香菇菌粗酶液對(duì)豬場(chǎng)霧霾顆粒中菲的作用研究

周孟清，賈峰,張惠茹,宴和平，謝申伍，黃進(jìn)，羅 宇,阮婷婷

（1.河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，鄭州，450001；2.廣州快大飼料有限公司，廣州 511450;3.云南東恒集團(tuán)生物飼料公司，曲靖富源 655500）

香菇菌粗酶液對(duì)豬場(chǎng)霧霾顆粒中菲的作用研究

周孟清1，賈峰1,張惠茹1,宴和平2，謝申伍3，黃進(jìn)1，羅 宇1,阮婷婷1

（1.河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，鄭州，450001；2.廣州快大飼料有限公司，廣州 511450;3.云南東恒集團(tuán)生物飼料公司，曲靖富源 655500）

目的：近5年以來,我國(guó)霧霾污染十分嚴(yán)重，豬場(chǎng)也同受其害,霧霾中包括菲等有害物質(zhì)危害豬和養(yǎng)殖人員的健康;以往的研究發(fā)現(xiàn)香菇菌分泌的漆酶等酶類可以降解多種有害物質(zhì),因此本實(shí)驗(yàn)研究香菇菌粗酶液對(duì)霧霾中的菲的作用,以便為消除霧霾中菲對(duì)人和動(dòng)物的有害作用提供一些參考。方法：本實(shí)驗(yàn)首先采用L934正交實(shí)驗(yàn)，研究流速（0.6mL/min、0.8 mL/min、1.0 mL/min），波長(zhǎng)（210nm、220nm、254nm），柱溫（25℃、30℃、40℃），有機(jī)相甲醇和水相之比（75∶25、70∶30、85∶15）來確定高效液相色譜儀器檢測(cè)霧霾中的菲的條件參數(shù)。然后采用L934正交實(shí)驗(yàn)，研究溫度（35℃、40℃、30℃），酶處理時(shí)間（10h、20h、30h），pH（4.0、4.4、4.8），加入酶的量（5mL、10mL、15mL）對(duì)香菇粗酶液降解霧霾中菲的影響。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)最適條件：溫度40（℃）,pH值4.0,處理時(shí)間30（h）,加入酶的量10（mL）；在此條件下菲含量為0.351846±0.047246 ng/m3，降解前霧霾樣品中的菲含量為108.3298 ng/m3，降解率達(dá)到99.68%。結(jié)論：可以用香菇菌粗酶液來降解霧霾中的菲，香菇菌粗酶液可以被開發(fā)成為有潛力的解毒劑。

霧霾;菲;香菇菌;粗酶液;高效液相色譜;降解

0 引言

霧霆天氣加劇畜禽養(yǎng)殖業(yè)舍內(nèi)空氣環(huán)境惡化,畜禽出現(xiàn)食欲不振、疾病率提高等現(xiàn)象。究其原因是霧霾顆粒直徑小，大部分霧霾顆粒直徑小于2.5μm,可以深入到畜禽和其它動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)支氣管和肺泡，且比表面積較大，易于吸附有機(jī)污染物，對(duì)畜禽和其它動(dòng)物的肝、腎等臟器、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等具有急性和慢性毒性。霧霾顆粒中的有機(jī)污染物包括多環(huán)芳烴類如：苊烯、苊、芴、熒蒽、芘、苯并（a）蒽、屈、苯并（b）熒蒽、苯并（K）熒蒽、苯并（a）芘等成分[1]，多環(huán)芳烴（PAHs）被認(rèn)定為一種致癌、致畸、致突變物質(zhì)，危害最為顯著,在目前己知的1000多種致癌物質(zhì)中，超過1/3是PAHs及其衍生物,菲（phen?anthrene）是一種含三個(gè)苯環(huán)的稠環(huán)芳烴，分子式C14H10,菲分子量178.22。它存在于煤焦油中。菲的三個(gè)環(huán)的中心不在一條直線上,是蒽的同分異構(gòu)體，為白色有光澤并發(fā)熒光的片狀晶體，熔點(diǎn)101℃ ,沸點(diǎn)340℃ ,密度0.980g/cm3能升華,不溶于水，稍溶于乙醇，能溶于乙醚、冰醋酸、苯、四氯化碳和二硫化碳等，溶液具有藍(lán)色熒光[1],菲是無色片狀晶體,二苯并[a,h]菲具有致癌作用,可能引起皮膚的腫瘤[2]。因此,降解消除畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境的霧霆等有害物質(zhì)成為研究的必然趨勢(shì)。

香菇(Lentinus edodes)不僅是一種食用菌而且還具有很高的藥用價(jià)值，其子實(shí)體中存在漆酶（Lac），漆酶是一種非特異性氧化酶，能夠氧化的底物至少有250種[3],這些底物中有相當(dāng)一部分的結(jié)構(gòu)與木質(zhì)素相似；而木質(zhì)素的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，化學(xué)性質(zhì)不活潑，漆酶能夠降解木質(zhì)素且具有較高的耐熱性，這利于漆酶資源的開發(fā)和利用，漆酶氧化木質(zhì)素的過程已有多種理論[4]，這些理論都認(rèn)為氧化過程中會(huì)形成自由基，使得單元結(jié)構(gòu)之間的連接斷裂；或者在漆酶和氧氣條件下能夠發(fā)生聚合反應(yīng)，還原態(tài)漆酶被氧化還原，整個(gè)反應(yīng)過程中是通過四個(gè)銅離子協(xié)同傳遞電子和其價(jià)態(tài)的變化來實(shí)現(xiàn)的[5]。

探討和研究霧霾的組分菲的生物降解，對(duì)防治霧霾和改善畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)空氣環(huán)境質(zhì)量具有十分重要的科學(xué)意義,為我國(guó)治理畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)霧霾污染提供一種有效的方法。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

菌種:香菇菌種購(gòu)自中國(guó)菌種保藏中心。香菇菌粗酶液由本實(shí)驗(yàn)室制備保存（酶活8U/mL）；霧霾樣品由大氣顆粒物中流量采樣器采集，TH-150型（武漢天虹儀器儀表有限公司），采樣平均流量為100L/min,采集地點(diǎn)在某豬場(chǎng)青年豬舍內(nèi)。

1.2 主要試劑和儀器

愈創(chuàng)木酚,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，化學(xué)純；甲醇，天津四友有限公司，色譜純；丁二酸（琥珀酸），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純；瓊脂粉，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，生化級(jí)試劑；檸檬酸鈉，洛陽市化學(xué)試劑廠，分析純；無水乙醇，天津市天力化學(xué)試劑有限公司，分析純；氫氧化鈉，洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司，分析純；葡萄糖，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純。

主要儀器：高效液相色譜儀1260Infinity,Agi?lent Technologies，配PAH專用柱;AR224CN電子天平，奧豪斯儀器上海有限公司；BCD-256KFA海爾冰箱，青島海爾股份有限公司；便攜式pH計(jì)，梅特勒-托利多儀器有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；飛鴿牌TDL-5-A離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HH-4型水浴鍋，金壇市杰瑞爾電器有限公司；LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠；砂芯過濾裝置，津騰科技有限公司；0.22μm有機(jī)相濾膜，上海市新亞凈化器件廠；T6紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；電子萬用爐，北京市永光明醫(yī)療器械儀器有限公司；科友牌C30玻璃儀器氣流烘干器，河南予華儀器有限公司；KQ-300E超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；ZHJH-C1112B雙人單面超凈工作臺(tái)，南京遠(yuǎn)拓科學(xué)儀器有限公司；ZX?MP-A1150恒溫箱，鄭州南北儀器設(shè)備有限公司。

1.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L934正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)控制高效液相色譜儀的溫度、波長(zhǎng)、流速、有機(jī)相與水的配比來尋找分析霧霾溶液成份的最佳條件。之后，又通過L934正交試驗(yàn)控制粗酶液作用于霧霾樣品的溫度、pH、反應(yīng)時(shí)間、加入的酶量，尋找香菇粗酶液降解霧霾樣品中菲的最適條件。

1.4 PDA培養(yǎng)基以及倒平板與接種

稱取200.40g的馬鈴薯，切成丁狀的土豆塊，在沸水浴中煮30min。稱取15.02g的瓊脂粉，稱取20.02g的葡萄糖。溶于過濾好土豆溶液中，加蒸餾水至1L，和培養(yǎng)皿等儀器儀器放入高壓滅菌箱中進(jìn)行滅菌。

滅菌后把冷卻的PDA培養(yǎng)基加熱溶解，然后將溶解的PDA在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行倒平板。倒好平板后，用滅過菌的接種針對(duì)香菇菌進(jìn)行接種，放入25℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

1.5 香菇粗酶的提取

將培養(yǎng)好的香菇菌充分碾碎，加入適量的蒸餾水在25℃的環(huán)境下泡4h，然后在3500r/min的離心機(jī)中離心5min，就得到香菇菌的粗酶液。

1.6 愈創(chuàng)木酚法測(cè)漆酶的酶活

取50mmol/L琥珀酸鈉為緩沖液（pH4.5），在10ml反應(yīng)混合液中含0.04mmol愈創(chuàng)木酚和1mL的粗酶液，在30℃的恒溫水浴鍋中反應(yīng)30min后，于465nm處測(cè)定其吸光度。以滅活酶液的反應(yīng)混合液為對(duì)照。（酶滅活的方法：在沸水浴中將酶液放入到其中水浴加熱2～5min后，拿出放涼即視為滅活完畢）。

使用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度。具體步驟：a、打開紫外分光光度計(jì)。b、將一對(duì)比色皿清洗干凈，加入蒸餾水將波長(zhǎng)設(shè)定為465nm進(jìn)行比對(duì)，以此來檢測(cè)比色皿之間是否有誤差（檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)沒有誤差）。c、將反應(yīng)好的酶液與滅活酶液加入到比色皿中，將滅活酶液編號(hào)為一，反應(yīng)酶液編號(hào)為二作為相互對(duì)照實(shí)驗(yàn)，測(cè)得兩者吸光度差為（0.242），經(jīng)過公式1：酶活（U/mL）=106×V總×ΔA/(V酶×ε×Δt)（式1）:其中V總、V酶分別代表反應(yīng)體系的總體積及反應(yīng)酶液的體積；ε為吸光系數(shù)，愈創(chuàng)木酚的ε465=1.21×104mol-1·L·cm-1)。算得香菇粗酶液中漆酶的活性為8.0126U/mL。

1.7 霧霾樣品中菲的測(cè)定（菲的測(cè)定波長(zhǎng)是251nm）

霧霾樣品的含量采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，以甲醇為有機(jī)溶劑，稱取5.02g的霧霾樣品溶于甲醇中，充分溶解后使用有機(jī)相濾紙進(jìn)行過濾得到澄清溶液，定容至1000mL,每次進(jìn)樣量為20μL。采用 Agilent PAH專用柱（3um，100mm×4.6mm）。用L934正交實(shí)驗(yàn),以流速（0.6mL/min、0.8 mL/min、1.0 mL/min），波長(zhǎng)（210nm、220nm、254nm），柱溫（25℃、30℃、40℃），有機(jī)相甲醇和水相之比（75∶25、70∶30、85∶15）設(shè)計(jì)的正交表，最適的條件。最適條件為流速1.0 mL/min，溫度30℃，波長(zhǎng)210nm，有機(jī)相甲醇和水相之間的比為75∶25。菲的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制,稱取250.6mg的菲標(biāo)準(zhǔn)品溶于甲醇溶液，配制成500mL體積備用，菲的標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為0.5012mg/mL。

表1 霧霾檢測(cè)條件的4因素3水平正交實(shí)驗(yàn)表

1.8 香菇粗酶液處理霧霾樣品

采用L934正交實(shí)驗(yàn)，四因素分別是溫度（35℃、40℃、30℃），處理時(shí)間（10h、20h、30h），pH（4.0、4.4、4.8），加入酶的量（5mL、10mL、15mL）。得到表2所示。

1.9 霧霾樣品中某些物質(zhì)的檢測(cè)

按操作要求打開高效液相儀器，按照波長(zhǎng)210nm、柱溫30℃、流速1.0mL/min、有機(jī)相與水相的比為75∶25，待基線平衡后，開始進(jìn)樣。得出數(shù)據(jù)見表2和圖2、圖3、圖4。

圖1 菲的高效液相色譜圖，菲的含量為0.5012mg/mL

表2 香菇粗酶液處理霧霾樣品中菲的4因素3水平正交實(shí)驗(yàn)表

圖2 降解前，霧霾樣品中的菲的含量為108.3298 ng/m3,圖中菲的保留時(shí)間為6.437，峰面積為23.62807，而此圖的總峰面積為1094.92453，每次取樣量為20μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 高效液相色譜檢測(cè)條件參數(shù)的確定結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)中作者采用表1霧霾檢測(cè)條件的4因素3水平正交實(shí)驗(yàn)表來找出高效液相色譜檢測(cè)霧霾樣品的最適條件，通過表1實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)序號(hào)8條件為最適條件：流速1.0mL/min,溫度30℃,波長(zhǎng)210nm,有機(jī)相和水相之間的比為75∶25。

2.2 不同條件下香菇粗酶液降解霧霾樣品的效果

如圖2所示，降解前霧霾樣品中的菲含量為108.3298ng/m3，在溫度40℃,pH值4.0,處理時(shí)間30h,加入酶的量10mL的條件下降解，菲含量為0.351846±0.047246(ng/m3)，降解率達(dá)到99.68%。

在表2的實(shí)驗(yàn)條件下，采用香菇粗酶液降解霧霾樣品，然后通過高效液相色譜儀檢測(cè)降解前后樣品中物質(zhì)含量的變化,可見樣品中的所含物質(zhì)數(shù)量發(fā)生了變化。表明此試驗(yàn)不但降解了菲，同時(shí)還降解了一些其他物質(zhì)。

并且在試驗(yàn)中作者發(fā)現(xiàn)在添加香菇粗酶液后，霧霾樣品溶液中有沉淀生成，通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)粗酶液與霧霾樣品中物質(zhì)有反應(yīng)，所以導(dǎo)致生成沉淀。

圖3 （5a） 此圖中香菇粗酶液處理霧霾樣品中的菲的條件是溫度40（℃）,pH值4.0,處理時(shí)間30（h）,加入酶的量10（mL）。菲的保留時(shí)間為6.307，峰面積為3.35696，總峰面積為5.29206×104,計(jì)算得出菲的含量為0.318438(ng/m3)，由圖3和圖4中菲的含量取平均數(shù)得0.351846±0.047246(μg/m3)。

圖4 （4a） 此圖中香菇粗酶液處理霧霾樣品中的菲的條件是溫度40（℃）,pH值4.0,處理時(shí)間30（h）,加入酶的量10（mL）。菲的保留時(shí)間為6.283，峰面積為4.02794，總峰面積為5.24855×104,計(jì)算得出菲的含量為0.385254(ng/m3)，由圖3和圖4中菲的含量取平均數(shù)得0.351846±0.047246(μg/m3)。

在表2中，2號(hào)和3號(hào)試驗(yàn)條件的降解效果也較好，2號(hào)的試驗(yàn)條件為在溫度35℃,pH值4.4,處理時(shí)間20h,加入酶的量10mL，降解后菲的含量為0.362904±0.066193μg/m3，降解率達(dá)到99.67%；3號(hào)的試驗(yàn)條件為在溫度35℃,pH值4.8,處理時(shí)間30h,加入酶的量15mL，降解后菲的含量為0.433875±0.613592 μg/m3，降解率達(dá)到99.60%，2號(hào)和3號(hào)條件與4號(hào)條件比較差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 高效液相色譜檢測(cè)霧霾樣品菲的前提條件

實(shí)驗(yàn)中高效液相色譜儀器的穩(wěn)定對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確都十分重要，在進(jìn)樣前的準(zhǔn)備工作顯得十分重要[6]，一定等到基線完全平衡時(shí)在進(jìn)樣，甲醇試劑必須是色譜純級(jí)[7]，并且霧霾樣品、水相和甲醇都必須經(jīng)過超聲脫氣，來保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性[8]。高效液相色譜被用來檢測(cè)生物質(zhì)燃燒時(shí)產(chǎn)生的表面活性物質(zhì),配上GC/MS檢測(cè)非常有效[9]。

3.2 高效液相色譜檢測(cè)霧霾樣品菲的正交試驗(yàn)條件

何藝（2017）用固相萃?。咝б合嗌V法測(cè)定PM2.5中多環(huán)芳烴的條件為柱溫為35℃，流速0.5mL/min，以水和乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫[10]。蒲彥利（2016）研究PM2.5中16種多環(huán)芳烴的高效液相色譜測(cè)定中用Athena PAHs專用柱（4.6 mm×250 mm，5μm），柱溫30℃，流動(dòng)相為乙腈和超純水，流速1.2 mL/min，進(jìn)樣量10μL[11]。本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造性的將正交實(shí)驗(yàn)用于高效液相色譜檢測(cè)條件的優(yōu)化中，得到了檢測(cè)霧霾中菲和其它物質(zhì)的最佳流速1.0 mL/min，溫度30℃，波長(zhǎng)210nm，流動(dòng)相甲醇和水相之間的比為75∶25；正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)有試驗(yàn)次數(shù)少，選擇的試驗(yàn)條件水平數(shù)較多效率高的優(yōu)點(diǎn)。

3.3 香菇粗酶液成分及活性

香菇粗酶液中含有漆酶和其它酶類，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)氮營(yíng)養(yǎng)素對(duì)香菇產(chǎn)錳過氧化酶和漆酶有影響[12]；釀酒過程中含有麥芽的副產(chǎn)物作為香菇的培養(yǎng)基可以用來產(chǎn)生漆酶和錳過氧化酶[13]。葉漢玲,王傳槐（1997）對(duì)香菇子實(shí)體漆酶進(jìn)行分離純化，用硫酸銨分級(jí)沉淀和離子交換纖維素柱層析法，得到單一組分的漆酶，通過SDS-PAGE凝膠電泳法，測(cè)得其摩爾式量為55000，研究表明該酶的最適pH為2.6，最適溫度為70℃，酶的動(dòng)力學(xué)研究測(cè)出米氏常數(shù)Km值為0.142mmol[14]，本試驗(yàn)中對(duì)漆酶的性質(zhì)未進(jìn)行研究。

許多實(shí)驗(yàn)表明，漆酶和錳過氧化物酶不能單獨(dú)降解木質(zhì)素，甚至有實(shí)驗(yàn)表明漆酶在降解木質(zhì)素時(shí)幾乎不起作用,而兩者在一起能有效地降解木質(zhì)素；事實(shí)上對(duì)于木質(zhì)素這種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的材料來說，其降解是一個(gè)復(fù)雜的多種酶體系共同作用的結(jié)果，不同的實(shí)驗(yàn)得到不同的結(jié)果是完全可以理解的[3]。

張玉(2006)發(fā)現(xiàn)香菇的靜置培養(yǎng)優(yōu)于振蕩培養(yǎng)；最適生長(zhǎng)及產(chǎn)酶條件：pH值3.5，20℃，Cu2+濃度為0.4mmol/L；阿魏酸、愈創(chuàng)木酚、沒食子酸、黎蘆醇促進(jìn)香菇合成漆酶的作用不明顯,會(huì)抑制菌絲生長(zhǎng)；Tween-80不利于漆酶合成。漆酶在60℃條件下保溫1h后仍殘余了2%的活力；以2,2′-連氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)為底物的最佳反應(yīng)溫度是65℃,pH值為2.2(檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液體系)[15]。孫瑞雪（2015）對(duì)虎皮香菇漆酶發(fā)酵進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)酵液中漆酶活性達(dá)到462.59 U/mL，為優(yōu)化前的26倍[16]。本實(shí)驗(yàn)中香菇粗酶液中漆酶的活性為8.0126U/mL，數(shù)值較低，因?yàn)槲床扇?yōu)化培養(yǎng)條件，若優(yōu)化之后，降解霧霾中菲的效果會(huì)更好。有研究發(fā)現(xiàn)漆酶、碳水化合物清除酶、α-支鏈淀粉酶和β葡聚糖酶組成的復(fù)合體系可以用來促進(jìn)香菇發(fā)酵大豆粉中酚類抗氧化劑的形成[17]。

3.4 霧霾中菲的含量分布

李建平（2017）采樣地點(diǎn)在天津,用乙腈處理霧霾樣品檢測(cè)到菲的含量0.19～0.38ng/m3,含量不低[18]。何藝(2017)測(cè)定某小吃街大氣顆粒物PM2.5中PAHs質(zhì)量濃度,發(fā)現(xiàn)菲的含量為2.292～9.078μg/L，含量較高[10];王茜(2016)測(cè)定唐山市區(qū)大氣PM2.5中18種PAHs的水平時(shí)，采用正己烷/二氯甲烷為萃取劑，流動(dòng)相用乙腈和水，檢測(cè)到菲的含量為1.8 ng/m3，采樣地點(diǎn)位于唐山市東部和西部?jī)伤鶎W(xué)校的門前，其附近沒有明顯污染源，周圍無高大建筑物,使用PM2.5大流量采樣器（流速為100 L/min），進(jìn)氣口高度離地面約1.5 m，采樣時(shí)間為2013-12-01～2014-02-07，每天早晨8:00點(diǎn)開始采樣，每個(gè)樣品連續(xù)采集24h，共獲得37個(gè)樣品，采樣所用濾膜為玻璃纖維濾膜[19]。常君瑞(2016)研究北京某地PM2.5中多環(huán)芳烴檢測(cè)到菲0.12～0.20 ng/m3,以乙腈和水作為流動(dòng)相[20]。江陽(2015)研究成都市不同區(qū)域的空氣中在11月,12月,1月的霧霾中菲的含量為2.01～28.1,1月份污染嚴(yán)重[21]。

曾濤（2015）發(fā)現(xiàn)冬季廣州市越秀區(qū)某小學(xué)16種PAHs分析結(jié)果菲的平均含量為1.401ng/m3,可見校園內(nèi)污染也較嚴(yán)重[22]。彭希瓏(2009)研究南昌市區(qū)霧霾成分,檢出菲0.141～3.867 ng/m3,污染較嚴(yán)重[23]。高少鵬（2006）發(fā)現(xiàn)北京市某鋼鐵廠和焦化廠附近空氣中大氣可吸入顆粒物PM2.5中的16種EPA優(yōu)控多環(huán)芳烴(PAHs)中菲的含量為12.4～77.9 ng/m3,污染情況嚴(yán)重[24]。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)先使用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)高效液相檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化，得到最適條件為流速1.0 mL/min，溫度30℃，波長(zhǎng)210nm，有機(jī)相甲醇和水相之間的比為75∶25。然后再用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化香菇粗酶液降解霧霾樣品中菲的條件，結(jié)果為溫度40（℃）,pH值4.0,處理時(shí)間30（h）,加入酶的量10（mL）；降解前霧霾樣品中的菲含量為108.3298 ng/m3，降解后菲含量為0.351846±0.047246 ng/m3，降解率達(dá)到99.68%。

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1008-6137（2017）05-0004-07

周孟清（1976-）男，湖南長(zhǎng)沙，講師，主要研究方向飼料資源和添加劑開發(fā)。

2017-08-17.