一例豬繁殖與呼吸綜合征感染時的檢測與分析

李凱航 楊顯超 鞠厚斌 吳秀娟 陶田谷晟 王 建

（上海市動物疫病預防控制中心，上海 201103）

一例豬繁殖與呼吸綜合征感染時的檢測與分析

李凱航 楊顯超 鞠厚斌 吳秀娟 陶田谷晟 王 建*

（上海市動物疫病預防控制中心，上海 201103）

為對豬場豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的監(jiān)測數(shù)據(jù)進行科學分析，通過繪制抗體曲線、分析抗體數(shù)據(jù)和進行病原學檢測做出綜合判斷。結果表明，科學的數(shù)據(jù)分析才能揭示群體真實免疫狀況并可提示感染，抗體監(jiān)測的作用不容忽視。

豬繁殖與呼吸綜合征；感染；抗體監(jiān)測

豬繁殖與呼吸綜合征，俗稱藍耳病，1996年傳入我國，2005—2006年期間由于核苷酸序列突變，產生藍耳病病毒變異株，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失[1]。各養(yǎng)殖場（戶）對該病的免疫非常重視，希望能夠運用有效手段監(jiān)測該病的真實抗體水平和感染現(xiàn)狀，從而了解養(yǎng)殖各階段的帶毒狀況、免疫水平、發(fā)病狀態(tài)，結合場內生產參數(shù)，了解和較全面掌握該病在場內的控制情況。但在實際生產中，有可能日常監(jiān)測中出具的檢測報告顯示采集的血清抗體均為陽性，但場內流產數(shù)顯著增多。在這種情況下，其實可通過對抗體動力學曲線和其他具體數(shù)據(jù)的詳細分析作出初步判斷。

1 免疫抗體檢測

上海市某豬場發(fā)現(xiàn)生產參數(shù)下降，繁殖母豬流產率升高，對其豬繁殖與呼吸綜合征抗體日常監(jiān)測數(shù)據(jù)進行整理和分析，繪制了抗體變化動力學曲線并對抗體均值和離散度加以分析，認為其疑似感染藍耳病。其中抗體均值以S/P值表示，S/P=(樣品-陰性對照平均值)/(陽性對照平均值-陰性對照平均值)，離散度=均值/標準差×100%。

圖1 疑似發(fā)病場各生產階段豬繁殖與呼吸綜合征抗體動力學曲線

該場免疫程序為14日齡、140日齡和170日齡免疫高藍弱毒苗（江西株），母豬普免3次，監(jiān)測該病抗體個體陽性率為93.22%，抗體整體水平較高。從圖1可以看出：抗體水平在7周齡產生明顯下降，妊娠后期出現(xiàn)明顯升高現(xiàn)象，為明確是否為野毒感染所致，對數(shù)據(jù)進行了具體分析。

圖2 各生產階段豬繁殖與呼吸綜合征抗體均值與離散度變化

從圖2可以看出，第7周抗體S/P均值僅為1.2，但離散度卻達到131%，此時母源抗體已基本消耗殆盡，野毒感染幾率較大。妊娠13周時，抗體S/P均值高（3.0），離散度低（27%），野毒感染幾率小。

2 病原學檢測

為了印證抗體監(jiān)測結果，對3～25周的豬采集全血，按10份/階段進行采樣和PCR檢測，結果見圖3。

圖3 3—25周齡豬繁殖與呼吸綜合征PCR檢測陽性率

由圖3可以看到，在3～25周的病原學監(jiān)測數(shù)據(jù)中，3～11周出現(xiàn)病原感染，從哺乳仔豬一直持續(xù)到育肥中期，始終存在野毒感染，保育后期（9周）感染最嚴重。從育肥后期轉后備期間，豬場整體感染狀況相對平穩(wěn)。我們隨后挑選了30份抗體監(jiān)測S/P值大于2.5的豬，采集全血樣品進行PCR，結果從24份樣品中檢出了藍耳病病原，符合率達到80%以上，說明抗體檢測與病原學檢測數(shù)據(jù)具有較高的一致性。

3 討論

3.1 僅憑群體抗體陽性率一項指標無法反映免疫效果和抗病能力

在血清學監(jiān)測中，當前選用的經(jīng)典毒株或高藍毒株疫苗均可以產生很高的陽性率，弱毒苗打一次就可以使群體監(jiān)測ELISA抗體水平達到70%以上[2]。但群體免疫水平并不代表中和抗體水平，打了苗發(fā)病的場戶仍然有很多，不對免疫數(shù)據(jù)進行詳細分析是無法真實反映免疫效果的[3]。藍耳病抗體陽性率與保護力之間的關系，并非正相關，應對抗體的均值和離散度更加關注：均值過低，可能產生亞中和水平的抗體，反而導致藍耳病病毒產生抗體依賴性增強作用（ADE）；均值過高，則可能是病毒感染造成的感染抗體占主導；健康豬群的抗體離散度一般不會超過30%，如果離散度過高，不管均值如何，同樣代表場內正在發(fā)生疫情。雖然當前檢測藍耳病所用的不同檢測試劑盒針對病毒核衣殼、囊膜等不同蛋白，產生的原始數(shù)據(jù)略有不同，但繪制出的抗體曲線趨勢是一致的，對抗體離散度的計算也不受影響，通過對抗體監(jiān)測數(shù)據(jù)進行科學分析，有利于對場內疫情和免疫效果進行初步判斷。

3.2 監(jiān)測樣品采集應涵蓋各主要生產階段和環(huán)節(jié)

隨著當前藍耳病流行毒株的多樣化和復雜化，疫苗毒株的選用和場內優(yōu)勢毒株是否匹配？病毒侵襲時各生產階段具體免疫效果如何？到底病毒存在于哪個生產環(huán)節(jié)，需要對哪個環(huán)節(jié)重點關注？這些問題僅靠一個群體陽性率指標顯然無法回答，需要各養(yǎng)殖場（戶）針對本場具體情況，按照各生產階段的實際規(guī)模選取采樣方案，對群體免疫效果進行全面的、實時的監(jiān)控和分析。每個生產階段應按照規(guī)模比例或參照流行病學調查原理，制定合理置信區(qū)間和可接受流行率采集樣品。血清樣品采集的策略應最有利于對免疫水平和感染狀況作出整體評價，表1僅供參考。

另外，因為豬只感染藍耳病病毒12小時即可造成持續(xù)2周的病毒血癥，并會在1～4個月時間里發(fā)生持續(xù)感染[4]，發(fā)病期間可從抗凝血中檢出病毒，故抗凝血樣品可用于該病的病原學調查，采集方便、快捷，如發(fā)現(xiàn)抗體數(shù)據(jù)異常，應及時采集抗凝血進行病原學檢測。

表1 豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測方案

3.3 場內抗體監(jiān)測數(shù)據(jù)分析仍然具備重要參考價值

雖然抗體監(jiān)測無法區(qū)分感染抗體和免疫抗體，但是，當前已有多個試劑生產商根據(jù)監(jiān)測數(shù)據(jù)的積累制定了感染抗體的參考值，可起到重要的參考作用。按照過往經(jīng)驗，ELISA抗體滴度與病毒感染程度存在相關性。按照監(jiān)測經(jīng)驗，ELISA的S/P值超過2.5則提示感染，但近年來隨著廣大養(yǎng)殖場（戶）對高藍弱毒苗的認同程度提高，疫苗免疫效果得到了普遍提升，試劑盒的感染閾值也應該有所提升，具體提升到多少尚待探討。雖然當前病原學監(jiān)測已益發(fā)重要，但對傳統(tǒng)抗體監(jiān)測數(shù)據(jù)的及時、科學、全面分析，仍是真正了解養(yǎng)殖場（戶）的免疫狀態(tài)和免疫效果的良策，也是提示場內正在發(fā)生的疾病感染和流行的重要工具[5]。

總之，隨著藍耳病疫病的不斷發(fā)生及流行毒株的復雜化，藍耳病的抗體監(jiān)測工作不僅不能忽視，而且還要進一步加強和細化，要開展實時跟蹤和反饋。各養(yǎng)殖場（戶）應保持一定的監(jiān)測頻次和范圍，對發(fā)病場的疫苗免疫程序及時進行合理調整，實現(xiàn)對群體健康的動態(tài)監(jiān)控和再平衡。

[1]代軍,雷蕾,任志華.豬繁殖與呼吸綜合征防控研究進展[J].動物醫(yī)學進展,2014,35(4):97-101.

[2]陳紅玲,黎作華,萬春燕,等.高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征弱毒疫苗在規(guī)?；i場中的臨床應用與分析 [J].中國豬業(yè),2015,10(8):41-44.

[3]劉功成,張倩,屈勇剛,等.北疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體的檢測與分析[J].中國豬業(yè),2016,11(1):41-43.

[4]顧小雪,原霖,遇秀玲,等.豬場如何實施主要垂直傳播性疫病的動態(tài)監(jiān)測[J].豬業(yè)科學,2012,29(10):30-32.

[5]周緒斌,李聰,秦云,等.規(guī)?；i場系統(tǒng)血清學監(jiān)測在防疫體系中的作用及實施方法[J].今日養(yǎng)豬業(yè),2008(4):19-23.

S852.65

B

1673-4645(2017)10-0050-03

2017-09-19

上海市生豬產業(yè)技術體系建設 ﹝滬農科產字（2017）第6號﹞

李凱航（1977-），男，碩士，高級獸醫(yī)師，從事預防獸醫(yī)學工作，E-mail：691126830@qq.com*

王建，E-mail：jianwhlj@163.com