CCL5在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義

陳杰 虞偉星 馬文勇 范曉松 何非平 夏未杰 李波軍

CCL5在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義

陳杰 虞偉星 馬文勇 范曉松 何非平 夏未杰 李波軍

目的檢測趨化因子配體5（CCL5）在膀胱癌中的表達(dá)情況，探討CCL5在膀胱癌中的臨床意義。方法選擇136例膀胱移行細(xì)胞癌患者標(biāo)本和20例正常膀胱組織標(biāo)本，采用免疫組化SP法檢測膀胱癌和正常組織中CCL5的表達(dá)，并結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。結(jié)果正常膀胱組織中CCL5的表達(dá)陽性率明顯低于膀胱癌組織，膀胱癌組織中隨著病理分級和分期的增加，CCL5的表達(dá)陽性率逐漸增高。CCL5在低級別與高級別膀胱癌中高表達(dá)陽性率分別為27.3%和55.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。腫瘤分期Ta～T1和T2～T4CCL5高表達(dá)陽性率分別為38.3%和57.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041）。本組患者隨訪7～117個(gè)月，Kaplan-Merier分析CCL5高表達(dá)陽性率患者的術(shù)后生存時(shí)間明顯降低（P＜0.01）；多因素研究分析，CCL5的表達(dá)是影響患者術(shù)后總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素（P=0.038）。結(jié)論CCL5的表達(dá)陽性率在膀胱癌組織中明顯高于正常組織，檢測CCL5的表達(dá)有助于膀胱癌的診斷及預(yù)后評估。

膀胱癌趨化因子配體5免疫組化診斷預(yù)后

腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于宿主細(xì)胞和腫瘤復(fù)雜的相互作用，而趨化因子在腫瘤與宿主細(xì)胞的相互作用中扮演了重要的角色，趨化因子家族包含大量具有趨化作用的低分子量蛋白，以趨化粒細(xì)胞遷移到炎癥部位。趨化因子家族按結(jié)構(gòu)分為四大類：C、CC、CXC、CX3C，至今已鑒別出50多種不同的趨化因子，大部分是CC和CXC家族成員。趨化因子配體5（CCL5）屬于CC類趨化因子家族，其受體有CCR1、CCR3和CCR5[1]。CCL5在腫瘤和炎性疾病中發(fā)揮重要作用，最近的研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者中CCL5的表達(dá)與疾病進(jìn)展直接相關(guān)；另外，在宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌和黑色素瘤患者的組織和血清中CCL5的表達(dá)與疾病進(jìn)展具有相關(guān)性[2-3]。目前對CCL5的表達(dá)與膀胱癌的關(guān)系研究極少。筆者對比了CCL5在膀胱癌組織與正常膀胱組織中的表達(dá)，并對膀胱癌患者CCL5的表達(dá)與膀胱癌的病理因素及生物學(xué)行為之間的關(guān)系進(jìn)行分析，旨在為臨床判斷膀胱癌分期及疾病進(jìn)展提供重要的分子生物學(xué)指標(biāo)。

1 對象和方法

1.1 對象選取我院泌尿外科2005年1至12月有完整隨訪資料的136例膀胱移行細(xì)胞癌手術(shù)切除的病變膀胱組織和20例同期因其他疾病而手術(shù)患者的正常膀胱組織，均經(jīng)病理檢查證實(shí)。136例膀胱癌患者中男100例，女36例，年齡41～80歲，中位年齡70歲；20例同期手術(shù)患者中男15例，女5例，年齡48～76歲，中位年齡65歲。收集患者的資料包括腫瘤大小、數(shù)目、病理分級、分期（依據(jù)AJCC2002）標(biāo)準(zhǔn)等。

1.2 方法采用SP法進(jìn)行免疫組化測定。組織經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋，作4μm切片，并經(jīng)常規(guī)脫蠟至水，檸檬酸（pH 6.0）高溫修復(fù)抗原，PBS沖洗3次，每次5min，切片于二甲苯中脫蠟，每次15min，以0.3%過氧化氫孵育10min，清除內(nèi)源性的過氧化物酶活性，PBS沖洗3次，每次5min，滴加正常山羊血清封閉，室溫孵育30min，傾去，滴加1∶50抗兔單克隆抗體（美國RD公司，278-RN），4℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3次，每次5min，再加生物素標(biāo)記二抗（美國RD公司，HAF109），室溫孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷CCL5表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，陽性細(xì)胞呈成棕黃色，用雙盲法在高倍鏡下計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例判斷結(jié)果，CCL5陽性細(xì)胞＜25%為陰性，25%≤CCL5陽性細(xì)胞＜50%為中等陽性，CCL5陽性細(xì)胞≥50%為強(qiáng)陽性，以中等陽性、強(qiáng)陽性為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。不同分組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier作生存分析，并進(jìn)行Log-Rank檢驗(yàn)分析組間差異，Multivariate Cox分析多因素對患者術(shù)后生存的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CCL5在膀胱癌組織和正常膀胱組織中的表達(dá)CCL5表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)（圖1）。20例正常膀胱組織中CCL5高表達(dá)5例，占25%；136例膀胱癌組織中高表達(dá)60例，占44.1%，明顯高于正常膀胱組織（P＜0.05）。

圖1 CCL5在膀胱癌中的表達(dá)（a：CCL5陰性；b：CCL5高表達(dá)；×200）

2.2 膀胱癌患者CCL5表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系CCL5表達(dá)陽性率在膀胱癌患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目等方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）；低級別和高級別膀胱癌CCL5高表達(dá)陽性率分別為27.3%（15/55）、55.6%（45/81），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。腫瘤分期Ta～T1和T2～T4CCL5高表達(dá)陽性率分別為38.3%（36/94）和57.1%（24/42），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041）（表1）。本組隨訪7～118個(gè)月，38例患者死亡，Logrank檢驗(yàn)比較性別、年齡、腫瘤大小、數(shù)目、分級及CCL5的表達(dá)等因素研究發(fā)現(xiàn)，CCL5高表達(dá)的患者術(shù)后總生存時(shí)間明顯減少（圖2）。多因素Cox分析，CCL5高表達(dá)是影響患者術(shù)后總生存的獨(dú)立預(yù)后因素（表2）。

表1 膀胱癌患者CCL5表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系（例）

3 討論

圖2 CCL5的表達(dá)對膀胱癌患者術(shù)后總生存的影響

表2 膀胱癌患者術(shù)后總生存影響因素分析

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在美國男性惡性腫瘤發(fā)病率中占第4位，女性中占第7位。在美國2014年新發(fā)膀胱癌74 000例，其中16 000例死亡[4]。根據(jù)腫瘤浸潤程度的不同，膀胱癌分為非肌層浸潤性膀胱癌（non-muscle-invasive bladder cancer，NMIBC）和肌層浸潤性膀胱癌（muscle-invasive bladder cancer，MIBC）。在所有初次診斷的患者中，大約75%的患者是NMIBC Ta～T1，25%的患者是MIBC T2～。NMIBC 5年生存率＞90%，但復(fù)發(fā)率高達(dá)60%～85%，其中20%可進(jìn)展為MIBC[6]。對于MIBC，即使及時(shí)給予全膀胱切除術(shù)治療和各種輔助治療，5年的腫瘤特異性生存率僅為50%～70%[7-8]。目前NMIBC的復(fù)發(fā)給臨床上治療帶了很大的挑戰(zhàn)。MIBC仍是患者死亡的主要原因，根治性的膀胱切除術(shù)仍是治療金標(biāo)準(zhǔn)，但患者的預(yù)后較差，現(xiàn)在的治療方案主要依靠病理分級和分期，而傳統(tǒng)的組織病理學(xué)評價(jià)如分級和分期在預(yù)測膀胱癌的生物學(xué)行為方面受到限制，因此明確導(dǎo)致腫瘤形成和進(jìn)展的分子生物學(xué)改變，能為臨床患者的治療選擇提供合理證據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)，CCL5在膀胱癌組織中呈高表達(dá)，與正常膀胱組織相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CCL5高表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小及數(shù)目無關(guān)，腫瘤分級越高、浸潤越深的患者組織中CCL5高表達(dá)陽性率越高，說明CCL5與膀胱癌的生長及侵襲密切相關(guān)。

CCL5主要表達(dá)于T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板、滑膜成纖維細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和一定類型的腫瘤細(xì)胞[9]。CCL5可以招募大量的粒細(xì)胞到達(dá)炎癥部位，包括T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞，同時(shí)對由T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如IL-2也有趨化作用。CCL5主要通過其受體發(fā)揮作用，目前發(fā)現(xiàn)的受體有CCR1、CCR3和CCR5，而CCR5是最主要的[9]。在胃癌中，CCL5/CCR5的相互作用導(dǎo)致胃癌腫瘤進(jìn)展主要有以下幾種方式：作為生長因子促進(jìn)血管發(fā)生；調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)，包括招募其他的基質(zhì)細(xì)胞和炎細(xì)胞；節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)，包括招募其他的基質(zhì)細(xì)胞和炎細(xì)胞；參與免疫逃逸機(jī)制[10]。因此以CCL5/CCR5軸為靶點(diǎn)的治療已經(jīng)在乳腺癌患者中得到應(yīng)用，在其他腫瘤治療中的應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究[11]。

本研究結(jié)果表明CCL5表達(dá)與膀胱癌的病理分級、分期有關(guān)，而且CCL5的表達(dá)也是預(yù)測患者術(shù)后生存的一個(gè)有效指標(biāo)。因此筆者認(rèn)為進(jìn)一步探討CCL5導(dǎo)致膀胱癌形成的分子機(jī)制，有望為判斷膀胱癌預(yù)后提供一種新的分子生物學(xué)指標(biāo)，同時(shí)還可為膀胱癌的靶向治療提供特異性的靶點(diǎn)。

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Expression of CCL5 in patients with bladder cancer and its clinico pathological significance

CHEN Jie,YU Weixing,MA Wenyong,et al.

Department of Urology,Shaoxing Shangyu People's Hospital,Shaoxing 312300,China

ObjectiveTo investigate the expression of CCL5 in tumor tissue of patients with bladder cancer and its clinicopathological significance.MethodsThe expression of CCL5 protein in 136 specimens of bladder cancer and 20 specimens of normal bladder tissues was detected by SP immunohistochemtry,its correlations with clinicopathologic features of patients was analyzed.ResultsThe expression of CCL5 was higher in tumor tissues than that in normal bladder tissues.The positive rate of CCL5 in low grade bladder cancer was lower than that in high grade bladder cancer(27.3%vs.55.6%,P=0.01);the expression rate in non-muscle-invasive bladder cancer was lower than that in muscle-invasive bladder cancer(38.3%vs 57.1%,P=0.041).The patients were followed up for 7-117 months.Kaplan-Meier survival analysis demonstrated that CCL5 expression was significantly associated with shorter overall survival(P＜0.01).Multivariate analysis further demonstrated that CCL5 was an independent prognostic factor for patients with bladder cancer.ConclusionThe expression of CCL5 protein is highly in bladder cancer,the detection of the expression of CCL5 protein can be used for diagnosis and prognosis of bladder cancer.

Bladder cancer CCL5 Immunohistochemtry Diagnosis Prognosis

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.20.2017-43

312300紹興市上虞人民醫(yī)院泌尿外科

虞偉星，E-mail：shangh_wei@hotmail.com

2017-01-18）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）