魚腥草次生代謝產(chǎn)物及其抗細(xì)菌活性

單體江，王 偉，余炳偉，王小晴，吳春銀，翁道玥，崔紫寧，王 軍*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院/廣東省森林植物種質(zhì)創(chuàng)新與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/廣東省微生物信號與作物病害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642)

魚腥草次生代謝產(chǎn)物及其抗細(xì)菌活性

單體江1，王 偉1，余炳偉1，王小晴1，吳春銀1，翁道玥1，崔紫寧2，王 軍1*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院/廣東省森林植物種質(zhì)創(chuàng)新與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院/廣東省微生物信號與作物病害防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642)

【目的】為了分析和鑒定魚腥草揮發(fā)油的化學(xué)組成，測定魚腥草揮發(fā)油和乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物對7種供試細(xì)菌的抑制活性?！痉椒ā勘疚牟捎盟羝麴s法和甲醇冷浸提取法分別提取魚腥草揮發(fā)油和乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物，通過GC-MS對提取得到的揮發(fā)油進(jìn)行化學(xué)成分分析，采用抑菌圈法和TIC-MTT-生物自顯影法分別測定揮發(fā)油和乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物對供試細(xì)菌的抑制活性。【結(jié)果】魚腥草揮發(fā)油的得率為0.09 %，從魚腥草揮發(fā)油中共鑒定出49個組分，占總相對含量的93.35 %，主要成分是β-蒎烯(23.65 %)、2-十三烷酮(12.38 %)、甲基正壬酮(8.55 %)、乙酸冰片酯(4.08 %)、月桂酸(3.77 %)、1-十三烯(3.51 %)、氧化石竹烯(2.97 %)和香附烯(2.59 %)等。魚腥草揮發(fā)油對7種供試細(xì)菌均表現(xiàn)出一定的抑菌作用，其中對黃瓜角斑病菌的抑制活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑為(20.0±2.0)mm，而對溶血葡萄球菌的抑制活性最弱，抑菌圈直徑僅為(8.7 ± 0.6)mm；對桉樹青枯病菌和黃瓜角斑病菌的抑制活性要強(qiáng)于硫酸鏈霉素。魚腥草乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物未表現(xiàn)出任何抗菌活性。【結(jié)論】魚腥草中含有豐富的揮發(fā)性成分，且抗菌活性物質(zhì)主要分布于揮發(fā)油中；魚腥草揮發(fā)油對桉樹青枯病菌和黃瓜角斑病菌表現(xiàn)出較好的抑制活性，對革蘭氏陰性菌的抑制活性要強(qiáng)于革蘭氏陽性菌。

魚腥草；次生代謝產(chǎn)物；抗細(xì)菌活性

【研究意義】魚腥草為三白草科蕺菜屬植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb.)的全草，別名側(cè)耳根、豬鼻孔、魚鱗草、九蓮草等，因揮發(fā)油中含有癸酰乙醛即魚腥草素，帶有魚腥氣，故名魚腥草[1-3]。魚腥草為多年生草本，廣泛分布于我國南方各省區(qū)，具有清熱解毒、消腫排膿、利尿通淋的功效，有“中藥抗生素”的美稱[4-7]。魚腥草富含多種維生素、蛋白質(zhì)和礦質(zhì)元素，是衛(wèi)生部確認(rèn)的“藥食兩用”資源之一，開發(fā)潛力巨大[8-9]。在我國西南地區(qū)，魚腥草是百姓日常生活的必備品，也是多種名吃如酸湯魚、絲娃娃等的必備佐料，在廣東地區(qū)則多用來煲湯。前人的研究表明，魚腥草具有很好的抗菌、消炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤和提高免疫力等多種藥理作用[10-15]，目前已發(fā)現(xiàn)魚腥草揮發(fā)油對大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、八疊球菌、乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌等多種人體病原細(xì)菌具有一定的抑制作用，其中對革蘭氏陰性菌的抑菌效果的抑菌效果更強(qiáng)[16-17]。由于魚腥草廣泛的藥理活性以及較高的營養(yǎng)價值，使得人們研究的重點(diǎn)都集中在藥用價值和食用價值方面以及活性成分的提取和分離等方面[18-23]。【前人研究進(jìn)展】目前尚未見魚腥草在農(nóng)業(yè)和林業(yè)上研究和應(yīng)用的報道?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本研究通過水蒸汽蒸餾法和甲醇冷浸提取法分別提取魚腥草揮發(fā)油和乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物，通過抑菌圈法和TIC-MTT-生物自顯影法測定其抑菌活性?！緮M解決的關(guān)鍵問題】闡明魚腥草揮發(fā)油的化學(xué)組成，評價魚腥草揮發(fā)油和乙酸乙酯層代謝產(chǎn)物對供試細(xì)菌的抑制活性，以期為魚腥草在農(nóng)林業(yè)上的應(yīng)用提供新的思路，為魚腥草的綜合開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 植物材料

魚腥草于2014年8月15日購買自廣州市天河區(qū)長湴市場，標(biāo)本由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院鄭明軒老師鑒定。

1.2 供試細(xì)菌

供試細(xì)菌包括5種革蘭氏陰性菌和2種革蘭氏陽性菌，分別為根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens，G-)、大腸桿菌(Escherichiacoli，G-)、桉樹青枯病菌(Ralstoniasolanacearum，G-)、黃瓜角斑病菌(Pseudomonaslachrymans，G-)、番茄瘡痂病菌(Xanthomonasvesicatoria，G-)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis，G+)和溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus，G+)，以上菌株由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院森林保護(hù)教研室提供。

1.3 儀器與試劑

6890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)(Agilent Technologies，美國)；水蒸汽蒸餾裝置(北京永光明醫(yī)療儀器廠)；RE5298A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮儀器廠)；硫酸鏈霉素(Sigma，美國)；C8-C40系列正構(gòu)烷烴(Sigma，美國)；噻唑蘭[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, MTT](Amresco，美國)；氯化鈉、無水乙醚、無水硫酸鈉、正己烷等均為國產(chǎn)分析純(北京化學(xué)試劑公司)。

1.4 魚腥草揮發(fā)油的提取

參照Lou等[24]的方法，魚腥草(400 g)，稱重后將其裝入水蒸汽蒸餾裝置內(nèi), 加入適量蒸餾水，待溫度升至100 ℃后連續(xù)蒸餾6 h，收集蒸出的精油，加入一定量的NaCl, 用乙醚萃取3次，萃取液合并，加入無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，濃縮萃取液或讓乙醚自然揮發(fā)，4 ℃密封保存。

1.5 魚腥草揮發(fā)油化學(xué)組分的GC-MS分析

魚腥草揮發(fā)油化學(xué)組分鑒定在6890N-5975C GC-MS(Agilent Technologies，USA)上進(jìn)行，色譜柱為DB-5(30 m×250 μm×0.25 μm)，無分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度230 ℃，進(jìn)樣量為1 μl。升溫程序：起始溫度70 ℃，保持1 min，然后8 ℃/min上升到120 ℃，保持1 min，然后30 ℃/min上升到150 ℃，保持1 min，然后5 ℃/min上升到175 ℃，保持0 min，然后1 ℃/min上升到180 ℃，保持0 min，然后5 ℃/min上升到240 ℃，保持0 min。電離方式為EI，電離能量70 eV，載氣為He，流速1 mL/min，全掃描采集，質(zhì)子檢測器(MSD)檢測。通過NIST(2011)譜庫檢索，與標(biāo)準(zhǔn)化合物的保留時間和質(zhì)譜圖作對比，確定待測成分。

保留系數(shù)(retention index，RI)的測定[25-26]：系列正構(gòu)烷烴C8～C40用氯仿稀釋50倍，然后與上述GC條件一樣進(jìn)行分離，記錄C8～C40各正構(gòu)烷烴的保留時間。用線性升溫公式計(jì)算各成分的RI值：RI=100n+100(lgtx- lgtn)/(lgtn+1- lgtn)，其中tx、tn和tn+1分別為被分析的組分和碳原子數(shù)處于n和n+1之間的正烷烴(tn

1.6 魚腥草乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物的制備

采用甲醇冷浸提取的方法制備乙酸乙酯層粗提物。將魚腥草全株(400 g)剪碎，裝入1000 mL的三角瓶中，裝入適量甲醇，室溫下冷浸提取3次，每次7 d，濃縮提取液，水混懸后用乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，濃縮萃取液即得到乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物，4 ℃冷藏，備用。

1.7 魚腥草次生代謝產(chǎn)物抗細(xì)菌活性的測定

魚腥草揮發(fā)油抗細(xì)菌活性的測定參照趙文越等[27]的方法，略有改進(jìn)。供試細(xì)菌由于長期保存在-20 ℃下，在活性測定前，先用LB 平板進(jìn)行活化培養(yǎng)(28 ℃, 暗) 48 h，然后挑取單菌落，在LB液體培養(yǎng)基中搖培(28 ℃，暗，150 r/min) 24 h，將菌液濃度稀釋到108cfu/mL，備用。倒好平板后，用移液槍分別吸取50 μl菌液，用玻璃棒涂板。用滅菌的鑷子夾取無菌的濾紙片放在培養(yǎng)皿中，每皿放置3片，濾紙片保持一定的距離，然后分別在濾紙片上加入5 μl的揮發(fā)油，陽性對照為5 μl 0.2 mg/mL的硫酸鏈霉素，每個處理重復(fù)3次。在黑暗條件下培養(yǎng)24 h后用尺子量取抑菌圈直徑的大小。

魚腥草乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物抗細(xì)菌活性的測定參照Shan等[28]的方法。將乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物用乙酸乙酯和甲醇溶解，用直徑為0.5 mm的毛細(xì)管點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量為5 μl，點(diǎn)樣點(diǎn)越小越好。采用二氯甲烷和甲醇作為展開劑進(jìn)行薄層層析，薄層層析后在薄層板的一側(cè)原點(diǎn)處點(diǎn)5 μl濃度為0. 2 mg/mL 的硫酸鏈霉素作為陽性對照，備用。將滅菌的LB半固體培養(yǎng)基(瓊脂含量為0.5 %)融化，待溫度降至40～50 ℃時，取1 mL濃度為108cfu /mL的各菌液分別加入到100 mL的培養(yǎng)基中，迅速搖勻。而后用噴樣器將制備好的菌懸液均勻噴灑到層析后的硅膠板(層析液已揮干)上。待培養(yǎng)基在硅膠板上冷卻后，將硅膠板置于培養(yǎng)皿中于4 ℃的冰箱中放置4 h，以利于抗菌成分的擴(kuò)散。而后將其置于28 ℃下保濕培養(yǎng)，12 h后，取出硅膠板，上面噴加外源顯色劑噻唑藍(lán)(MTT)，約10 min后，即可觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有抗菌活性成分處，供試菌由于受到抑菌成分的抑制而出現(xiàn)抑菌斑；無抗菌活性成分處，供試菌正常生長，通過MTT顯色后而出現(xiàn)背景色藍(lán)色，從而與抑菌斑區(qū)分開。

2 結(jié)果與分析

2.1 魚腥草揮發(fā)油化學(xué)成分分析

采用水蒸汽蒸餾法提取魚腥草中的揮發(fā)油，得率為0.09 % (以鮮重為基礎(chǔ))。通過GC-MS分析，從魚腥草揮發(fā)油中共鑒定出49個成分，占總相對含量的93.35 %，魚腥草揮發(fā)油組成成分及其相對含量見表1，總離子流圖見圖1。從表1中可以看出，魚腥草揮發(fā)油化合物種類豐富，主要是萜烯類、酯類及其含氧衍生物，其中主要成分是β-蒎烯(23.65 %)、2-十三烷酮(12.38 %)、甲基正壬酮(8.55 %)、乙酸冰片酯(4.08 %)、月桂酸(3.77 %)、1-十三烯(3.51 %)、氧化石竹烯(2.97 %)和香附烯(2.59 %)，其相對含量之和為61.50 %，其他成分相對含量均小于2.5 %。何剛等[6]通過水蒸汽蒸餾法從魚腥草干品藥材中53種揮發(fā)性成分，其主要成分為β-月桂烯(20.59 %)、十二醛(5.42 %)、β-水芹烯(4.49 %)、α-蒎烯(4.02 %)、甲基正壬酮(3.29 %)、香葉醇乙酸酯(3.33 %)、石竹烯(3.44 %)、石竹烯氧化物(3.57 %)、β-蒎烯(2.97 %)等。宋琛超等[29]對不同產(chǎn)地魚腥草藥材揮發(fā)油成分研究發(fā)現(xiàn)，各地魚腥草揮發(fā)油的主要有效成分相同，其差異主要體現(xiàn)在物質(zhì)的相對含量上，其中(-)-4-萜品醇、α-松油醇、檜烯和β-月桂烯等物質(zhì)含量的差別較大。

表1 魚腥草揮發(fā)油成分分析及其含量測定結(jié)果

續(xù)表1 Continued table 1

編號Number保留時間(min)RT保留系數(shù)RI化合物Compound分子式Molecularformula相對含量(%)Relativecontent97.88510964,7-DiaminobenzofurazanC6H6N4O1.62108.2111109馬氏香料二醛DolichodialC10H14O20.19118.59611272,6-二甲氧基苯酚2,6-dimethoxy-PhenolC8H10O30.36129.6981173環(huán)庚烷CycloheptaneC7H140.361310.40412004-蒈烯4-CareneC10H160.601412.7521289乙酸冰片酯BornylacetateC12H20O24.081512.9601297甲基正壬酮2-UndecanoneC11H22O8.551613.32413119-十六碳烯酸9-HexadecenoicacidC16H30O20.221713.39913141,5,5-三甲基-6-亞甲基-環(huán)己烯1,5,5-Trimethyl-6-methylene-cyclohexeneC10H160.521813.57613212-Methylbicyclo[4.3.0]non-1(6)-eneC10H160.351914.3401352γ-松油醇γ-TerpineolC10H18O0.122014.6081362月桂烯MyrceneC10H160.222114.99813761-十三烯 1-TrideceneC13H263.512215.1321381乙酸香葉酯GeranylacetateC12H20O22.482315.4901394NeodihydrocarveolC10H18O0.402416.28714271-石竹烯 l-CaryophylleneC15H241.342516.5761439順式-α-紅沒藥烯cis-α-BisaboleneC15H240.502617.5501479AlloaromadendreneC15H240.572717.9241493香附烯α-CypereneC15H242.592818.0311497長葉烯Longifolene-(V4)C15H240.612918.068149810s,11s-Himachala-3(12),4-dieneC15H240.513018.22415042-十三烷酮 2-TridecanoneC13H26O12.383118.8871532Selina-3,7(11)-dieneC15H241.463219.8231569α-法尼烯α-FarneseneC15H241.633319.9671575月桂酸DodecanoicacidC12H24O23.773420.3631590氧化石竹烯CaryophylleneoxideC15H24O2.973520.6251600β-新丁香三環(huán)烯β-NeocloveneC15H241.333620.9411622乙酸香茅酯CitronellylacetateC12H22O20.553721.37916531-乙基-2-羥基苯并咪唑1-Ethyl-2-benzimidazolinoneC9H10N2O0.243821.5611666欖香素ElemicinC12H16O30.683922.0211698γ-蛇床烯γ-SelineneC15H240.364022.10117022,3-DimethylphenylisocyanateC9H9NO0.344122.56117242-十五烷酮2-PentadecanoneC15H30O0.454226.9041952去氧紫草素Arnebin7C16H16O42.424327.1081964棕櫚酸HexadecanoicacidC16H32O21.324427.5301989三氟甲苯丁二酮1,3-Butanedione,4,4,4-trifluoro-1-p-tolyl-C11H9F3O21.664529.02820581-十三烯1-TrideceneC13H260.524629.26820684-甲基愈創(chuàng)木酚CreosolC8H10O20.224729.3542072葉綠醇PhytolC20H40O0.614829.63820847,10-十六碳二烯酸甲酯7,10-HexadecadienoicacidmethylesterC17H30O20.904929.7392088反油酸(E)-9-OctadecenoicacidC18H34O22.18

圖1 魚腥草揮發(fā)油總離子流色譜圖Fig.1 TLC of volatile oil from Houttuynia cordata

2.2 魚腥草揮發(fā)油及其乙酸乙酯層粗提物的抗細(xì)菌活性

采用抑菌圈法測定了魚腥草揮發(fā)油對7種供試細(xì)菌的抑制活性，其結(jié)果如圖2所示，魚腥草揮發(fā)油對7種供試細(xì)菌均表現(xiàn)出一定的抑菌作用，但對不同供試細(xì)菌的抑制活性差異較大，其中對黃瓜角斑病菌的抑制活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑為(20.0±2.0) mm，而對溶血葡萄球菌的抑制活性最弱，抑菌圈直徑僅為(8.7 ± 0.6) mm，對其他供試細(xì)菌的抑菌圈直徑在10.0～14.5 mm。與陽性對照相比，魚腥草揮發(fā)油對桉樹青枯病菌和黃瓜角斑病菌的抑制活性要強(qiáng)于硫酸鏈霉素，對其他供試細(xì)菌的抑制活性均比陽性對照弱?？傮w來看，魚腥草揮發(fā)油對革蘭氏陰性菌的抑制活性要強(qiáng)于革蘭氏陽性菌。

通過TLC-MTT-生物自顯影法測定了魚腥草乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物的抗細(xì)菌活性，其結(jié)果見表2。陽性對照硫酸鏈霉素對7種供試細(xì)菌的抑制活性與抑菌圈法測定的結(jié)果一致，而魚腥草乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物對7種供試細(xì)菌均未表現(xiàn)出任何抗菌活性，說明魚腥草的抗菌活性物質(zhì)主要分布于揮發(fā)油中。

3 討論與結(jié)論

目前對魚腥草揮發(fā)油成分的研究較多，但都不盡相同，加上不同產(chǎn)地、不同采摘時間、不同部位、不同狀態(tài)等都會造成魚腥草揮發(fā)油成分的差異，正是這種不確定性，造成了2006年的魚腥草事件[5, 30-32]。癸酰乙醛被認(rèn)為是魚腥草的有效成分[33]，然而本文在魚腥草揮發(fā)油中并未發(fā)現(xiàn)癸酰乙醛的存在，這與采用的提取方法有關(guān)。曾虹燕等[34]采用3種不同的方法提取魚腥草揮發(fā)油，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種方法提取的揮發(fā)油無相同成分。超臨界CO2萃取的魚腥草揮發(fā)油具腥味，其魚腥草素相對含量高達(dá)14.393 %；而水蒸氣蒸餾的魚腥草揮發(fā)油不具腥味，不含魚腥草素。原因可能是在加熱條件下，魚腥草素被氧化為癸酰乙酸，而癸酰乙酸極易降解為甲基正壬酮。石油醚提取的魚腥草揮發(fā)油不含這2種成分[34-35]。本文采用的是水蒸汽蒸餾法，說明癸酰乙醛已被氧化降解為甲基正壬酮。而金寄春[36]研究發(fā)現(xiàn)甲基正壬基酮和癸酰乙醛的療效和藥理作用十分相似，是魚腥草的真正有效成分。本研究中甲基正壬酮也是魚腥草揮發(fā)油的主要成分，其含量高達(dá)8.55 %。

圖2 魚腥草揮發(fā)油的抗細(xì)菌活性Fig.2 Antibacterial activity of the volatile oil from Houttuynia cordata

供試樣品Testsamples抗細(xì)菌活性AntibacterialactivityAg-tuRa-soXa-veBa-suSt-haEs-coPs-la乙酸乙酯層粗提物Ethylacetateextracts-------硫酸鏈霉素Streptomycinsulfate+++++++++++++++

注：“-”為無抗菌斑；“+”表明抗菌斑點(diǎn)最大直徑d = 0～5 mm，“++”表明d = 5～10 mm，“+++”表明d ≥ 10 mm。Ag-tu：Agrobacteriumtumefaciens，Ra-so：Ralstoniasolanacearum，Xa-ve：Xanthomonasvesicatoria，Ba-su：Bacillussubtilis，St-ha：Staphylococcushaemolyticus，Es-co：Escherichiacoli，Ps-la：Pseudomonaslachrymans。展開劑∶二氯甲烷∶甲醇= 10∶1，v/v。

徐燕[37]測定了魚腥草乙醇提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、漢遜氏酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)分別為6.25、12.5、25 mg/mL，而黃亮等[38]研究發(fā)現(xiàn)魚腥草乙醇提取液對多粘芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌最小抑制濃度分別為0.06、0.06、0.08、0.08 g/mL。而本研究中乙酸乙酯層次生代謝產(chǎn)物未表現(xiàn)出任何抑菌活性。一方面可能是因?yàn)榛钚晕镔|(zhì)主要存在于乙酸乙酯萃取后的水層中；另一方面，本文采用的是TLC-MTT-生物自顯影法，該方法不僅可以快速簡便的檢測樣品的抑菌活性，而且可以了解樣品中化合物的極性[28-39]，但由于樣品用量少，達(dá)不到最低抑菌濃度，故未表現(xiàn)出抑菌活性。然而魚腥草揮發(fā)油對7種供試細(xì)菌均具有一定的抑制活性，說明魚腥草揮發(fā)油是魚腥草藥材的主要活性成分，這與前人的研究結(jié)果一致[40]。此外，魚腥草揮發(fā)油雖然對溶血葡萄球菌和大腸桿菌等人體病原菌表現(xiàn)出抑制活性，但是對植物病原菌的抑制活性更強(qiáng)，對黃瓜角斑病菌和桉樹青枯病菌的抑制活性更是強(qiáng)于陽性對照硫酸鏈霉素。因此能否利用魚腥草揮發(fā)油生產(chǎn)抗植物病原菌新型生物農(nóng)藥值得更加深入的研究和探索。魚腥草各生長發(fā)育時期根狀莖揮發(fā)油的抗菌活性均較好，而地上部分揮發(fā)油則只有在其衰老前才具有良好的抗菌活性[41]，且鮮魚腥草抗菌作用大于干魚腥草[42]，而桉樹青枯病菌、黃瓜角斑病菌和根癌農(nóng)桿菌均為土傳性病害，因此用魚腥草作為桉樹林地的覆蓋物或是將魚腥草與黃瓜輪作或間作或許為桉樹青枯病和黃瓜角斑病等的防治提供了新的思路。

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SecondaryMetabolitesfromHouttuyniacordataThunb.
andTheirAntibacterialActivities

SHAN Ti-jiang1, WANG Wei1, YU Bing-wei1, WANG Xiao-qing1, WU Chun-yin1, WENG Dao-yue1, CUI Zi-ning2, WANG Jun1*

(1.Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangdong Guangzhou 510642, China; 2.Guangdong Province Key Laboratory of Microbial Signals and Disease Control, College of Agriculture, South China Agricultural University, Guangdong Guangzhou 510642, China)

【Objective】To analyze and identify the chemical composition of volatile oil extracted fromHouttuyniacordata，the inhibition activities of volatile oil and ethyl acetate extracts against 7 different bacteria were determined.【Method】The volatile oil fromHouttuyniacordatawas extracted by hydro-distillation, and the ethyl acetate extracts was extracted by methanol extraction at room temperature. Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was used to analyze the chemical compositions of the essential oil，and inhibition zone method and TLC-MTT-bioautography assay were used to detect the inhibitory activities of the volatile oil and ethyl acetate extracts against bacteria, respectively.【Result】The essential oil from fresh weight basis ofHouttuyniacordatawas extracted with the yield of 0.09 %, and forty-nine components from the volatile oil were identified, which accounted for 93.35 % of total contents, of whichβ-Pinene (23.65 %), 2-Tridecanone (12.38 %), 2-Undecanone (8.55 %), Bornyl acetate (4.08 %), Dodecanoic acid (3.77 %), 1-Tridecene (3.51 %), Caryophyllene oxide (2.97 %) andα-Cyperene (2.59 %) were the major compounds. The volatile oil had certain antibacterial activities on 7 test strains, which showed the strongest inhibitory activity againstPseudomonaslachrymansand the weakest onStaphylococcushaemolyticus, and the inhibition zone diameters were (20.0 ± 2.0) and (8.7 ± 0.6) mm, respectively. The antibacterial activities of the volatile oil againstRalstoniasolanacearumandPseudomonaslachrymanswere better than that of streptomycin sulfate. The ethyl acetate extracts fromHouttuyniacordatashowed no antibacterial activity on test bacteria. 【Conclusion】Houttuyniacordatawas rich in volatile components, and the antibacterial active substances were mainly distributed in the volatile oil. The volatile oil showed better inhibitory activities againstRalstoniasolanacearumandPseudomonaslachrymans. The inhibitory activity of volatile oil on gram-negative bacteria was stronger than gram-positive bacteria.

Houttuyniacordata; Secondary metabolites; Antibacterial activities

1001-4829(2017)5-1041-07

10.16213/j.cnki.scjas.2017.5.010

2016-05-10

廣東省普通高校青年創(chuàng)新人才項(xiàng)目(2014KQNCX 034)；廣東省林業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目(2015KJCH043)；廣州市珠江科技新星專項(xiàng)(201506010029)

單體江(1983-)，男，博士，講師，主要從事林木病理研究，E-mail：tjshan@scau.edu.cn；*為通訊作者：王 軍(1962-)，男，博士，教授，E-mail：wangjun@scau.edu.cn，Tel:18002265983 。

S636

A

(責(zé)任編輯 陳 虹)