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    不同劑量60Coγ輻照對藍莓果實抗氧化性及相關(guān)酶活性的影響

    2017-11-09 16:21:21佟俊生李曉平陶燁姚遠王琛
    農(nóng)業(yè)科技與裝備 2017年6期

    佟俊生 李曉平 陶燁 姚遠 王琛

    摘要:采用不同劑量60Co γ射線輻照處理藍莓果實,定期檢測藍莓果實抗氧化性及相關(guān)酶活性變化。結(jié)果表明:輻照處理雖然能夠使藍莓果實產(chǎn)生較多超氧陰離子(O2-·)和過氧化氫(H2O2),但同時能夠提高藍莓果實中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)的活性,清除多余的自由基,使活性氧自由基維持在一個較低水平,對提高冷藏期間藍莓果實抗氧化性具有積極促進作用。以2.5 kGy輻照處理的保鮮效果最好。

    關(guān)鍵詞:藍莓;輻照;抗氧化性;酶活性

    中圖分類號:S663.9 文獻標識碼:A 文章編號:1674-1161(2017)06-0026-04

    藍莓果實具有怡人的口感香氣、豐富的營養(yǎng)物質(zhì)及顯著的保健功能。近年來,我國藍莓生產(chǎn)規(guī)模不斷擴大,亟需研究技術(shù)先進、效果良好的藍莓保鮮方法。食品輻照技術(shù)是指將γ射線的部分能量傳遞給所輻射物質(zhì)的分子或原子,接受能量傳遞的原子轉(zhuǎn)化成離子,離子再轉(zhuǎn)化成一對陰陽離子;經(jīng)過電離輻射作用的離子在食品中產(chǎn)生輻射效應(yīng),使食品的發(fā)芽率、成熟期得到明顯抑制,降低食品中蟲菌含量,保持食品原有的營養(yǎng)價值、商品價值和經(jīng)濟價值,延長食品的貨架期和農(nóng)產(chǎn)品的貯藏期。γ射線能量大、具有非常強的穿透力且半衰期適中,利用γ射線處理藍莓果實幾乎不產(chǎn)生熱效應(yīng),可以保持最佳風味。

    本研究以“藍豐”藍莓為對象,研究不同的輻照劑量對藍莓果實中超氧陰離子(O2-·)產(chǎn)生速率、過氧化氫(H2O2)含量,以及與抗氧化性相關(guān)酶(超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、過氧化物酶POD)活性的影響,探索輻照處理下藍莓保鮮效果和生理品質(zhì)變化規(guī)律,旨在通過適當?shù)妮椪仗幚?,達到增強藍莓抗氧化能力的目的,從而提高其耐貯性。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    藍莓果實:品種為“藍豐”,由沈陽時圣藍莓采摘基地提供。試驗用果實要求無機械損傷、無病蟲害、無腐爛變質(zhì),外觀色澤、果形大小及生理成熟度一致。

    采后包裝:采用105 mm×100 mm×45 mm,厚0.4 mm,配備12個透氣孔的PET保鮮盒。每盒裝藍莓果實約125 g,每12小盒裝瓦楞紙盒后再裝入備有冰塊的泡沫周轉(zhuǎn)箱內(nèi),于當日運送至遼寧鈷源輻照中心。

    試驗所用α-萘胺、鹽酸羥胺等試劑均為分析純,由當?shù)鼗瘜W試劑經(jīng)銷商供應(yīng)。

    1.2 儀器設(shè)備

    HZp-250型恒溫振蕩培養(yǎng)器:上海精宏試驗設(shè)備有限公司;CT14RD型高速冷凍離心機:上海天美生化儀器設(shè)備有限公司;BSA-224型賽多利斯電子天平:上海精科天平有限公司;HH-6型恒溫水浴鍋:常州國華儀器廠;TU-1810型紫外分光光度計:北京善析通用有限公司;吸管、試管、移液管及燒杯等玻璃器皿。

    1.3 輻照處理

    在室溫(20~25 ℃)條件下,采用20.3萬Ci的60Co γ射線源對采后藍莓果實在0~3.0 kGy劑量范圍內(nèi)每個處理的劑量梯度為0.5 kGy,0~42 Gy/min劑量率范圍內(nèi)每個處理的劑量率梯度為7 Gy/min,進行72 min輻照處理。每個處理重復3次。在輻照期間需要對藍莓果實進行翻轉(zhuǎn)處理;對輻照后的藍莓果實在10 °C進行12 h預冷處理后,每隔7 d隨機取樣1次,對每項指標進行3次重復測定,取平均值。

    1.4 測試指標

    1.4.1 超氧陰離子(O2-·)產(chǎn)生速率 超氧陰離子(O2-·)產(chǎn)生速率采用α-萘胺反應(yīng)法進行測定。

    1.4.2 過氧化氫(H2O2)含量 參考Bornsek等人的方法,略有改進。

    1.4.3 相關(guān)酶活性 每個處理取適量藍莓樣品,放入事先預冷的研缽中研磨,準確稱取1.0 g藍莓漿液,加入5 mL 0.1 mol/L磷酸鈉緩沖液(pH 7.8,含 5 mmol/L DTT,5% PVP),于4 ℃下以12 000 r/min冷凍離心15 min,提取上清液備用。SOD活性采用氮藍四唑(NBT)比色法測定;POD采用愈創(chuàng)木酚法測定;CAT活性參考曹建康等人的方法,略有改進。

    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    利用Origin 8.l軟件對試驗數(shù)據(jù)進行繪圖分析;利用SPSS 17.0軟件對測定結(jié)果進行方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中O2-·產(chǎn)生速率的影響

    超氧陰離子(O2-·)是呼吸代謝和膜質(zhì)代謝的中間產(chǎn)物。作為一種自由基,它的積累能夠衍生成過氧化氫(H2O2)、羥自由基(OH-)、單線態(tài)氧(1O2)等,從而引起一系列的氧化反應(yīng),生成多余的活性氧自由基(R·,RO·,ROO·,ROOH),加速果蔬的衰老進程。不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中O2-·產(chǎn)生速率的影響情況如圖1所示。

    由圖1可以看出:輻照處理后(貯藏0 d),各處理藍莓果實中O2-·產(chǎn)生速率均略有上升,但差異不明顯(P>0.05),且與輻照劑量呈正相關(guān)(y=0.194 3 x+3.267 1,R2=0.934 7)。隨著貯藏時間的延長,各處理藍莓果實O2-·產(chǎn)生速率總體呈上升趨勢,其中對照處理上升幅度最大,明顯高于其他輻照處理。貯藏第14 d時,0.5 kGy和3.0 kGy處理的O2-·產(chǎn)生速率快速上升,明顯超過其他輻照處理;1.0~2.0 kGy處理的上升幅度相對較?。?.5 kGy處理的表現(xiàn)最好,其O2-·產(chǎn)生速率始終保持最低。這說明適當劑量的輻照處理能夠減緩冷藏期間藍莓果實中O2-·的產(chǎn)生,從而有效減弱藍莓果實的呼吸作用和膜質(zhì)代謝作用。

    2.2 不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中H2O2含量的影響

    過氧化氫(H2O2)由O2-·衍生而來,具有較強的氧化性,參與膜質(zhì)過氧化作用。不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中H2O2含量的影響情況如圖2所示。endprint

    由圖2可以看出:輻照處理后(貯藏0 d),各處理藍莓果實中H2O2含量均略有上升,且與輻照劑量呈正相關(guān)(y=0.066 1 x+2.100 0,R2=0.976 5),但上升的幅度與劑量的提升相比并不明顯(P>0.05)。隨著貯藏時間的延長,各處理藍莓果實中H2O2的含量均呈上升趨勢,其中對照上升的幅度最大,0.5 kGy處理的上升幅度始終與對照相近,3.0 kGy處理的上升幅度前期較小但在貯藏中后期逐漸接近對照,而1.0~2.5 kGy處理的上升幅度始終相對較小。貯藏第35 d時,2.5 kGy處理的H2O2含量為4.92 μmol/g,與對照的6.14 μmol/g相比明顯較低。由此可知,適當劑量的輻照處理能夠減緩H2O2的生成,從而延緩藍莓果實衰老。這與輻照處理后藍莓果實中O2-·產(chǎn)生速率的變化趨勢相同,說明不同輻照劑量對兩種活性氧自由基的影響效果相同。

    2.3 不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中SOD活性的影響

    不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中SOD活性的影響情況如圖3所示。

    由圖3可以看出:輻照處理的藍莓果實SOD活性均明顯高于對照,但不同輻照處理間差異不顯著(P>0.05);各處理藍莓果實SOD活性均呈先上升后下降趨勢,對照水平最低、且在冷藏第7 d時出現(xiàn)峰值后極速下降,而各輻照處理的峰值推遲至冷藏第14 d,這可能是由于輻照處理引發(fā)產(chǎn)生過多的自由基所致;在貯藏后期,3.0 kGy處理的藍莓果實SOD活性下降至170.09 U/(min·g),僅高于0.5 kGy處理和對照,說明高劑量輻照使得冷藏期間藍莓果實SOD活性下降;在整個貯藏過程中,2.5 kGy處理的藍莓果實SOD活性始終處于最高水平,而1.0~2.0 kGy處理次之。因此,適當劑量的輻照可以促進藍莓果實SOD活性提高,延緩冷藏后期SOD活性下降速度,從而延長貯藏期限。

    2.4 不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中CAT活性的影響

    CAT能夠促進H2O2的分解,保護細胞免受H2O2毒害,其活性變化與植物貯藏性相關(guān)。不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中CAT活性的影響情況如圖4所示。

    由圖4可以看出:在整個貯藏過程中,各處理藍莓果實的CAT活性均呈先上升后下降趨勢,經(jīng)輻照處理的藍莓果實CAT活性均高于對照,且與輻照劑量呈正相關(guān)。其中,3.0 kGy處理的藍莓果實CAT活性最高,這可能是由于藍莓果實經(jīng)輻照處理后,其細胞內(nèi)產(chǎn)生大量H2O2,增強了自身防御能力;對照和0.5 kGy處理的藍莓果實CAT活性變化較接近,其他劑量輻照處理間變化不明顯,但始終高于對照。在貯藏后期,對照和0.5 kGy處理的藍莓果實CAT活性均顯著低于其他輻照處理(P<0.05),其中2.5 kGy處理的藍莓果實CAT活性最高,比對照高2倍多。

    2.5 不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實POD活性的影響

    POD是植物呼吸代謝過程的末端氧化酶,對于植物生命活動尤為重要。不同輻照劑量對冷藏期藍莓果實中POD活性的影響情況如圖5所示。

    由圖5可以看出:經(jīng)輻照處理的藍莓果實POD活性略高于對照,且與輻照劑量呈正相關(guān)。在整個貯藏過程中,對照的藍莓果實POD活性呈上升趨勢,而經(jīng)輻照處理的藍莓果實POD活性呈先下降后上升再平緩趨勢,這說明經(jīng)輻照處理的藍莓果實在冷藏初期由于低溫抑制了POD酶活性,而隨貯藏期延長,H2O2逐漸累積達一定量后,引發(fā)POD保護效應(yīng),之后再逐漸減弱。在貯藏第35 d時,0.5 kGy和3.0 kGy處理的藍莓果實POD活性與對照接近,但明顯低于其他劑量輻照處理(P<0.05),其中2.5 kGy處理為最高。因此,適當劑量的輻照處理對推遲藍莓果實衰老進程具有積極作用。

    3 結(jié)論

    試驗結(jié)果表明:1) 輻照處理雖然導致藍莓果實中O2-產(chǎn)生速率加快和H2O2含量上升,但這些負作用在冷藏后期得到了有效的緩解,其中以2.5 kGy輻照劑量表現(xiàn)最好。2) 輻照處理造成的生理傷害能夠引起一系列保護酶系的活動,產(chǎn)生修復損傷的作用。經(jīng)輻照后,藍莓果實中3種保護酶的活性均略有提高,且隨輻照劑量升高而升高。隨著貯藏時間的延長,SOD和CAT活性先上升后下降,使O2-和H2O2不斷產(chǎn)生的同時又被不斷清除,從而始終保持在一個較低的水平;而POD活性變化較為復雜,它一方面作為氧化酶參與輻照刺激引起的膜質(zhì)氧化作用,加速果實的衰老,另一方面作為一種保護酶,在貯藏期間作為催化劑不斷促進H2O2分解,減緩果實細胞衰老,但輻照藍莓果實中POD的保護效應(yīng)遠遠大于其傷害效應(yīng)。因此,適當劑量的輻照處理能夠與藍莓果實的保護酶系相輔相成、共同作用,起到較好的抗氧化作用,有效延緩藍莓果實的衰老,是一種高效、安全、環(huán)保的保鮮技術(shù)。

    參考文獻

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