護(hù)脈散不同給藥方式對(duì)長(zhǎng)春瑞濱致靜脈炎小鼠療效觀察

邱 敏 李曉清 鄒文娟 孫 科

(重慶市中醫(yī)院，重慶，400021)

護(hù)脈散不同給藥方式對(duì)長(zhǎng)春瑞濱致靜脈炎小鼠療效觀察

邱 敏 李曉清 鄒文娟 孫 科

(重慶市中醫(yī)院，重慶，400021)

目的：觀察預(yù)防性和治療性應(yīng)用護(hù)脈散對(duì)長(zhǎng)春瑞濱致化療性靜脈炎小鼠的療效，評(píng)價(jià)其有效性。方法：長(zhǎng)春瑞濱尾靜脈注射致小鼠靜脈炎模型。分別采用預(yù)防和治療給藥2種方式，觀察護(hù)脈散對(duì)給藥小鼠鼠尾腫脹度、病理組織評(píng)分，并以多磺酸粘多糖乳膏為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果：與模型組和對(duì)照組比較，護(hù)脈散能明顯減輕長(zhǎng)春瑞濱致靜脈炎小鼠鼠尾腫脹度(P<0.05)，改善靜脈炎鼠尾病理組織評(píng)分(P<0.01)。結(jié)論：護(hù)脈散能有效預(yù)防和治療長(zhǎng)春瑞濱致化療性靜脈炎，療效優(yōu)于多磺酸粘多糖乳膏。

靜脈炎；長(zhǎng)春瑞濱；護(hù)脈散；病理組織評(píng)分

化療性靜脈炎是指惡性腫瘤患者接受外周靜脈輸注細(xì)胞毒藥物化療時(shí)導(dǎo)致的淺靜脈血管性炎性反應(yīng)，尤以輸注長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine，VIN)最為突出[1]。護(hù)脈散是重慶市名中醫(yī)曾定倫主任中醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)方，重慶市中醫(yī)院腫瘤科從2010年起將其應(yīng)用靜脈炎的防治，累計(jì)使用超過1 000例，取得了較好臨床療效，既往我們臨床觀察顯示該藥物預(yù)防和治療化療性靜脈炎，療效優(yōu)于臨床常用藥物[2-3]。作為血管無菌性炎性反應(yīng)，化療性靜脈炎發(fā)生涉及血管內(nèi)皮的損傷，血管壁及周圍組織的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，周圍組織的水腫甚至炎性反應(yīng)血管血栓形成等病理改變[4-6]，而我們既往研究以臨床觀察為主，缺乏護(hù)脈散對(duì)靜脈炎組織病理影響的觀察。本研究擬通過病理組織觀察探討預(yù)防性使用和治療性應(yīng)用護(hù)脈散防治VIN致小鼠靜脈炎的臨床療效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物與分組 健康成年昆明種小鼠，80只，雌雄各半，6～8周齡，清潔級(jí)，體重(25±6)g(重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供)。按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白組、模型組各20只，預(yù)防組、預(yù)防對(duì)照組、觀察組和治療對(duì)照組，每組10只。

1.1.2 藥物與儀器 重酒石酸VIN注射液(江蘇連云港豪森藥業(yè)股份有限公司,10 mg/mL，批號(hào)：20150211),多磺酸粘多糖乳膏(德國(guó)路易坡大藥廠，14 g/支，進(jìn)口藥品注冊(cè)號(hào)：H20110296)，0.9%氯化鈉注射液(西南藥業(yè)股份有限公司,10 mL/支，批號(hào):20150621),護(hù)脈散(芒硝60 g、生大黃30 g、黃連15 g、黃芩15 g、白芷10 g。上五味藥物一起粉碎，過100目篩，按4∶6質(zhì)量比分別稱取藥粉和藥用凡士林，凡士林水浴加熱融化后，加入藥粉，不斷攪拌混勻致冷卻),美國(guó)BSA公司生產(chǎn)的微量恒速注射泵。

表1 Kuwahar病理評(píng)分表

1.2 方法

1.2.1 模型制備 參照馬麗娟[7]方法制備VIN致靜脈炎模型，于小鼠尾靜脈近、中1/3處向近心端穿刺成功后，空白組按5 mL/kg(體重)予0.9%氯化鈉注射液注射，其余5組均予10 mg/mL VIN注射液靜脈注射，給藥量為56.25 mg/kg(體重)，給藥速度0.25 μL/s。

1.2.2 給藥方法 1)注射給藥的同時(shí)預(yù)防組小鼠于穿刺點(diǎn)近心端上方予護(hù)脈散均勻涂擦(涂滿鼠尾全周)；預(yù)防對(duì)照組小鼠采用同樣方法予多磺酸粘多糖乳膏涂擦，每次1 h，間隔4 h后再次涂擦藥物1次。2)注射給藥24 h后觀察組小鼠據(jù)上述方法給予護(hù)脈散涂擦，每次間隔6 h，共計(jì)給藥3次，治療對(duì)照組采用同樣方法予多磺酸粘多糖乳膏涂擦，模型組小鼠不作任何處理。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 1)鼠尾腫脹度 給藥前、給藥6 h、給藥24 h，給藥48 h后，均于穿刺點(diǎn)近心端上方3 cm處用用電子數(shù)顯卡尺測(cè)量鼠尾直徑，計(jì)算腫脹程度。腫脹度=[(注射后鼠尾直徑-注射前鼠尾直徑)/注射前鼠尾直徑]×100%。2)病理學(xué)觀察 a靜脈給藥6 h后，脫頸處死預(yù)防組、預(yù)防對(duì)照組小鼠及空白組、模型組各10只小鼠；b靜脈給藥后48 h后，處死觀察組、治療對(duì)照組小鼠及空白組、模型組剩下的10只小鼠。取各組小鼠尾部從靜脈穿刺點(diǎn)至以上5 cm尾部組織，迅速置于10%福爾馬林溶液中固定4 h以上，以20%EDTA進(jìn)行脫鈣處理后1周，再制作成石蠟切片、H-E染色并進(jìn)一步分析。病理切片鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞脫落、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織水腫及血栓形成情況。參照Kuwahar病理評(píng)分方法[8]進(jìn)行等級(jí)評(píng)分。

2 結(jié)果

2.1 各組鼠尾腫脹度比較 見表2。與空白組比較，各組小鼠給藥后6 h,24 h，48 h鼠尾腫脹度明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，證明造模方法成功；給藥6 h后，預(yù)防組及預(yù)防對(duì)照組小鼠鼠尾腫脹度雖較模型組小，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；給藥48 h后，觀察組和治療對(duì)照組小鼠鼠尾腫脹度與模型組比較，明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而預(yù)防組與預(yù)防對(duì)照組，觀察組與治療對(duì)照組組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組鼠尾腫脹度比較

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.01

2.2 各組小鼠鼠尾病理學(xué)評(píng)分比較 見表3。病理圖片見圖1。光鏡下觀察各組鼠尾HE染色切片，對(duì)照組給藥6 h及48 h后鼠尾靜脈內(nèi)皮光整，無內(nèi)皮細(xì)胞脫落，血管壁周圍見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍組織稍水腫，血管內(nèi)無血栓；模型組給藥6 h后鼠尾靜脈內(nèi)皮粗糙，血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，血管周圍組織見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍組織水腫，血管內(nèi)可見血栓；給藥48 h后上述情況進(jìn)一步加重，大量血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，周圍組織見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個(gè)靜脈管腔，病理評(píng)分明顯增加，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。預(yù)防組和預(yù)防對(duì)照組鼠尾靜脈病理評(píng)分明顯低于模型組給藥6 h后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但2組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組和治療對(duì)照組鼠尾靜脈病理評(píng)分明顯低于模型組給藥48 h后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組病理評(píng)分低于治療對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 各組小鼠鼠尾病理學(xué)評(píng)分比較分)

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與治療對(duì)照組比較，△P<0.05

圖1 各組小鼠鼠尾HE染色(×200)

注：典型病理圖片：光鏡下觀察各組鼠尾HE染色切片，空白組給藥6 h及48 h后鼠尾靜脈內(nèi)皮光整，無內(nèi)皮細(xì)胞脫落，血管壁周圍見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍組織稍水腫，血管內(nèi)無血栓；模型組給藥6 h后鼠尾靜脈內(nèi)皮粗糙，血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，血管周圍組織見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍組織水腫，血管內(nèi)可見血栓；模型組給藥48 h后上述情況進(jìn)一步加重，大量血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，周圍組織見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個(gè)靜脈管腔，具有化療性靜脈炎基本特征，說明該方法造模成功。預(yù)防組鼠尾靜脈內(nèi)皮粗糙，周圍見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，周圍組織水腫，血管腔內(nèi)未見血栓；觀察組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)一步增加，靜脈管腔內(nèi)可見占1/2管腔血栓形成。預(yù)防對(duì)照組鼠尾靜脈內(nèi)皮粗糙，周圍見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，周圍組織水腫，血管腔內(nèi)可見少量血栓形成；治療對(duì)照組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死，脫落，靜脈管腔內(nèi)可見占2/3管腔血栓形成

3 討論

外周淺靜脈輸注化療藥物，尤其是VIN這類發(fā)泡劑類細(xì)胞毒藥物所導(dǎo)致的靜脈炎臨床非常常見[9-10]，雖然目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚[11-13],但作為局部無菌性血管炎性反應(yīng)，化療性靜脈炎所導(dǎo)致的以血管內(nèi)皮損傷為主的周圍血管炎性反應(yīng)的病理組織改變業(yè)已十分明確：血管內(nèi)皮細(xì)胞因凋亡、壞死、脫落導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，大量炎性細(xì)胞及血小板對(duì)損傷的血管內(nèi)皮的黏附、浸潤(rùn)，導(dǎo)致血管及周圍組織的水腫及血管內(nèi)血栓形成[14-15]?！白o(hù)脈散”是重慶市名中醫(yī)曾定倫主任醫(yī)師創(chuàng)制的臨床驗(yàn)方，我們將其外敷用于防治化療性靜脈炎，臨床觀察顯示化療給藥前應(yīng)用該藥，能有效預(yù)防局部用藥血管發(fā)紅，周周組織腫痛等靜脈炎表現(xiàn)[3]，而如果患者化療后出現(xiàn)輸液部位疼痛，輸液靜脈紅腫，條索樣改變，周圍組織水腫等情況，應(yīng)用護(hù)脈散后亦能迅速改善該癥狀[2]，但臨床觀察無法探討“護(hù)脈散”對(duì)化療性靜脈炎病理組織改變的臨床療效，本研究擬進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，來探討預(yù)防性用藥及治療性該藥2種給藥方式，對(duì)小鼠靜脈炎病理組織學(xué)改變情況，為下一步進(jìn)行靜脈炎發(fā)病機(jī)制及“護(hù)脈散”療效機(jī)制研究提供指導(dǎo)。

本研究結(jié)果顯示模型組小鼠尾靜脈給予VIN注射液后6 h即出現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，靜脈內(nèi)皮粗糙，血管周圍組織見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍組織水腫，血管內(nèi)已可見有血栓形成；而“護(hù)脈散”預(yù)防組靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞未見脫落，血管內(nèi)亦未見血栓形成，僅見血管周圍組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，組織水腫，病理評(píng)分明顯低于模型組(P<0.05)；預(yù)防對(duì)照組采用多磺酸粘多糖乳膏外敷，病理組織評(píng)分亦明顯低于模型組(P<0.05)，雖可見少量血栓形成，但與預(yù)防組病理評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明中藥“護(hù)脈散”和西藥多磺酸粘多糖乳膏都有預(yù)防VIN致化療性靜脈炎發(fā)生的療效，中醫(yī)素來講究“上工治未病”，如果能提前用藥，減少化療性靜脈炎的發(fā)生率，會(huì)明顯提高腫瘤患者治療的依從性和生命質(zhì)量。

本研究給藥48 h后模型組小鼠尾靜脈出現(xiàn)典型的血栓性靜脈炎組織病理表現(xiàn)，尾靜脈腫脹度明顯增加(P<0.01)，大量血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，周圍組織見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個(gè)靜脈管腔，病理組織評(píng)分較給藥前明顯增加(P<0.01)；而治療對(duì)照組小鼠應(yīng)用多磺酸粘多糖乳膏外敷治療后，鼠尾腫脹度及病理評(píng)分均較模型組顯著改善(P<0.05)，觀察組小鼠應(yīng)用“護(hù)脈散”治療后尾靜脈腫脹度雖較治療對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但其病理組織學(xué)評(píng)分較治療對(duì)照組改善更加明顯(P<0.05)，提示“護(hù)脈散”對(duì)于治療VIN引起的化療性靜脈炎療效優(yōu)于多磺酸粘多糖乳膏，與我們臨床觀察結(jié)果一致[2]。

化療性靜脈炎臨床表現(xiàn)為局部給藥?kù)o脈及周圍組織紅腫，疼痛，靜脈顏色加深，條索樣改變，根據(jù)其臨床表現(xiàn)曾定倫主任中醫(yī)師提出該病“熱壅血瘀”的中醫(yī)病機(jī)：靜脈穿刺及藥物毒性等原因?qū)е旅}絡(luò)創(chuàng)傷，濕熱毒邪外侵，脈道不利，阻塞不通，氣血瘀滯；瘀血阻滯，血行不暢，不通則痛；氣血運(yùn)行不暢，津液輸布受阻則腫脹；瘀血內(nèi)蘊(yùn)，蘊(yùn)久化熱，則局部發(fā)熱、發(fā)紅。針對(duì)其中醫(yī)病機(jī)，曾老師以“清熱解毒，消腫軟堅(jiān)、活血化瘀”立法創(chuàng)制“護(hù)脈散”。本方據(jù)古方《蘭室秘藏·瘡瘍門》“保生救苦散”為基礎(chǔ)，原方由：寒水石、大黃、黃柏三味藥物組成，曾老師易寒水石為芒硝，取黃芩、黃連代黃柏，加白芷，制成“護(hù)脈散”局部外敷治療本病。本方中生大黃外用能涼血消腫，逐瘀通經(jīng)，黃連、黃芩清熱解毒，涼血消腫，芒硝外用取其清熱消腫之功，更重要的是芒硝有軟堅(jiān)散結(jié)之效，對(duì)于靜脈炎發(fā)生過程中組織充血，腫脹及脈管壁條索狀改變療效顯著，曾老師將寒水石改為石膏，并在該方中重用，加辛散通絡(luò)止痛之白芷，迅速緩解靜脈炎“腫，痛”癥狀，體現(xiàn)出老中醫(yī)獨(dú)特的臨床思辨能力。

本研究結(jié)果顯示“護(hù)脈散”能有效阻斷和改善化療性靜脈炎血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕血管周圍組織水腫和血管內(nèi)血栓形成，從而有效預(yù)防和治療化療性靜脈炎，療效優(yōu)于多磺酸粘多糖乳膏，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]Gasparini G，Caffo O，Barni S，et al.Vinorebine is an active antiproliferative agent in pretreated adranced breast cancer patients:a phase Ⅱstudy[J].J ClinOncol，1994，12(10):2094-2101.

[2]邱敏，鄒文娟，陶勁，等.護(hù)脈散治療化療性靜脈炎的療效觀察[J].中國(guó)藥房，2015，26(29)：4092-4094.

[3]邱敏，應(yīng)堅(jiān)，劉莉.護(hù)脈膏預(yù)防化療性靜脈炎臨床療效觀察[J].中醫(yī)臨床研究，2014，6(2)：29-31.

[4]Herter J，Zarbock A.Integrin regulation during leukocyte recruitment[J].The Journal of Immunology，2013，190(9)：4451-4457.

[5]Schnoor M，Alcaide P，Voisin M B，et al.Crossing the vascular wall：common and unique mechanisms exploited by different leukocyte subsets during extravasation[J].Mediators of inflammation，2015:1-23.

[6]Voisin M B，Nourshargh S.Neutrophil transmigration：emergence of an adhesive cascade within venular walls[J].Journal of innate immunity，2013，5(4)：336-347.

[7]馬麗娟，王卓，胡晉紅.西咪替丁對(duì)長(zhǎng)春瑞濱所致輸液性靜脈炎的防治作用[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2009，9(5)：340-343.

[8]Kohno E，Murase S，Nishikata M，et al.Methods of preventing vinorelbine-induced phlebitis：an experimental study in rabbits[J].International journal of medical sciences，2008，5(4)：218.

[9]Shum E，Halmos B，Cheng H，et al.Vinorelbine-induced phlebitis is common in patients receiving adjuvant chemotherapy for non-small cell lung cancer(NSCLC)[C]//ASCO Annual Meeting Proceedings.2016，34(15)：3-7.

[10]麥榮國(guó)，覃彪民.瘀腫消貼治療急性軟組織損傷的臨床價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)藥，2012,7(4)：419-420.

[11]Konaka K，Moriyama K，Okada N，et al.Ephedra protects vascular endothelium cells from vinorelbine‐induced cytotoxicity by preserving endothelial nitric oxide synthase activity[J].Traditional & Kampo Medicine，2015，2(2)：74-80.

[12]周秀敏，朱麗杰，張秀梅，等.中醫(yī)藥防治化療性靜脈炎的新進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22(3)：338-340.

[13]王紅，吳婷婷，盧慧芳，等.長(zhǎng)春瑞濱致家兔化療性靜脈炎血清TNF-α變化趨勢(shì)研究[J].護(hù)理學(xué)雜志：外科版，2015，30(1)：48-49.

[14]張小來，葉希平，陳曉蓉，等.熱敷法預(yù)防家兔化療性靜脈炎效果觀察及機(jī)制探討[J].山東醫(yī)藥，2013，53(22):22-24.

[15]周留勇，尤建良，單珍珠，等.復(fù)脈膏外敷防治長(zhǎng)春瑞濱致兔耳緣靜脈損傷的病理實(shí)驗(yàn)研究[J].四川中醫(yī)，2014，32(5)：58-61.

EfficacyObservation：DifferentAdministrationofHumaiPowderonVinorelbineInducedPhlebitisMice

Qiu Min, Li XIaoqing, Zou Wenjuan,Sun KE

(ChongqingHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing400021,China)

Objective:To Observe efficacy of prophylactic and therapeutic applications of Humai powder on vinorelbine induced phlebitis mice, evaluating of its effectiveness.MethodsVinorelbine was injected intravenously on models of phlebitis. Prevention and treatment of administration were respectively used, and tails swelling condition and pathological score were observed after Humai Powder administered mouse, MPS cream as a positive control.ResultsComparing the model group and the control group, Humai powder can significantly reduce tails swelling in vinorelbine induced phlebitis mice(P<0.05), and improve tail vein inflammation pathological score (P<0.01).ConclusionHumai powder is effective on prevention and treatment of vinorelbine induced phlebitis, stronger than MPS cream.

Phlebitis; Vinorelbine; Humai Powder; Histopathological score

重慶市衛(wèi)計(jì)委中醫(yī)藥科技項(xiàng)目(ZY201402041)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)名老中醫(yī)傳承工作室建設(shè)項(xiàng)目[國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)〔2013〕47號(hào)]

邱敏(1975.08—)，男，醫(yī)學(xué)博士，副主任中醫(yī)師，研究方向：惡性腫瘤的中西醫(yī)結(jié)合治療和研究，E-mail:13983922797@163.com

李曉清(1981.11—)，女，醫(yī)學(xué)碩士，副主任中醫(yī)師，研究方向：惡性腫瘤的中西醫(yī)結(jié)合治療和研究，E-mail:1140641979@qq.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.10.040

(2016-07-15收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))