.2 單獨檢測四項指標(biāo)對診斷RA的效能評價 在四項檢測指標(biāo)中，敏感性由高到低為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33，分別為78.0%（39/50）、72.0%（36/50）、60.0%（30/50）、42.0%（21/50），特異性由高到低為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF，分別為96.8%（60/62）、91.9%（57/62）、90.3%（56/62）、58.1%（36/62）；陰性預(yù)測值由高到低為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33，分別為91.2%（114/125）、86.8%（92/106）、85.3%（116/136）、80.5%（120/149）；陽性預(yù)測值由高到低為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF，分別為91.3%（21/23）、83.3%（30/36）、83.0%（39/47）、54.5%（36/66）；Youden指數(shù)（為敏感性+特異性-1）抗CCP抗體>AKA>抗RA33>RF，分別為0.68、0.52、0.39、0.30，見表2。

2.3 四項指標(biāo)平行試驗相關(guān)性能診斷 四項指標(biāo)平行試驗診斷結(jié)果顯示，敏感性由高到低為RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA，分別為96.0%（48/50）、88.0%（44/50）、82.0%（41/50）；特異性由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為71.0%（44/62）、58.1%（36/62）、43.5%（27/62）；Youden指數(shù)由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為0.53、0.46、0.40。

2.4 四項指標(biāo)系列試驗相關(guān)性能診斷 四項指標(biāo)系列試驗診斷結(jié)果顯示，敏感性由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為76.0%（38/50）、56.0%（28/50）、40.0%（20/50）；特異性由高到低為RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA，分別為100%（62/62）、93.5%（58/62）、87.1%（54/62）；Youden指數(shù)由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為0.63、0.50、0.40。見表4。

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)軟骨侵蝕為主的全身性自身免疫性疾病，隨著病情進行性發(fā)展，會導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失等情況出現(xiàn)，早期發(fā)現(xiàn)并診斷，對指導(dǎo)治療、改善病情和預(yù)后具有重要的臨床意義[4-6]。本研究通過檢測RA患者、非RA疾病患者與健康者血清中的RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體四種指標(biāo)，對其在RA中的診斷價值進行分析。

RF是抗人或動物免疫球蛋白IgG的Fc段的抗體，RA患者體內(nèi)有產(chǎn)生RF的B細胞克隆，其在EB病毒或變性免疫球蛋白G（IgG）的直接作用下即可大量合成。RF是臨床診斷RA的主要血清學(xué)指標(biāo)，具有較高的敏感性，但其診斷特異性不高，在其他自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等疾病，以及正常老年患者中均有較高的陽性率[7-9]，給臨床診斷帶來一定的局限性。本研究中，RF對RA的敏感性為72.0%，特異性為58.1%，結(jié)果表明有必要通過聯(lián)合檢測其他指標(biāo)來提高RA的診斷，以減少漏診和誤診。

AKA是在RA患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種能與鼠食管中上段角質(zhì)層反應(yīng)的抗體，AKA對RA的診斷特異性較高，在疾病早期即可檢出[10-11]。有研究表明，該抗體水平變化還與疾病的活動性與病情程度有一定的相關(guān)性[12]。在本研究中AKA的敏感度為60.0%，特異性為91.9%，與文獻[13-14]報道相符。從表2可見，RA組患者AKA顯著高于自免組和對照組，表明AKA對于診斷RA具有較高的價值?？笴CP抗體是含瓜氨酸氨基酸殘基的蛋白，為環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段，主要為IgG類抗體，近年來研究發(fā)現(xiàn)，抗CCP抗體對RA診斷有很高的特異度及敏感度，是其較好的早期診斷標(biāo)志物[15]。有研究發(fā)現(xiàn)RA患者骨質(zhì)的破壞程度與抗CCP抗體的含量有關(guān)，抗CCP抗體產(chǎn)生越多，與RA密切相關(guān)的表位也越多，關(guān)節(jié)損害也越嚴重，抗CCP抗體陽性的患者骨質(zhì)的侵蝕程度較抗體陰性者更為嚴重[16]。因此，通過檢測抗CCP抗體，可以給臨床治療和預(yù)后帶來極大的幫助。本研究中，抗CCP抗體的敏感性為78.0%，特異性為90.3%，可見抗CCP抗體的特異性高于RF，可見抗CCP抗體是RA診斷中的一個較理想的指標(biāo)。RA33是異質(zhì)性核糖核蛋白的核心蛋白A2，與分子量33KD的核酸蛋白發(fā)生反應(yīng)，因而定名為抗RA33抗體?？筊A33抗體在自身免疫病的患者也能檢出，這個有可能是因為和含有針對小核糖核蛋白體（snRNP）中的A2發(fā)生了交叉反應(yīng)。同時有研究發(fā)現(xiàn)，抗RA33抗體的含量與RA病情的嚴重程度無關(guān)[17-18]，說明抗體RA33有較高的穩(wěn)定性，對RA有較大的診斷意義。本研究中，抗RA33抗體的敏感性為42.0%，特異性為96.8%，其特異性在四項指標(biāo)中最高，但其敏感性最低，表明抗RA33抗體單項檢測用于診斷RA會有較多漏檢。endprint

在RA診斷的實驗室檢查指標(biāo)中，單獨檢測以上各指標(biāo)在RA診斷中不能同時保證有較滿意的敏感性和特異性，也可能出現(xiàn)假陽性和假陰性，易給臨床診斷帶來誤診和漏診。為了提高診斷效率，可通過平行試驗和系列試驗來實現(xiàn)。平行試驗也就是通常說的并聯(lián)試驗，是多個試驗同時進行，只要有一個陽性就可判為平行試驗陽性，認為疾病的證據(jù)存在，這樣可以提高敏感性，減少漏診。在本研究中，聯(lián)合檢測RF和AKA兩項，敏感性為80.2%，Youden指數(shù)0.53，聯(lián)合檢測RF、AKA和抗CCP抗體三項，敏感性上升到88.0%，通過四項指標(biāo)并聯(lián)聯(lián)合檢測，敏感性可達96.0%。系列試驗即通常說的串聯(lián)試驗，是多個試驗相繼進行，前一個試驗結(jié)果陽性就接著做下一個試驗，一旦出現(xiàn)陰性結(jié)果就可判為系列試驗陰性，作為無病處理，終止試驗，這樣可以提高特異度，減少誤診。在本研究中，聯(lián)合檢測RF和AKA兩項，特異性為87.1%，Youden指數(shù)為0.63，聯(lián)合檢測RF、AKA和抗CCP抗體三項，特異性上升到93.5%，通過四項指標(biāo)串聯(lián)聯(lián)合檢測，特異度高達100%。由此說明，聯(lián)合檢測這四項指標(biāo)能有效減少漏診率和誤診率。

綜上所述，RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體四種指標(biāo)聯(lián)合檢測診斷RA具有較高的可靠性，臨床應(yīng)用價值較高，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻

[1] Pincus T，Sokka T.Laboratory tests to assess patients with rheumatoid arthritis：advantages and limitaions[J].Rheum Dis Clin North Am，2009，35（4）：731-734.

[2]曾小威，李世剛.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療及免疫分子機制研究進展[J].中華實用診斷與治療雜志，2015，29（11）：1044-1046.

[3] Piana A，Are R M，Manda I，et al.Genotypic eharacterizatofClafi thromycin-resistant Helieobaeter pylori strains[J].New Microbiol，2012，25（2）：123-130.

[4]劉萍，沈旭.聯(lián)合檢查RF、AKA、抗CCP對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床意義[J].哈爾濱醫(yī)藥，2011，31（4）：272-273.

[5]劉冰，郝鐵，陳霞.聯(lián)合檢查ANA、AKA、抗-CCP和RF在診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床意義[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20（2）：109-110.

[6]牛紅青，李小峰，張莉蕓，等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動及骨侵蝕關(guān)系的研究[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2008，12（9）：603-605.

[7]張瓊，羅以勤，汪元，等.4種血清標(biāo)志物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷、疾病活動度的判斷及骨侵蝕的預(yù)測的應(yīng)用價值[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，50（12）：1791-1794.

[8]何思華，陳明舜，盧紹佳，等.抗環(huán)瓜氨酸抗體和類風(fēng)濕因子聯(lián)合測定在61例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷的臨床應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（2）：217-219.

[9]王光彥，高冬花，龔麗坤，等.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體和類風(fēng)濕因子分型聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（5）：696-697.

[10]范俊，郭洪佩，徐瑛.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體、抗角蛋白抗體及類風(fēng)濕因子聯(lián)合檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，15（7）：656-659.

[11]梁麗麗.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者抗環(huán)瓜氨酸抗體檢測的臨床意義[J].臨床醫(yī)學(xué)，2016，36（3）：73-74.

[12]鄭剛，邵月鳳，張寧.類風(fēng)濕因子和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎早期診斷的意義及疾病活動的相關(guān)性[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，11（12）：9-11，16.

[13] Willemze A，B?hringer S，Knevel R，et al.The ACPA recognition profile and subgrouping of ACPA-positive RA patients[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2012，71（2）：268-274.

[14]張新剛，蔣莉，張曉莉，等.4種血清標(biāo)記物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，33（4）：538-541.

[15]姚燕紅，彭琪，黎四平.3種血清學(xué)抗體檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（22）：2840，2842.

[16]熊鄢蘭，付華珍，熊愛華.血清類風(fēng)濕因子與抗環(huán)瓜氨酸肽抗體診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2017，35（1）：98-99.

[17]謝璟，崔江龍.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的實驗室檢查進展[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2011，29（5）：509-512.

[18] Gomez E L，Gun S C，Somanath S D，et al.Ethnic differences in the prognostic utility of rheumatoid factor isotypes and anticyclic citrullinated peptides in rheumatoid arthritis patients：a cross-sectional study[J].Modern Rheumatology，2013，23（4）：716-721.

（收稿日期：2017-07-03） （本文編輯：張爽）endprint