Gene—Xpert MTB/RIF在西藏地區(qū)結(jié)核病診斷中的應(yīng)用研究

嘎松卓嘎+普芝+巴桑瓊達(dá)+小尼瑪

【摘要】 目的 探討Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地區(qū)結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 對(duì)974例可疑結(jié)核病患者的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行結(jié)核涂片抗酸染色鏡檢和Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)。對(duì)比兩種檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 974例檢測(cè)標(biāo)本中， Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率為12%（118/974）， 其中利福平敏感的標(biāo)本為93例， 利福平耐藥的標(biāo)本為25例（耐藥率為21%）?？顾崛旧?yáng)性標(biāo)本為15例， 檢測(cè)陽(yáng)性率為2%。Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率高于抗酸染色， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地區(qū)結(jié)核病診斷和治療中具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值， 且方法簡(jiǎn)便、快速。

【關(guān)鍵詞】 Gene-Xpert MTB/RIF；結(jié)核分枝桿菌；利福平；耐藥

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.26.012

【Abstract】 Objective To investigate the application value of Gene-Xpert and MTB/RIF in the diagnosis of tuberculosis in Tibet. Methods Specimens of 974 suspected tuberculosis patients all received acid fast staining microscopy and Gene-Xpert MTB/RIF test by tuberculosis smear， and the two test results were compared. Results Among 974 test specimens， the positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was 12% （118/974）， including 93 rifampicin-sensitive specimens and 25 rifampicin-resistant specimens （resistance rate as 21%）. There were 15Acid-positive specimens， with detection positive rate as 2%. The positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was higher than that of acid-fast staining， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Gene-Xpert

MTB/RIF shows excellent clinical application value in diagnosis and treatment of tuberculosis in Tibet， and this method is simple and rapid.

【Key words】 Gene-Xpert MTB/RIF； Mycobacterium tuberculosis； Rifampin； Resistance

在中國(guó)， 結(jié)核病患者高達(dá)130萬(wàn)， 位居世界第二， 是全球22個(gè)結(jié)核高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一[1]。而結(jié)核病治療中耐藥成為嚴(yán)重影響治療效果的問(wèn)題， 在我國(guó)15歲以下人群結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis， MTB）的耐藥率達(dá)6.8%[2]。西藏自治區(qū)結(jié)核病發(fā)病率高， 是因結(jié)核病致貧的重災(zāi)地區(qū)之一， 截止2013年統(tǒng)計(jì)， 西藏自治區(qū)現(xiàn)有結(jié)核桿菌感染者約為80萬(wàn)人， 傳染性肺結(jié)核患者占15642/800000， 81.8%的患者來(lái)自偏遠(yuǎn)農(nóng)牧地區(qū)， 以青壯年為主， 并每年約有360人死于結(jié)核病[3]。結(jié)核病的診斷中， 實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測(cè)成為確診的重要依據(jù)， 是結(jié)核病治療和防治效果評(píng)價(jià)的技術(shù)關(guān)鍵， 是確診耐多藥結(jié)核病的重要依據(jù)。隨著基層醫(yī)院條件及技術(shù)人員的不斷增強(qiáng)， 引進(jìn)的新型檢測(cè)技術(shù)Gene-Xpert MTB/RIF在結(jié)核病的診斷和治療， 提高農(nóng)牧民為主的患者的治愈率， 減輕農(nóng)牧民患者經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)發(fā)揮著重要的作用。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2016年5～12月西藏自治區(qū)人民醫(yī)院門(mén)診及住院974例疑似結(jié)核病患者的痰、尿液、腦脊液、胸腹水等標(biāo)本?；颊吣挲g12～66歲， 其中男562例， 女412例。標(biāo)本類(lèi)型中痰標(biāo)本822例， 積液標(biāo)本84例， 尿標(biāo)本53例， 腦脊液標(biāo)本8例， 腹水標(biāo)本3例， 膿液標(biāo)本2例， 肺泡灌洗液標(biāo)本2例。

1. 2 儀器與試劑 Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)儀器為美國(guó)Cepheid 公司生產(chǎn)的全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)， 試劑名稱(chēng)為Gene-Xpert MTB/RIF試劑盒（批號(hào)：1000029824）。抗酸染色試劑為貝索公司的抗酸染液（批號(hào)：41611）。

1. 3 方法

1. 3. 1 抗酸染色及鏡檢 按照中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》中要求進(jìn)行操作。

1. 3. 2 Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè) 將標(biāo)本（痰、腦脊液、胸腹水等標(biāo)本）與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液常規(guī)按1∶2比

例混合， 震蕩， 室溫靜置15 min， 再將混合液轉(zhuǎn)移至一次性多室塑料反應(yīng)盒中， 置于Gene-Xpert 檢測(cè)儀器進(jìn)行全自動(dòng)檢測(cè)， 約2 h即可在檢測(cè)軟件窗口直接讀取結(jié)果。此反應(yīng)體系中還包含1個(gè)球芽孢桿菌特異性探針作為內(nèi)對(duì)照， 以判斷DNA擴(kuò)增效率及檢測(cè)效率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。endprint

2 結(jié)果

2. 1 Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果 974例檢測(cè)標(biāo)本中， 結(jié)核分枝桿菌聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）陽(yáng)性結(jié)果為118例， 陽(yáng)性率為12%；陽(yáng)性標(biāo)本中， 痰標(biāo)本有109例， 積液有3例， 尿標(biāo)本有6例。118例陽(yáng)性標(biāo)本中， 利福平敏感的標(biāo)本為93例， 利福平耐藥的標(biāo)本為25例（耐藥率為21%）。

2. 2 抗酸染色結(jié)果 974例檢測(cè)標(biāo)本中， 抗酸染色陽(yáng)性標(biāo)本為15例， 陽(yáng)性率為2%。其中13例痰標(biāo)本， 2例尿液標(biāo)本。

2. 3 Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)和抗酸染色結(jié)果比較 Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率為12%， 高于抗酸染色的2%， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

西藏自治區(qū)作為結(jié)核病高發(fā)地區(qū)， 特別在農(nóng)牧民地區(qū)， 結(jié)核病已成為嚴(yán)重危害群眾健康重大疾病， 也是導(dǎo)致群眾生活水平下降的重要因素。為此， 提高診斷技術(shù)， 精確發(fā)現(xiàn)和提供結(jié)核耐藥結(jié)果， 提高結(jié)核治愈率， 減少人際傳播成為阻斷結(jié)核病在西藏地區(qū)進(jìn)一步傳播的重要措施之一。

Gene-Xpert MTB/RIF系統(tǒng)采用半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)， 利福平耐藥相關(guān)rpoB基因?yàn)榘谢颍?采用6種分子信標(biāo)同時(shí)檢測(cè)6種探針， 其中5個(gè)相互重疊的分子探針選擇性覆蓋rpoB基因利福平耐藥決定區(qū)81bp核心區(qū)， 以檢測(cè)利福平耐藥[4-6]。全自動(dòng)醫(yī)用PCR儀， 不受高海拔低氣壓的影響， 可在高原地區(qū)使用。

本研究結(jié)果顯示： 974例檢測(cè)標(biāo)本中， Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率為12%（118/974）， 其中利福平敏感的標(biāo)本為93例， 利福平耐藥的標(biāo)本為25例（耐藥率為21%）?？顾崛旧?yáng)性標(biāo)本為15例， 陽(yáng)性率為2%。Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)陽(yáng)性率高于抗酸染色， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。Gene-Xpert MTB/RIF陽(yáng)性檢出率明顯高于抗酸染色， 適合涂片陰性的患者。采用Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)方法可以發(fā)現(xiàn)94%以上的經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)的結(jié)核病患者， 包括90%以上涂片陰性的患者， 可以大大提高結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷效率[7-10]。

綜上所述， Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單， 生物安全要求較低， 易于在西藏地區(qū)開(kāi)展。但Gene-Xpert MTB/RIF檢測(cè)雖然方便、快捷， 但成本較高， 檢驗(yàn)費(fèi)用較高。在西藏地區(qū)更適用于區(qū)縣級(jí)疾病預(yù)防控制中心， 以免費(fèi)用于當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民的結(jié)核病的診斷和治療。

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[收稿日期：2017-07-18]endprint