江蘇省揚州地區(qū)兒童呼吸道感染病毒病原學調(diào)查分析

程文國, 陳 劍, 劉 艷, 朱新林, 諸 俊

(揚州大學附屬醫(yī)院 揚州市婦幼保健院 檢驗科, 江蘇 揚州, 225002)

江蘇省揚州地區(qū)兒童呼吸道感染病毒病原學調(diào)查分析

程文國, 陳 劍, 劉 艷, 朱新林, 諸 俊

(揚州大學附屬醫(yī)院 揚州市婦幼保健院 檢驗科, 江蘇 揚州, 225002)

目的分析揚州地區(qū)兒童呼吸道感染病毒病原體的感染情況。方法應用直接免疫熒光法檢測2011年1月—2016年12月?lián)P州地區(qū)17 691例呼吸道感染兒童鼻咽分泌物呼吸道腺病毒(ADV)、合胞病毒(RSV)、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(PIV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、流感病毒A/B(IFA/B)病毒抗原并分析其流行病學特征。結(jié)果在17 691例標本中，共檢出病毒陽性標本1 991例，檢出率11.25%(1 991/17 691); 在1 991例陽性標本中, RSV占60.12%(1 197/1 991), 其他依次為PIV Ⅲ 14.27%(284/1 991)、ADV 8.04%(160/1 991)、PIV Ⅰ 5.42%(108/1 991)、IFA 5.27%(105/1 991)、IFB 4.07%(81/1 991)、PIV Ⅱ 2.81%(56/1 991)。RSV檢出率存在性別差異。1月～<1歲組呼吸道病毒檢出病例占總檢出率的59.81%(1 191/1 991); 單項病毒檢出率在4組人群中均居首位。冬季是檢出病毒陽性占比最高的季節(jié)，為51.88%(1 033/1 991); 夏季檢出率最低，為10.35%(206/1 991)。結(jié)論揚州地區(qū)呼吸道病毒感染受年齡、季節(jié)和性別的影響, RSV感染最多見，以1月～<1歲嬰幼兒為主，冬季好發(fā)，并且男性較女性更易感。

呼吸道感染; 兒童; 病毒; 直接免疫熒光法

兒童免疫系統(tǒng)未發(fā)育成熟，比成年人更容易成為細菌、病毒等病原體侵襲的目標。病毒是引

起兒童呼吸道感染的主要病原體之一，其中呼吸道腺病毒(ADV)、合胞病毒(RSV)、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(PIV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、流感病毒A/B(IFA/B)最為常見。本研究納入2011—2016年因呼吸道感染來本院就診的兒童17 691例進行鼻咽拭子7項病毒檢測，對其陽性病例進行病原學特征分析，了解本地區(qū)常見病毒引起兒童呼吸道感染流行特征，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2011年1月—2016年12月因呼吸道感染就診患兒17 691例，男10 631例，女7 060例，年齡3 d～10歲。

1.2 標本采集與處理

使用一次性植絨拭子于清晨采集患兒鼻咽部分泌物，置于有PBS緩沖液的標本采樣管中立即送檢。將采樣管劇烈渦旋震蕩15 s, 500 g離心10 min后棄上清液，再加入PBS緩沖液5 mL, 重復上述步驟3遍，最后加入0.5～1 mL PBS緩沖液，反復吹吸以形成輕微霧狀細胞懸液。

1.3 儀器與試劑

DM500熒光顯微鏡(德國Leica); ADV、RSV、IFA/B、PIV Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ檢測試劑盒(上海貝西生物科技有限公司)。

1.4 檢測方法

采用直接免疫熒光法檢測病毒抗原。采用標記有熒光素的各種呼吸道病毒特異性抗體分別與固定在玻片上的分泌物細胞攜帶的病毒結(jié)合，用熒光顯微鏡觀察，病毒感染的細胞被染上綠色熒光。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行處理，計數(shù)資料用百分比(%)表示病毒檢出情況，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 呼吸道病毒檢出情況

在17 691例標本中，共檢出病毒陽性標本1 991例，檢出率11.25%; 陽性標本中RSV占60.12%(1 197/1 991), 其他依次為PIV Ⅲ占14.27%(284/1 991), ADV占8.04%(160/1 991), PIVⅠ占5.42%(108/1 991), IFA占5.27%(105/1 991), IFB占4.07%(81/1 991), PIV Ⅱ占2.81%(56/1 991)。

2.2 性別與呼吸道病毒檢出率的關(guān)系

男性標本病毒檢出率為11.65%(1 239/10 631); 女性標本病毒檢出率為10.65%(752/7 060)。二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同性別患兒7種呼吸道病毒檢出率僅RSV有顯著差異(P<0.05)。見表1。

表1 不同性別呼吸道病毒檢出情況[n(%)]

與女性比較, *P<0.05。

2.3 年齡與呼吸道病毒檢出率情況的關(guān)系

將1 991例陽性病例按患兒年齡<1月、1月～<1歲、1～3歲、>3歲分組。7種病毒檢出數(shù)在各年齡組間均有顯著差異(P<0.01)。1月～<1歲組檢出數(shù)占總陽性例數(shù)的59.81%(1 191/1 991), 1～3歲組為20.04%(399/1 991), >3歲組為11.25%(224/1 991), <1月新生兒組為8.90%(177/1 991)。見表2。

表2 不同年齡組患兒7項病毒檢出情況[n(%)]

2.4 氣候因素與呼吸道病毒檢出情況

將1 991份陽性標本按揚州地區(qū)氣候變化以春(3～5月)、夏(6～8月)、秋(9～11月)、冬(12月～次年2月)分組，各病毒在不同季節(jié)的檢出情況見表3。

表3 不同季節(jié)各呼吸道病毒檢出情況[n(%)]

3 討 論

由于兒童正處于生長發(fā)育階段，對外界病原體入侵抵抗力較弱，容易誘發(fā)各種感染性疾病，病毒是兒童呼吸道感染最常見的病原體之一[1]。目前，檢測呼吸道病毒主要有PCR法、免疫熒光法檢測抗原、免疫熒光法檢測抗體等多種方法，國內(nèi)報道的檢出率差異較大，高源等[2]報道為26.86%, 劉小乖等[3]報道達68.68%。本研究采用免疫熒光法檢測7種呼吸道病毒抗原，其總陽性率為11.25%(1 991/17 691), 低于國內(nèi)相關(guān)報道，差異可能與采用的檢測方法、檢測病毒的種類、病人的選擇及標本采集的部位等不一致有關(guān)。本研究采用同一種方法、同一種試劑連續(xù)6年檢測，其結(jié)果比較真實地反映了本地區(qū)呼吸道感染兒童7項呼吸道病毒檢出率。本研究結(jié)果顯示男孩7項呼吸道病毒檢出率為11.25%(1 239/10 631), 高于同期女孩檢出率10.65%(752/7 060), 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 與崔小健等[4]報道所得結(jié)論并不一致。就單種病原體看: RSV位居7種病原體檢出率首位，占檢出病毒數(shù)的60.12%(1 197/1 991), 與國外有關(guān)RSV是嬰幼兒急性下呼吸道病毒性感染主要病原體的報道一致[5], 應引起重視。

本研究分析不同年齡呼吸道感染兒童病毒檢出率發(fā)現(xiàn), <1月的新生兒組檢出率最低，為8.90%(177/1 991), 1月～<1歲組是呼吸道病毒主要檢出人群，占總檢出率的59.81%(1 191/1 991); 分單項病毒分析, 1月～<1歲年齡組各項病毒檢出率在4組人群中均居首位，國內(nèi)外有關(guān)報道[3, 6]顯示在呼吸道感染兒童中年齡3歲以下嬰幼兒病毒檢測陽性率最高，與本研究結(jié)果一致，這可能與新生兒與外界環(huán)境接觸少且體內(nèi)含有母體帶來的免疫抗體，病毒感染的幾率相對較少有關(guān), 1月～<1歲組嬰幼兒隨著母體免疫抗體的消失而自身免疫器官處于生長發(fā)育階段，對于外源性病原體的抵抗力較差，容易導致病毒感染，隨著年齡的增長，免疫器官逐漸發(fā)育成熟，機體的抵抗力逐漸增強，病毒的感染率也逐漸下降。

揚州地區(qū)為亞熱帶季風氣候區(qū)，夏季炎熱、冬季寒冷、氣候濕潤。本研究根據(jù)其氣候特點，將全年按12月～次年2月為冬季、3～5月為春季、6～8月為夏季、9～11月為秋季分組，檢出病毒陽性占比最高的季節(jié)是冬季，為51.88%(1 033/1 991), 其次為春季和秋季，夏季檢出率最低，占10.35%(206/1 991), 呼吸道病毒的流行和檢出率受氣候影響明顯，與國內(nèi)外報道一致[7, 8]。按具體病毒看: RSV在冬季的檢出數(shù)顯著超過其他季節(jié)檢出數(shù)，占有絕對優(yōu)勢，為67.25%(805/1 197), 夏季少有病例檢出，檢出率僅為0.75%(9/1 197), 氣溫越高，檢出率越低，表明氣溫是RSV流行傳播的敏感因素。ADV、IFB檢出率最高的季節(jié)均為冬季和春季, IFA是冬季和夏季, PIVⅢ為春季和夏季, PIVⅡ則以春季為主，而PIVⅠ各季節(jié)檢出率無顯著差異(P>0.05), 說明氣候因素對不同種屬的呼吸道病毒流行傳播的影響存在顯著差異。

本研究結(jié)果表明, 1月～<1歲嬰幼兒是揚州地區(qū)呼吸道病毒感染的高發(fā)人群，男性較女性更容易感染病毒，氣候變化明顯影響呼吸道病毒感染流行，但氣候差異對不同病毒檢出率的影響并不一致，溫度、濕度等氣候因數(shù)對呼吸道病毒感染流行的影響還有待探討。

[1] 季偉, 陳正榮, 周衛(wèi)芳, 等. 2005—2011年蘇州地區(qū)急性呼吸道感染住院兒童病原體研究[J]. 中華預防醫(yī)學雜志, 2013, 47(6): 497-503.

[2] 高源, 彭韶. 618例兒童呼吸道感染的病毒病原學分析[J]. 國際兒科學雜志, 2016, 43(4): 326-329

[3] 劉小乖, 李亞絨, 孫欣榮, 等. 小兒急性下呼吸道感染961例病毒檢測與臨床特點分析[J]. 陜西醫(yī)學雜志2012, 41(9): 1132-1134.

[4] 崔小健, 張嘉懿, 沈永明, 等. 14 379例患兒呼吸道感染病原體的檢測結(jié)果分析[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志, 2016, 37(19): 2663-2666.

[5] Collins P L, Chanock R M, Murphy B R. Respiratory syncytial virus[M]. Fields virology. 4th ed. Philadelphia: Lippincott Williams&Wilkins, 2001: 1443-1485.

[6] Carroll K N, Hartert T V. The impact of respiratory viral infection on wheezing illnesses and asthma exacerbations[J]. Immunol Allergy Clin North Am, 2008, 28(3): 539-561.

[7] 季偉, 陳正榮, 郭紅波, 等. 蘇州兒童醫(yī)院住院兒童呼吸道病毒的流行特點及與氣候因素的相關(guān)性研究[J]. 中華預防醫(yī)學雜志, 2011, 45(3): 205-210.

[8] Centers for Disease Control and Prevention(CDC). Respiratory syncytil virus-United States. July 2007-June 2011[J]. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2011, 60(35): 1203-1206.

DetectionofmultipleviralantigensinpediatricpatientswithrespiratoryinfectioninYangzhou

CHENGWenguo,CHENJian,LIUYan,ZHUXinlin,ZHUJun

(LaboratoryDepartment,AffiliatedHospitalofYangzhouUniversity,YangzhouMaternalandChildHealthCareHospital,Yangzhou,Jiangsu, 225002)

ObjectiveTo investigate multiple viral antigens in pediatric patients with respiratory infection in Yangzhou.MethodsA total of 17 691 children with respiratory infection admitted in our hospital between January 2011 and December 2011 were tested with direct immunof-luorescence method. A total of 7 kinds of virus antigens were detected, including adenovirus (ADV), respiratory syncytial virus (RSV), parainfluenza virusⅠ, Ⅱ, Ⅲ(PIV Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ), influenza virus A/B(IFA/B). Its epidemiological characteristics was analyzed.ResultsThere were altogether 1 991 positive cases, the detection rate was 11.25%(1 991/17 691), in which the proportion of RSV was 60.12% (1 197/1991), followed by PIV Ⅲ 14.27% (284/1 991), ADV 8.04%(160/1 991), PIVⅠ5.42% (108/1 991), IFA5.27% (105/1 991), IFB 4.07% (81/1 991), PIVⅡ 2.81% (56/1 991). There was significant difference between male and female in the detection rate of respiratory virus. Respiratory virus detected rate in 1 month to<1 year old was 59.81% (1 191/1 991), single virus detection rate was the highest. The detection rate of virus for positive was the highest in winter, accounting for 51.88%(1 033/1 991), and the lowest in summer for 10.35%(206/1 991).ConclusionRespiratory virus infection in Yangzhou is influenced by age, season and gender, with infants and young children aged 1 month to 1 year in high-risk infection, and RSV infection occurs mostly, and the male are most likely to be infected in winter.

respiratory tract infections; children; viruses; direct immunofluorescence assay

R 373.1

A

1672-2353(2017)19-087-04

10.7619/jcmp.201719025

2017-04-11