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    不同處理方法對玉米胚芽穩(wěn)定性的影響

    2017-11-09 16:18:47劉璐柴媛曹慧英
    農(nóng)業(yè)科技與裝備 2017年6期
    關(guān)鍵詞:工藝

    劉璐 柴媛 曹慧英

    摘要:為了提高玉米胚芽的穩(wěn)定性,分別采用短時(shí)微波、紫外照射和擠壓法3種工藝對新鮮玉米胚芽進(jìn)行穩(wěn)定化處理。以玉米胚芽的脂肪酶(LA)和脂肪氧化酶(LOX)為指標(biāo)進(jìn)行穩(wěn)定化處理方式擇優(yōu),結(jié)果表明,擠壓法在玉米胚芽滅酶效果方面優(yōu)勢明顯。

    關(guān)鍵詞:玉米胚芽;穩(wěn)定化處理;酶活;工藝

    中圖分類號:TS201.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1674-1161(2017)06-0022-05

    玉米胚芽是玉米生長發(fā)育的核心和起點(diǎn),其位于玉米籽粒下方,體積較大,約占整個(gè)玉米顆粒體積的1/4。玉米胚芽是玉米加工業(yè)的重要副產(chǎn)物。在淀粉生產(chǎn)過程中,完整的玉米籽粒被破碎,使得玉米胚芽中的LA,LOX等酶與空氣及玉米胚芽含油層充分接觸,活性迅速提高。胚芽自身也極易吸濕,在貯藏過程中易受蟲害及微生物污染,不易保存。通常胚芽分離數(shù)小時(shí)后就會產(chǎn)生不良?xì)馕?,因此,開發(fā)有效的穩(wěn)定化方法是解決玉米胚芽廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    新鮮玉米胚芽:在濕法生產(chǎn)淀粉過程中分離得到(玉米品種為糯玉米),由開原益海嘉里有限公司提供。

    主要試劑:無水乙醇,磷酸二氫鈉,磷酸氫二鈉,阿拉伯樹膠,橄欖油,氫氧化鈉,吐溫20。

    1.2 儀器設(shè)備

    UV9000型紫外可見分光光度計(jì):上海元都有限公司;MZC-1070M型微波爐:青島海爾科技有限公司;LD4-2型離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠;HN-150Y型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī):寧波新芝生物科技股份有限公司;雙螺桿擠壓機(jī):濟(jì)南賽信膨化機(jī)械有限公司,其螺桿直徑為65 mm,螺桿長度為1 008 mm,兩螺桿中心距為56 mm,螺桿長徑比為18∶1,機(jī)筒溫度在0~300 ℃之間連續(xù)可調(diào)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 玉米胚芽穩(wěn)定化試驗(yàn) 1) 短時(shí)微波穩(wěn)定化。將120 g新鮮全脂玉米胚芽置于微波爐專用盤上,厚度為1 cm,以不同微波功率和時(shí)間對玉米胚芽進(jìn)行穩(wěn)定化處理。微波爐微波功率分別設(shè)置為100,300,500,700,900 W。微波處理時(shí)間分別設(shè)置為1,2,3,4,5 min。另加一組功率、處理時(shí)間分別為475 W,3 min。投料量分別設(shè)置為90,120,150,180,210 g。測定微波處理后玉米胚芽中脂肪酶和脂肪氧化酶殘余活性。重復(fù)3次。2) 紫外照射穩(wěn)定化。將120 g新鮮全脂玉米胚芽置于紗布上,厚度為1 cm,以不同紫外照射時(shí)間對玉米胚芽進(jìn)行穩(wěn)定化處理。將玉米胚芽放入紫外殺菌燈下,照射時(shí)間分別設(shè)置為3,6,9,12,15 min。測定紫外照射處理后玉米胚芽中脂肪酶和脂肪氧化酶殘余活性。重復(fù)3次。3) 擠壓法穩(wěn)定化。機(jī)筒溫度分別設(shè)置為60,75,90,105,120,

    135 ℃,螺桿轉(zhuǎn)速為25 Hz,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。螺桿轉(zhuǎn)速分別設(shè)置為15,20,25,30,35 Hz,機(jī)筒溫度為90 ℃,進(jìn)行單因素試驗(yàn)。測定處理后玉米胚芽中脂肪酶和脂肪氧化酶殘余活性。重復(fù)3次。

    1.3.2 玉米胚芽脂肪酶(LA)活動(dòng)度的測定 1) 制備樣液。準(zhǔn)確稱取5 g玉米胚芽樣品于研缽中,加入pH 6.9的磷酸緩沖液20 mL,在冰浴中研磨10 min,利用超聲波細(xì)胞破碎儀進(jìn)行細(xì)胞破碎10 min,時(shí)間間隔5 s,全程處于冰浴,將破碎后的玉米胚芽在4 ℃下以

    10 000 r/min離心處理10 min,離心后過濾取上層清液,儲存于4 ℃,備用。2) 測定脂肪酶殘余酶活。A液:7%的阿拉伯樹膠溶液75 mL和橄欖油25 mL,磁力攪拌20 min;B液:A液5 mL,0.10 M pH 7.0的磷酸緩沖液2 mL,樣液1 mL,混合均勻;C液:1∶1丙酮—無水乙醇混合溶液;D液:0.05 M氫氧化鈉溶液。將B液放入37 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中30 min,轉(zhuǎn)速設(shè)置為200 r/min,振蕩結(jié)束后向溶液中加入C液15 mL和酚酞試劑7滴,用D液進(jìn)行滴定,記錄消耗氫氧化鈉溶液的體積,按公式計(jì)算脂肪酶(LA)活性。

    LA活性(%)=[(V(NaOH)1-V(NaOH)2)×0.05×

    28.2]÷4.6×100 (1)

    LA殘余酶活(%)=(LA活性1÷LA活性2)

    ×100 (2)

    式中:V(NaOH)1為樣品消耗氫氧化鈉體積,mL;

    V(NaOH)2為空白消耗氫氧化鈉體積,mL;0.05為配制NaOH溶液0.05 mol/L;LA活性1為樣品鈍化后酶活性,mL/min;LA活性2為樣品鈍化前酶活性,

    mL/min。

    1.3.3 玉米胚芽脂肪氧化酶(LOX)活動(dòng)度的測定 1) 制備樣液。參照1.3.2中樣液制備方法。2) 制備儲備液。在N2保護(hù)下,取111 μL亞油酸與111 μL吐溫20,加入10 mL容量瓶中,滴加0.1 M NaOH調(diào)節(jié)溶液樣品至澄清,用去離子水定容到10 mL,得到濃度為1%(W/V)的亞油酸溶液,裝入密封管中,于-20 ℃儲存,備用。3) 配制底物溶液。將儲備液用pH 9.0硼酸緩沖液進(jìn)行20倍稀釋,作為底物,進(jìn)行脂肪氧化酶殘余酶活的測定。4) 測定脂肪氧化酶殘余酶活。取2.7 mL底物、0.3 mL樣液于比色皿中,充分混勻,在0.5 min內(nèi)迅速將比色皿放入分光光度計(jì)中,在波長為234 nm下測定其吸光度并記錄數(shù)據(jù),按公式計(jì)算脂肪氧化酶(LOX)活性。

    LOX殘余酶活(%)=A1/A2×100 (3)

    式中:A1為鈍化后樣品吸光值;A2為鈍化前樣品吸光值。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)所有測定數(shù)據(jù)均測定3次,利用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 短時(shí)微波處理對玉米胚芽脂肪酶和脂肪氧化酶活性的影響endprint

    2.1.1 微波時(shí)間的影響 微波具有加熱均勻迅速、熱轉(zhuǎn)換效率高、熱慣性小、節(jié)能、易于控制等特點(diǎn),且具有滅酶、殺菌和殺蟲等作用,可以使玉米胚芽溫度快速上升,使酶產(chǎn)生熱變形而失活。在微波功率475 W、樣品量150 g條件下,不同微波處理時(shí)間下LA和LOX殘余酶活情況如圖1所示。

    由圖1可以看出:隨著微波處理時(shí)間延長,玉米胚芽中的LA和LOX殘余量都逐漸下降,對LOX影響較大。當(dāng)微波處理時(shí)間為1 min時(shí),LA和LOX殘余酶活分別為91.32%,78.75%;當(dāng)微波處理時(shí)間為4 min時(shí),LA殘余酶活下降不明顯,而LOX殘余酶活顯著下降至18.75%;即使微波處理時(shí)間達(dá)到最長時(shí)間5 min,LOX殘余酶活仍高于10%;繼續(xù)增加微波時(shí)間,會使玉米胚芽產(chǎn)生焦糊狀態(tài),破壞玉米胚芽中其他營養(yǎng)成分。因此,微波穩(wěn)定化效果并不理想。

    2.1.2 樣品量的影響 在微波功率475 W、微波處理時(shí)間3 min條件下,不同樣品量下LA和LOX殘余酶活情況如圖2所示。

    由圖2可以看出:隨著樣品量的增加,玉米胚芽中LA和LOX殘余酶活都呈上升趨勢。這是由于樣品量的增加導(dǎo)致料層厚度增加,料層厚度大則微波能量不能全部作用到玉米胚芽中,從而導(dǎo)致滅酶效果變差。當(dāng)樣品量為90 g時(shí),LA和LOX殘余酶活分別為79.79%,69.27%;當(dāng)樣品量為120 g時(shí),LA殘余酶活上升最高,LOX殘余酶活也有較明顯的上升,說明在樣品量為120 g時(shí)微波處理后的玉米胚芽容易酸??;當(dāng)樣品量為150 g時(shí),LOX殘余酶活有所下降,此時(shí)LA和LOX殘余酶活分別為85.95%,76.25%,與最初樣品量為90 g時(shí)LA和LOX殘余酶活相差不多;當(dāng)樣品量大于150 g時(shí),LA殘余酶活上升緩慢;當(dāng)樣品量為210 g時(shí),LA和LOX的殘余酶活都達(dá)到了最高值,分別為87.01%,83.69%??紤]到一次能夠處理樣品多少的問題,將樣品量設(shè)為150 g。

    2.1.3 微波功率的影響 在微波處理時(shí)間3 min、樣品量150 g條件下,不同微波功率下LA和LOX殘余酶活情況如圖3所示。

    由圖3可以看出:隨著微波功率的增大,玉米胚芽中LA和LOX的殘余酶活逐漸降低;但即使達(dá)到最大功率,LA和LOX的鈍化效果仍較差。當(dāng)微波處理功率為100 W時(shí),LOX殘余酶活為69.36%;當(dāng)微波處理功率增加到900 W時(shí),LOX殘余酶活降低為22.6%,仍處于較高水平。LA殘余酶活較LOX殘余酶活鈍化效果更差,即使在功率最大(900 W)情況下,LA殘余酶活仍為69.28%,說明微波處理對LA鈍化效果不明顯。

    2.2 紫外照射處理對玉米胚芽脂肪酶和脂肪氧化酶活性的影響

    在樣品量120 g條件下,不同紫外照射時(shí)間下LA和LOX殘余酶活情況如圖4所示。

    由圖4可以看出:經(jīng)紫外照射處理后,LOX殘余酶活明顯低于LA殘余酶活。LOX對紫外線非常敏感,當(dāng)紫外照射時(shí)間為3 min時(shí),LOX殘余酶活就已低于10.00%;當(dāng)照射時(shí)間為9 min時(shí),LOX被全部滅活。而紫外照射下LA殘余酶活則下降緩慢,當(dāng)照射時(shí)間在12 min之內(nèi),LA殘余酶活由84.73%下降至71.97%,僅下降了12.76%;繼續(xù)增加照射時(shí)間,LA殘余酶活開始回升;當(dāng)照射時(shí)間為15 min時(shí),LA殘余量回升至76.97%。因此,確定紫外照射時(shí)間為12 min。

    2.3 擠壓處理對玉米胚芽脂肪酶和脂肪氧化酶活性的影響

    2.3.1 擠壓溫度的影響 在螺桿轉(zhuǎn)速25 Hz條件下,不同擠壓溫度下LA和LOX殘余酶活情況如圖5所示。

    由圖5可以看出:LA和LOX殘余酶活隨套筒溫度升高呈現(xiàn)逐漸降低趨勢,但LA滅活效果沒有LOX滅活效果顯著,表明LA較LOX更能承受高溫的作用。當(dāng)擠壓溫度為60 ℃時(shí),LA殘余酶活為80.97%,滅活效果并不是十分理想;當(dāng)擠壓溫度達(dá)到105 ℃時(shí),LA殘余酶活顯著降低為27.30%;當(dāng)擠壓溫度達(dá)到120 ℃時(shí),LA殘余酶活為19.34%,與擠壓溫度為135 ℃時(shí)殘余酶活16.92%相接近。擠壓溫度的升高對LOX滅活效果較好,當(dāng)擠壓溫度為60 ℃時(shí),LOX殘余酶活性為37.08%,表明LOX被部分滅活;當(dāng)擠壓溫度升高至105 ℃時(shí),LOX殘余酶活降低至3.72%,達(dá)到了較好的滅酶效果;當(dāng)擠壓溫度升高至120 ℃時(shí),LOX被全部滅活。

    2.3.2 螺桿轉(zhuǎn)速的影響 在擠壓溫度120 ℃條件下,不同螺桿轉(zhuǎn)速下LA和LOX殘余酶活情況如圖6所示。

    由圖6可以看出:當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速低于20 Hz時(shí),LA殘余酶活隨著螺桿轉(zhuǎn)速增加而降低;當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速大20 Hz時(shí),隨著螺桿轉(zhuǎn)速增加,殘余酶活明顯增大;當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速為20 Hz時(shí),LA殘余酶活達(dá)到最小值27.40%。LOX殘余酶活隨著螺桿轉(zhuǎn)速增加而降低,其變化范圍為5.26%~20.79%。當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速為15~20 Hz時(shí),隨著螺桿轉(zhuǎn)速增加,LOX殘余酶活呈逐漸降低趨勢;當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速為25~30 Hz時(shí),殘余酶活達(dá)到最小值5.26%;當(dāng)螺桿轉(zhuǎn)速超過30 Hz繼續(xù)增加時(shí),殘余活性隨之升高。這是由于螺桿轉(zhuǎn)速的變化對胚芽所受到的剪切力以及物料停滯時(shí)間具有雙重影響。擠壓機(jī)螺桿轉(zhuǎn)速越大,物料所受剪切力越大,同時(shí)物料在機(jī)筒內(nèi)的停滯時(shí)間越短;反之,螺桿轉(zhuǎn)速越小,物料所受到的剪切力越小,但物料在機(jī)筒內(nèi)停留時(shí)間延長。隨著停滯時(shí)間的延長,LOX殘余酶活受到擠壓溫度的影響。從總體上來看,停滯時(shí)間對殘余酶活影響更大,因此,螺桿轉(zhuǎn)速較低時(shí),物料所受剪切力較小,但在擠壓腔中逗留的時(shí)間增長,對酶的鈍化效果更好。

    3 結(jié)論與討論

    本研究分別以短時(shí)微波、紫外照射和擠壓3種方法對玉米胚芽進(jìn)行穩(wěn)定化處理,以玉米胚芽LA和LOX的殘余酶活為指標(biāo)進(jìn)行處理方式的擇優(yōu),得到3種處理方式的最優(yōu)工藝。在微波處理時(shí)間5 min、樣品處理量150 g、微波功率475 W的條件下,LOX殘余酶活性降至11.36%,LA殘余酶活性降至75.82%。在紫外照射12 min的條件下,LOX被全部滅活,LA殘余酶活降至72.36%。在螺桿轉(zhuǎn)速25 Hz、擠壓溫度120 ℃條件下,LOX被全部滅活;在螺桿轉(zhuǎn)速25 Hz、擠壓溫135 ℃條件下,LA殘余酶活為16.92%。

    微波能用于滅酶主要是基于微波的熱效應(yīng)。微波可使玉米胚芽中的極性分子(水、蛋白質(zhì)的極性基團(tuán)等)產(chǎn)生高速的取向運(yùn)動(dòng)而使分子間劇烈摩擦,其產(chǎn)生的內(nèi)能導(dǎo)致酶蛋白質(zhì)變性而失活。另外,水分流失也抑制了脂肪水解的發(fā)生。雖然長時(shí)間的高溫處理可以使酶在一定程度上失活,但高溫烘焙對玉米胚芽穩(wěn)定化的作用主要是降低水分含量。擠壓對脂肪酶的鈍化機(jī)理不僅是機(jī)筒的高溫使酶失活,在擠壓過程中設(shè)備的機(jī)械能轉(zhuǎn)化為玉米胚芽的內(nèi)能,玉米胚芽在擠壓腔內(nèi)受到的高壓、高剪切、膨爆等作用使其重新組織化,從而達(dá)到鈍酶的目的。3種穩(wěn)定化玉米胚芽中,擠壓膨化的玉米胚芽脂肪酶殘余量最低,這是由于擠壓法是高溫、高壓、剪切和摩擦的組合加工過程,物料經(jīng)擠壓膨化后發(fā)生淀粉糊化、蛋白質(zhì)變性、分子結(jié)合鍵裂解等,有效地抑制、鈍化脂肪酶和脂肪氧化酶的活性,達(dá)到更好的滅酶效果。

    參考文獻(xiàn)

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