運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑及大蒜素的干預(yù)作用研究

陳 平，郭世豪，孫 劍

（1.北京師范大學(xué)體育與運(yùn)動(dòng)學(xué)院，北京100875；2.呂梁學(xué)院體育系，山西呂梁033000；3.首都體育學(xué)院研究生部，北京100191；4.新疆師范大學(xué)體育學(xué)院，新疆烏魯木齊830000）

運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑及大蒜素的干預(yù)作用研究

陳 平1，2，郭世豪3，孫 劍4

（1.北京師范大學(xué)體育與運(yùn)動(dòng)學(xué)院，北京100875；2.呂梁學(xué)院體育系，山西呂梁033000；3.首都體育學(xué)院研究生部，北京100191；4.新疆師范大學(xué)體育學(xué)院，新疆烏魯木齊830000）

目的：研究長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑及大蒜素的干預(yù)作用。方法：分別采用胃酶酸解法、苦味酸—天狼星紅染色法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法、放射免疫技術(shù)、雙抗體夾心法、免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠心肌羥脯氨酸（HYP）的含量（并計(jì)算膠原濃度（CC））、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）、小動(dòng)脈周?chē)z原容積分?jǐn)?shù)（PVCA）、心肌血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）mRNA表達(dá)、心肌局部血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）含量、血清Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）、Ⅲ型前膠原氨基端肽（PIHNP）、心肌AT1受體（AT1R）及Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：疲勞組大鼠心肌羥脯氨酸（HYP）、膠原濃度（CC）、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）、小動(dòng)脈周?chē)z原容積分?jǐn)?shù)（PVCA）、心肌局部血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）含量、血清Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）、心肌血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）mRNA表達(dá)、心肌AT1受體（AT1R）及Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)量顯著升高，PIHNP及Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)量顯著降低；干預(yù)組大鼠較疲勞組大鼠心肌羥脯氨酸（HYP）含量、膠原濃度（CC）、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）、小動(dòng)脈周?chē)z原容積分?jǐn)?shù)（PVCA）、心肌局部血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）含量、血清Ⅰ型前膠原羧基端肽（PICP）、肌血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）mRNA表達(dá)、心肌AT1受體（AT1R）及Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)顯著降低，PIHNP及Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)量顯著升高。結(jié)論：大蒜素干預(yù)能使長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌纖維化早期良性逆轉(zhuǎn)，可能與ACEmRNA、AT1R表達(dá)水平的改變有關(guān)。

大蒜素；運(yùn)動(dòng)性疲勞；大鼠；心肌膠原纖維

隨著競(jìng)技體育運(yùn)動(dòng)技術(shù)水平的不斷提高，在過(guò)度訓(xùn)練情況下對(duì)身體各器官的研究越來(lái)越深入。特別是心臟這樣重要的器官，對(duì)過(guò)度訓(xùn)練尤為敏感，最容易遭受損傷［1］。研究發(fā)現(xiàn)，大強(qiáng)度疲勞訓(xùn)練可造成大鼠心肌膠原纖維分布紊亂、過(guò)度增生，形成心肌纖維化，造成心肌纖維病理改變［2］。研究表明，大蒜素具有改善微血管循環(huán)、抵抗氧化應(yīng)激、降低機(jī)體脂肪和血糖，以及抗腫瘤等功效，可使肝纖維化動(dòng)物模型肝組織膠原含量顯著降低，改善其纖維化［3］。那么，大蒜素可否改善心肌纖維化，以及通過(guò)怎樣的機(jī)制發(fā)揮作用，卻鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)建立長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠模型，探討長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑及大蒜素的干預(yù)作用，并對(duì)大蒜素的干預(yù)作用機(jī)理進(jìn)行研究，為有效防止心臟的損傷提供動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性SD大鼠，體重（250±5）g，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中分籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、疲勞運(yùn)動(dòng)組、疲勞運(yùn)動(dòng)＋大蒜素干預(yù)組，每組8只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飼養(yǎng)于動(dòng)物飼養(yǎng)籠內(nèi)，自由攝食飲水，自然晝夜采光，動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度45%～55%。

1.2 造摸方法

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，將疲勞組及干預(yù)組大鼠放入游泳池內(nèi)，進(jìn)行適應(yīng)性游泳3 d，每天1次，每次20 min，空白對(duì)照組大鼠正常飼養(yǎng)不給予任何處理，游泳池為實(shí)驗(yàn)室自制，60 cm×40 cm×100 cm，水溫28℃～32℃。適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)束后，對(duì)疲勞組及干預(yù)組大鼠進(jìn)行16周負(fù)重游泳訓(xùn)練，每只大鼠所負(fù)重量為自身體重的5%，游泳過(guò)程中當(dāng)大鼠浮在水面不運(yùn)動(dòng)時(shí)，用木棍驅(qū)趕，使其維持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，以最大限度耗竭動(dòng)物體力，直至游泳至力竭。大鼠游泳力竭的標(biāo)準(zhǔn)：游泳范圍逐漸縮小，明顯動(dòng)作障礙，驚慌，鼻部在水面上下浮動(dòng)，頭部下沉入水面10 s還沒(méi)有上浮，且連續(xù)超過(guò)3次。游泳訓(xùn)練為2次/d，60 min/次，前后間隔30 min。疲勞組及干預(yù)組同時(shí)分別給以純凈水、大蒜素灌服，灌服劑量為40 mg/kg，均1次/d。

1.3 標(biāo)本的采集

最后一次訓(xùn)練結(jié)束后24 h，將大鼠稱(chēng)重（BW），2%戊巴比妥那（3 m l/kg）腹腔注射麻醉，開(kāi)胸心臟取血2 ml，置于預(yù)冷且處理完畢的試管內(nèi)，混勻后，于電動(dòng)離心機(jī)4℃環(huán)境下，3 000 rpm，離心15 min后，取上清液，－80℃冰箱保存待測(cè)。取血完畢后，以最快速度取出心臟，在冰面上除去大血管，并用冰冷的生理鹽水沖洗，濾紙濾干水分，迅速稱(chēng)量心臟的重量（HW），并計(jì)算心臟重量指數(shù)（HBI）＝［HW（g）/BW（g）×1 000］；部分心肌保存于－80℃冰箱以進(jìn)行心肌間質(zhì)膠原纖維的形態(tài)學(xué)、CVF及PVCA的測(cè)定、心肌膠原含量、AngⅡ含量、ACE mRNA和Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原白蛋、AT1R蛋白表達(dá)的測(cè)定。

1.4 血清P ICP、PⅢNP的測(cè)定

采用雙抗體夾心法ABC—ELISA法，利用酶標(biāo)儀分析軟件進(jìn)行處理后，計(jì)算出P ICP或PIIINP含量。

1.5 心肌膠原含量的測(cè)定

采用胃酶酸解法測(cè)定心肌HYP含量，然后乘以HYP含量系數(shù)7.46，算出膠原濃度（mg/g dry wt）。具體算法如下：組織中HYP含量（μg/1 000 mg）＝［（樣品管吸光度—對(duì)照管吸光度）/（標(biāo)準(zhǔn)管吸光度—對(duì)照管吸光度）］×標(biāo)準(zhǔn)管吸光度樣品中的膠原濃度（ug/1 000 mg）＝樣品羥脯氨酸濃度×7.46（7.46是從羥脯氨酸換算為膠原時(shí)的計(jì)算常數(shù)）。

1.6 心肌組織血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）含量的測(cè)定

采用放射免疫分析法，參照試劑盒（北京博奧森試劑有限公司）操作說(shuō)明書(shū)對(duì)AngⅡ含量進(jìn)行測(cè)定。

1.7 心肌膠原纖維形態(tài)學(xué)分析

經(jīng)染色后的心肌切片，在Olympus顯微鏡上用圖像分析軟件進(jìn)行拍照并對(duì)拍照結(jié)果進(jìn)行半定量分析：用“心肌膠原容積分?jǐn)?shù)＝心室心肌膠原面積/統(tǒng)計(jì)場(chǎng)面積，血管周?chē)z原面積＝小動(dòng)脈管腔周?chē)z原面積/管腔面積”來(lái)代表心室心肌膠原纖維形態(tài)學(xué)變化。

1.8 心肌組織AT1R、1型、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)

采用免疫組織化學(xué)SABC法測(cè)定大鼠心肌組織AT1R、1型、Ⅲ型膠原蛋白含量。用Olympus多媒體圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行AT1R、CTGF、1型、Ⅲ型膠原蛋白相對(duì)含量的分析。

1.9 心肌組織ACEmRNA表達(dá)

采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠心肌組織ACEmRNA的表達(dá)，按Trizol試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，逆轉(zhuǎn)錄體系總共20μL，其中總RNA樣品量4 μg；ACE特異性引物：正義鏈：5’-TTGACGTGAGCA ACTTCCAG-3’，反義鏈：5’-GGCTGC AGCTCCTGGTATAG-3’。PCR擴(kuò)增體系：10mmol/L d NTP 0.5 l，10xTaqDNA聚合酶buffer 2.5μL，MgCl22.0μL，c DNA模板1.0μL，正、反義引物各0.5μL，終體積25μL。94℃變性5 min，循環(huán)條件：94℃變性90 s，56℃退火45 s，72℃延伸45 s，最后72℃延伸10 min。循環(huán)次數(shù)40次。得到的擴(kuò)增產(chǎn)物421 bp。以大鼠EFlà作為內(nèi)參，正義鏈：5 GGA ATGGTGACA ACATGCTG3’，反義鏈：5’-CGTTGAAGCCTACATTGTCC-3’。反應(yīng)條件同上，擴(kuò)增產(chǎn)物347 bp。取10微升DNA反應(yīng)產(chǎn)物，加入1%瓊脂糖凝膠負(fù)極端的加樣孔，在100 V的電壓下電泳30 min，經(jīng)凝膠掃描儀處理，計(jì)算條帶吸光度（A）值，心肌ACE mRNA表達(dá)水平以其與EFlāA值的比值表示。

1.10 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS12.0社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，全部數(shù)據(jù)均以（ˉX±S）表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），選擇Homogeneity-of-variance顯示方差齊性，選擇Turkey比較各組間差異，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠心臟重量指數(shù)的比較

與對(duì)照組比較，疲勞組大鼠心臟重量指數(shù)顯著升高；與疲勞組大鼠比較，大蒜素干預(yù)組大鼠心臟重量指數(shù)顯著降低（表1）。

表1 大鼠心臟重量指數(shù)的比較

2.2 心肌膠原含量的比較

心肌膠原含量疲勞組大鼠較對(duì)照組大鼠顯著增加，大蒜素干預(yù)組大鼠較疲勞組大鼠顯著降低（表3）。

2.3 心肌膠原纖維形態(tài)學(xué)的比較

對(duì)照組大鼠心肌膠原纖維分布均勻，血管周?chē)猩倭磕z原纖維；與對(duì)照組相比，疲勞組大鼠心肌膠纖維顯著增多、增粗且呈束狀，有過(guò)度增生的現(xiàn)象，而且分布零亂，一些膠原纖維甚至插入到肌纖維中，血管周?chē)写罅康哪z原沉積；大蒜素干預(yù)組較疲勞組大鼠心室肌膠原纖維及血管周?chē)z原沉積顯著降低（圖1A～圖1F、表3）。

圖1 各組大鼠心肌膠原及心肌小動(dòng)脈周?chē)z原分布變化

2.4 血清PICP、PHINP的比較

血清PHINP在疲勞組大鼠較對(duì)照組大鼠顯著降低，PICP顯著升高；血清PICP干預(yù)組大鼠較疲勞組大鼠顯著降低，血清PHINP干預(yù)組較疲勞組大鼠顯著升高（表2）。

表2 大鼠血清PICP、PHINP含量、Ⅰ、Ⅲ、AT1R蛋白的表達(dá)

2.5 心肌組織AngⅡ含量的比較

與對(duì)照組相比，疲勞組大鼠心肌組織AngⅡ含量顯著升高（P＜0.05）；與疲勞組比較，干預(yù)組大鼠心肌組織AngⅡ含量顯著降低（P＜0.01）（表3）。

2.6 心肌組織Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原白蛋、AT1R蛋白表達(dá)水平的比較

與對(duì)照組相比，疲勞組大鼠心肌組織Ⅲ型膠原蛋白、AT1R蛋白表達(dá)水平明顯增高，Ⅰ型膠原白蛋表達(dá)水平顯著降低；與疲勞組大鼠相比，干預(yù)組大鼠心肌組織Ⅲ型膠原蛋白、AT1R蛋白表達(dá)水平明顯降低，Ⅰ型膠原白蛋表達(dá)顯著升高。（圖2A～圖2I）。

圖2 各組大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白及AT1R蛋白表達(dá)水平變化

2.7 心肌ACEmRNA表達(dá)水平的比較

疲勞組大鼠心肌組織ACE mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組大鼠顯著升高，大蒜素干預(yù)組大鼠心肌組織ACEmRNA表達(dá)水平較疲勞組大鼠顯著降低（圖3、表3）。

表3 大鼠心肌HYP、CC、CVF、PVCA、AngⅡ、ACEm RNA的表達(dá)

圖3 各組大鼠心肌ACE m RNA表達(dá)

3 討論

心肌主要由心肌細(xì)胞和心肌間質(zhì)構(gòu)成，而心肌間質(zhì)主要由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的心肌膠原纖維構(gòu)成［4］。研究表明，心肌膠原纖維對(duì)維持心臟結(jié)構(gòu)和功能的完整性起著重要的作用［5］；在心肌細(xì)胞與非心肌細(xì)胞之間，心肌膠原纖維不單起著支持和連接心肌細(xì)胞與非心肌細(xì)胞的作用，并且在心肌細(xì)胞與非心肌細(xì)胞之間起著信息的傳導(dǎo)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸、心肌力的協(xié)調(diào)傳遞等方面的作用。研究表明，各種因素都可能引起心肌膠原含量、生化分型和形態(tài)的變化，從而引起心肌膠原纖維的改變，而一旦心肌膠原纖維出現(xiàn)了異常的改變，就會(huì)對(duì)心臟的正常功能造成不利的影響，同時(shí)還會(huì)使正常的心臟電生理發(fā)生異常，甚至可能導(dǎo)致心衰［6］。

心臟膠原網(wǎng)的主要成分主要是由Ⅰ型和Ⅲ型膠原構(gòu)成，它們分別主要聚合成粗纖維和細(xì)纖維，粗纖維具有伸展性和彈性較小、僵硬度較大的特點(diǎn)；而細(xì)纖維則與粗纖維的特性相反，與心室壁的彈性關(guān)系密切［7］。Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維是構(gòu)成正常及病理心肌間質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的主要成分。病理性心肌發(fā)生形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑時(shí)，心肌的實(shí)質(zhì)成分與間質(zhì)成分不成比例增生，心肌間質(zhì)成分增多，從而引起心功的障礙，即由代償轉(zhuǎn)向失代償，進(jìn)而引起心力衰竭。Ⅲ型前膠原氨基端肽（PHINP）是Ⅲ型前膠原分泌入間質(zhì)后被內(nèi)肽酶消化后釋放的氨基末端肽，I型前膠原羧基端肽（PICP）是I型前膠原被內(nèi)肽酶消化后釋放的羧基末端肽，測(cè)定血漿中PHINP和PICP含量被用來(lái)評(píng)價(jià)組織纖維化的程度。

近年來(lái)，隨著運(yùn)動(dòng)心臟研究的發(fā)展，對(duì)不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)負(fù)荷下心肌膠原纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑及其心功能影響的研究不斷深入。研究表明，運(yùn)動(dòng)超負(fù)荷時(shí)，心肌細(xì)胞及心肌群間膠原纖維大量增生，且相互交織成網(wǎng)，心肌細(xì)胞被包裹其中；心肌細(xì)胞群之間，膠原纖維過(guò)度增生；心肌內(nèi)小動(dòng)脈管壁周?chē)罅吭錾哪z原纖維呈波浪形分布并與肌組織連接［8］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，疲勞組大鼠心肌膠原纖維明顯增多、增粗且呈束狀，有過(guò)度增生的現(xiàn)象，而且分布零亂，甚至一些膠原纖維插入到肌纖維中，CVF、PVCA、Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平、PICP、HYP和CC的含量顯著增加，Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平以及PHINP顯著降低，存在心肌纖維化現(xiàn)象，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果一致。

大蒜素是從蔥科蔥屬植物大蒜的鱗莖中提取出的一種有機(jī)化合物，其主要有效成分為三硫二丙烯。研究發(fā)現(xiàn)，大蒜素具有改善微循環(huán)、消炎、抗氧化、降血脂、降血壓、抗腫瘤等多種生物學(xué)功效［14］。Zhang等研究報(bào)道，大蒜素可有效降低肝纖維化大鼠模型肝臟組織膠原含量，改善肝纖維化［3］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大蒜素干預(yù)組大鼠心肌膠原纖維分布均勻，小動(dòng)脈周?chē)猩倭磕z原纖維，CVF、PVCA、HYP，Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平、PICP較疲勞組大鼠顯著降低，Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平以及PHINP顯著升高，膠原纖維的過(guò)度增生和纖維化現(xiàn)象明顯減輕，證明了大蒜素在預(yù)防心肌膠原纖維形態(tài)學(xué)的異常改變方面起到了促進(jìn)作用，可以使心肌纖維化早期得到逆轉(zhuǎn)。

腎素—血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensinsystem，RAS）是機(jī)體內(nèi)重要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)。在心臟局部，RAS是以心肌細(xì)胞局部自分泌、旁分泌和胞內(nèi)分泌為形式的獨(dú)立系統(tǒng)。以腎素（Renin）、血管緊張素原（Angiotensin）、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、AngⅡ及其受體為物質(zhì)基礎(chǔ)，在心肌組織細(xì)胞的增生、心肌成纖維細(xì)胞的增殖和心臟的功能調(diào)控方面起著極其重要的作用［9］。在RAS系統(tǒng)中，AngⅡ通過(guò)與其相應(yīng)的受體AT1R結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，從而在RAS系統(tǒng)充當(dāng)最重要的活性介質(zhì)，促進(jìn)心肌細(xì)胞的增生和心肌成纖維細(xì)胞的增殖，進(jìn)而影響到膠原纖維的重塑［10］。研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是運(yùn)動(dòng)超負(fù)荷，還是壓力超負(fù)荷，心肌局部血管緊張素II使心肌間質(zhì)膠原含量增加，且兩者呈正相關(guān)；血管緊張素II能促進(jìn)膠原合成增加，抑制膠原酶的活力，使膠原沉積的凈效應(yīng)增加，加速心肌的纖維化；另?yè)?jù)研究發(fā)現(xiàn)，自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織內(nèi)ACE mRNA活性顯著增高，而且與心肌膠原纖維濃度、Ⅰ/Ⅲ膠原纖維蛋白表達(dá)變化一致［11］。Huang等［12］研究發(fā)現(xiàn)，利用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制劑抑制LAP后，可使心室肌CC、CVF、PVCA、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平顯著降低，甚至恢復(fù)至對(duì)照組水平，提示ACE的增高在心肌間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。Paradis等［13－14］研究利用AT1R過(guò)度表達(dá)的轉(zhuǎn)基因大鼠研究發(fā)現(xiàn)，AT1R過(guò)度表達(dá)可使大鼠發(fā)生心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑，提示AT1R在AngⅡ誘導(dǎo)心肌膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)重塑構(gòu)成中起著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)疲勞組大鼠心肌組織ACEmRNA、AT1R蛋白的表達(dá)水平、AngⅡ的含量均顯著增高，提示疲勞組大鼠心肌組織中ACE mRNA、AT1R蛋白的表達(dá)水平異常增高和AngⅡ的含量的異常高表達(dá)可能是長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)疲勞大鼠心肌膠原過(guò)度沉積的原因之一。但同時(shí)本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大蒜素干預(yù)組大鼠的ACE mRNA、AT1R蛋白表達(dá)水平以及AngⅡ的含量明顯低于疲勞組，提示大蒜素干預(yù)能使長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌纖維化早期良性逆轉(zhuǎn)，這種逆轉(zhuǎn)作用在一定程度上可能是通過(guò)下調(diào)心肌組織中ACE mRNA、AT1R蛋白表達(dá)水平來(lái)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

4 小結(jié)

大蒜素干預(yù)能使長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠心肌纖維化早期良性逆轉(zhuǎn)，可能與ACE mRNA、AT1R表達(dá)水平的改變有關(guān)，建議廣大教練員應(yīng)該在進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練時(shí)注意運(yùn)動(dòng)負(fù)荷，提前預(yù)防。

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Morphological Remodeling of Myocardial Collagen Fibers of Exercise Induced Fatigue Rats and Intervention Effect of Allicin

CHEN Ping1，2，GUO Shihao3，SUN Jian4
（1.College of Physical Education and Sports of Beijing Normal University，Beijing 100875，China；2.College of Sports Education of Lüliang University，Lüliang 033000，Shanxi，China；3.Graduate School，Capital Institute of Physical Education，Beijing 100191，China；4.College of Physical Education of Xinjiang Normal University，Wulumuqi830000，Xinjiang，China）

Objective：It is aimed to study themorphological remodeling of myocardial collagen fibers in long－term exercise－induced fatigue rats and the effects of allicin on the intervention.Methods：Using Gastric acid hydrolysismethod，Picric acid－Sirius red staining method，RT－PCR，radioimmunoassay，double antibody sandw ich method，immunohistochemicalmethodmeasured the content of hydroxyproline（HYP）in heart of rat，and calculate the collagen concentration（CC），myocardial collagen volume fraction（CVF），arterial volume of collagen（PVCA），expression of angiotensinconverting enzyme（ACE）mRNA inmyocardium，myocardial local angiotensinⅡ（AngⅡ）content，serum type Iprocollagen carboxyl term inal peptide（PICP），typeⅢprocollagen am ino terminal peptide（PIHNP），myocardial AT1 receptor（AT1R）and typeⅠand typeⅢcollagen expression levels.Result：The levels of HYP，CC，CVF，PVCA，AngⅡ，PICP，ACEmRNA，AT1R and the expression of typeⅠcollagen was significantly increased，PIHNP and typeⅢcollagen expression was significantly reduced of fatigue rats；Compared w ith the fatigue group rats，the rats in the intervention group HYP，CC，CVF，PVCA，AngⅡ，PICP，ACEmRNA，AT1R and the expression of typeⅠcollagen was significantly decreased，PIHNP and typeⅢcollagen expression was significantly increased.Conclusion：Allicin intervention canmake a positive reversal of early myocardial fibrosis to long－term exercise－induced fatigue rats，may be related to the changes of expression levelsof ACEmRNA and AT1R.

A llicin；exercise－induced fatigue；rat；myocardial collagen fiber

G804.53

A

1004－0560（2017）05－0076－06

2017-05-23

2017-07-17

教育部人文社會(huì)科學(xué)研究青年基金項(xiàng)目（編號(hào)：13YJC890032）。

陳平（1983—），男，講師，博士研究生，主要研究方向?yàn)轶w育保健與慢性病的運(yùn)動(dòng)康復(fù)。

孫劍（1978—），男，副教授，碩士，主要研究方向?yàn)轶w育保健與運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)，E－mail：315339318＠qq.com。

責(zé)任編輯：郭長(zhǎng)壽