結腸癌組織中β防御素—2的表達與樹突狀細胞浸潤的相關性研究

孫小娟+李彬+余丹純+黃耀星

【摘要】 目的 探討β防御素-2（HBD-2）在結腸癌組織中的表達與樹突狀細胞（DCs）浸潤的相關性。方法 30例結腸腺癌以及結腸腺瘤患者作為研究組， 30例正常健康者作為對照組。運用免疫組化法檢測HBD-2和S100蛋白在兩組人員結腸黏膜組織中的表達情況， 計算陽性率， 分析HBD-2與DCs浸潤的相關性。結果 研究組患者結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為73.33%和80.00%， 其中結腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為78.26%和82.61%， 結腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對照組結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為23.33%和16.67%， 觀察組與對照組比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HBD-2表達與DCs浸潤呈顯著的正相關（r=0.742， P<0.05）。結論 HBD-2和S100蛋白在結腸腺癌和結腸腺瘤組織中的表達水平顯著高于正常結腸組織；HBD-2表達與DCs浸潤有呈著的正相關。

【關鍵詞】 結腸癌；β防御素-2 ；樹突狀細胞；相關性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.26.058

結腸癌是危害人體身心健康的常見惡性腫瘤， 近年來， 其發(fā)病率和死亡率已高居惡性腫瘤的第二位[1]。HBD-2和DCs分別為重要的內(nèi)源性抗菌肽和抗原呈遞細胞， 兩者均能影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展， 其中， 最主要的作用是激活免疫細胞， 發(fā)揮對抗腫瘤的活性， 一直是國內(nèi)外研究的重點[2-4]。由于S100蛋白特異性表達于腫瘤浸潤的DCs中， 可用來衡量DCs的浸潤程度[5]。目前對于HBD-2 在結腸癌組織中的表達及與DCs浸潤相關性的研究鮮有報道。本文收集結腸腺癌與結腸腺瘤患者和健康人群各30例， 通過檢測HBD-2的表達水平及DCs浸潤程度， 探討在結腸腺癌和結腸腺瘤組織中兩者的相關性， 以及結腸癌與患者體內(nèi)的免疫反應之間的關聯(lián)， 以期為結腸癌的免疫療法提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年2月～2016年2月在本院檢查又經(jīng)病理科確診的23例結腸腺癌患者、7例結腸腺瘤患者作為研究組， 男18例、女12例， 年齡18～70歲， 平均年齡（50.34±8.98）歲。所有患者無其他器質(zhì)性疾病， 且均未接受相應的臨床治療。另選取同期30例在本院檢查結腸未見異常、無腫瘤、無炎癥性疾病史的正常健康者作為對照組， 男17例、女13例， 年齡18～70歲， 平均年齡（51.67±7.35）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 兩組均采用腸鏡活檢取材， 組織標本采用多聚甲醛固定， 石蠟包埋處理。運用免疫組化EnVision二步法， 檢測兩組結腸組織中HBD-2 和S100 蛋白的表達情況， 主要步驟如下：收集標本-切片-脫蠟和水化處理-室溫孵育-PBS沖洗-滴加一抗（兔抗人HBD-2 多克隆抗體、兔抗人S100 多克隆抗體）-室溫孵育-PBS緩沖液浸泡-滴加ChemMate Envision+/HRP-室溫孵育-PBS緩沖液浸泡-滴加DAB顯色劑-室溫孵育-蒸餾水沖洗-蘇木素復染-蒸餾水洗滌-各級酒精脫水-二甲苯浸泡-封片膠封片；陰性對照為PBS， 陽性對照為已知陽性片。分別以細胞漿、細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色作為判斷HBD-2、S100蛋白陽性表達的依據(jù)， 在每一切片中觀察30個高視野（×400）， 均為陽性細胞最多區(qū)域， 將每一個高視野中的陽性細胞個數(shù)<5個記為陰性（-），≥5 個記為陽性（+）[5]。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；相關性采用Spearman法分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 兩組HBD-2表達水平對比結果 研究組患者結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為73.33%和80.00%， 其中結腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為78.26%和82.61%， 結腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對照組結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為23.33%和16.67%， 觀察組與對照組比較， 差異有統(tǒng)計學意義（χ2=15.0167、24.0934， P<0.05）。見表1。

2. 2 研究組腸組織HBD-2 和S100 陽性DCs相關性分析 在研究組患者中， HBD-2 表達與和S100陽性DCs浸潤呈正相關（r=0.742， P<0.05）。見表2。

3 討論

抗菌肽是生物體內(nèi)存在的重要的免疫活性物質(zhì)， 主要參與黏膜免疫反應， 防御素家族是目前存在于人體中的兩大類抗菌肽之一， 其中β防御素是該家族中的重要分支[4]。HBD-2一般廣泛表達于黏膜上皮細胞， 具有廣譜抗菌、抗病毒等生理活性， 正常狀態(tài)時表達較少， 但當機體受到炎癥刺激時， 能夠大量表達， 進而發(fā)揮重要的免疫防御作用[6]。近年來研究表明， HBD-2是機體免疫細胞的趨化因子， 能夠趨化誘導多種免疫細胞， 對DCs也具有較強的趨化作用， DCs在機體的免疫反應中主要發(fā)揮呈遞抗原的作用， 通過激活機體T細胞對抗腫瘤傷害， 因此DCs的浸潤可以用來標記腫瘤的發(fā)生發(fā)展， 其浸潤程度可通過檢測S100蛋白的表達情況進行標明[7， 8]。

本研究結果表明， 研究組患者結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為73.33%和80.00%， 其中結腸腺癌患者中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為78.26%和82.61%， 結腸腺瘤患者分別為57.14%和71.43%；對照組結腸黏膜組織中HBD-2和S100蛋白表達的陽性率分別為23.33%和16.67%， 觀察組與對照組比較， 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HBD-2表達與DCs浸潤呈顯著的正相關（r=0.742， P<0.05）。提示結腸腺癌和結腸腺瘤患者在未經(jīng)治療時， 機體已經(jīng)啟動免疫防御機制， 且DCs浸潤程度越高， HBD-2表達陽性率越高， 此時機體防御能力越強， 對腫瘤的對抗作用越顯著。本研究結果， 與文獻報道相一致[3， 9]。

綜上所述， 結腸腺癌和結腸腺瘤組織中HBD-2和S100蛋白表達相對于正常結腸組織顯著增高， 結腸腺癌和結腸腺瘤患者通過增加HBD-2的表達和DCs浸潤共同參與對癌腫的免疫反應， 且DCs的浸潤能增強HBD-2的表達。

參考文獻

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[收稿日期：2017-07-27]endprint